A pancreatina é um produto biotecnológico que contém um complexo enzimático obtido do pâncreas suíno, constituído principalmente pela amilase, lipase e protease. A literatura ainda apresenta poucos dados relacionados à estabilidade da pancreatina em formulações. Desta forma, foram realizados experimentos relativos à estabilidade usando o medicamento comercial Creon 10.000 e também o padrão de pancreatina puro e suas misturas binárias empregando 6 excipientes na proporção de 1:1 (m/m). Para isso, as amostras foram armazenadas durante 1, 3 e 6 meses em câmara de estabilidade a 40 ± 1°C e 75 ± 5% de umidade relativa e a 40 ± 1ºC na ausência de umidade. Foram realizados ainda testes de estresse em 5 condições (alta temperatura, pH ácido, pH básico, luz ultravioleta e oxidação forçada) para avaliar o efeito destes fatores na atividade das 3 enzimas que compõe o complexo. O resultado da atividade da α-amilase (%) nas amostras secas armazenadas por 1 mês, mostrou que a sacarose e o manitol foram os que apresentaram menor interação com a enzima sendo observado uma atividade de 78,6 ± 0,9 e 68,2 ± 0,6, respectivamente. Já a atividade da protease (%) nas amostras armazenadas nas mesmas condições descritas anteriormente, mostrou que a celulose foi o excipiente de menor interação com a enzima (atividade de 11,0 ± 0,5). Em relação à lipase (%), o estearato de magnésio foi o excipiente de menor interação com esta enzima apresentando uma atividade de 66,0 ± 0,8. Por outro lado, a umidade apresentou-se como um fator de forte influência na perda de atividade da α-amilase e protease, porém a atividade da lipase não foi significativamente afetada (88,8 ± 0,9% na mistura com sacarose). O estudo no biofármaco Creon 10.000, mostrou uma diminuição significativa da atividade da α-amilase (68%), lipase (77%) e protease (58%) nas amostras em pó armazenadas por 3 meses à 40ºC e 0% de umidade relativa. Nos resultados dos testes de estresse foi observado que o pH 9,0 e a luz UV não provocaram alterações significativas na atividade da α-amilase. Por outro lado, a lipase sofreu perdas consideráveis de atividade (inferiores a 32%) em todas as condições avaliadas. Os dados mostraram que características dos excipientes e condições de armazenamento afetam a estabilidade da enzima e, consequentemente, sua atividade. Todas as amostras geradas neste trabalho foram analisadas empregando-se espectrofotometria UV/Vis, que é uma técnica recomendada pelo ICH para avaliação de estabilidade de biofármacos. / Pancreatin is a biotechnological product containing an enzyme complex obtained from porcine pancreas, constituted mainly by amylase, lipase and protease that are used for digestive treatment. In literature, a few data related to pancreatin stability in pharmaceutical formulations is available. Thus, experiments were performed concerning the stability of the commercial product "Creon 10,000”, standard pancreatin and its binary mixtures with 6 excipients in the proportion of 1:1 (w/w). In order to accomplish these goals, the samples were subjected to storage during 1, 3 and 6 months using stability camera under two different conditions: at 40 ± 1°C and 75 ± 5% relative humidity and 40 ± 1°C in absence of moisture. Stress testing on 5 conditions (high temperature, acidic pH, alkaline pH, ultraviolet light and forced oxidation) was also performed. In these cases, the consequences in all three enzymes activity were evaluated. α-Amylase activity in samples stored for 1 month in absence of moisture has showed that saccharose and mannitol are the excipients that interact in lower levels with this enzyme (activity of 78.6 ± 0.9% and 68. 2 ± 0.6%, respectively). The protease activity in same condition described previously, has showed cellulose as the excipient that presents minor interaction with this enzyme (activity of 11.0 ± 0.5% was found). Regarding to lipase activity, the magnesium stearate exhibited inferior interaction with this enzyme, once it preserved 66.0 ± 0.8% of activity level. Humidity showed itself as a strong influencing factor in the reduction of α-amylase and protease activities; however, the lipase activity was not significantly affected (88.8 ± 0.9% in the mixture with saccharose). The enzymatic stability study of the biopharmaceutical Creon 10.000 as powdered samples, after 3 months of storage at 40° and 0% relative humidity showed a significant decrease in activity for α-amylase (68%), lipase (77%) and protease (58%). Through the stress testing, it could be observed that pH 9.0 and UV light did not induce great alterations in the α-amylase activities. On the other hand, the lipase suffered considerable activity decrease under all conditions evaluated (less than 32%). The results reveal that the excipients characteristics as well as the storage conditions affect the enzymes stability and consequently their activities. In these works, all samples generated were analysed employing spectrophotometry UV/Vis, which is recommended by the ICH for stability studies of biopharmaceuticals products.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:10.254.254.39:tede/772 |
| Date | 27 November 2015 |
| Creators | TERRA, Gleysson de Paula |
| Contributors | TREVISAN, Jerusa Simone Garcia, http://lattes.cnpq.br/8976306450816308, TREVISAN, Marcello Garcia, LUIZ, Jaine Honorata Hortolan, KLASSEN, Aline |
| Publisher | Universidade Federal de Alfenas, Instituto de Química, Brasil, UNIFAL-MG, Programa de Pós-Graduação em Química |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UNIFAL, instname:Universidade Federal de Alfenas, instacron:UNIFAL |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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