CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A vitamina A (retinol) Ã um nutriente essencial necessÃrio em pequenas quantidades
para o funcionamento normal do sistema visual, funÃÃo imune e reproduÃÃo. Nosso
grupo de pesquisa investigou o efeito de altas doses por via oral em crianÃas com
diarrÃia em estudos prospectivos em comunidade em Ãreas endÃmicas no Nordeste do
Brasil e encontrou benefÃcios terapÃuticos com a utilizaÃÃo do retinol na reduÃÃo da
mÃdia de duraÃÃo da diarrÃia, porÃm nÃo houve diminuiÃÃo da incidÃncia de episÃdios
diarrÃicos. Esse estudo explorou o papel da suplementaÃÃo do retinol em linhas de
cÃlulas intestinais frente ao dano citotÃxico da Toxina A do C. difficile (TxA). O C.
difficile à principal patÃgeno causador da diarrÃia associada ao uso de antibiÃticos e da
colite pseudomembranosa. Investigou-se alteraÃÃes da resistÃncia elÃtrica
transepitelial (TER) em cÃlulas Caco-2, e nos modelos de proliferaÃÃo, migraÃÃo e
morte celular em IEC-6, apÃs a injÃria induzida pela TxA. Os resultados mostraram que
a suplementaÃÃo do retinol, principalmente no meio sem glutamina, aumentou a TER,
migraÃÃo celular, como tambÃm promoveu uma reduÃÃo significativa da apoptose e
necrose, porÃm este efeito nÃo foi visto no modelo de proliferaÃÃo celular. Para
estudar a modulaÃÃo do retinol na diminuiÃÃo da TER induzida pela TxA, as cÃlulas
foram expostas a TxA (0,1μg/mL) durante 24h. O retinol aumentou a TER (% do valor
inIcial) nas concentraÃÃes de 0,1 e 0,3nM Ãs 3h (59,3Â1,3; 69,8Â0,6vs
59,3Â1,3Ωcm2,respectivamente), e Ãs 4h (36,1Â0,02; 33,5Â1,8 vs
27,3Â0,2Ωcm2,respectivamente) em relaÃÃo ao controle sem retinol e com TxA.
Nesses intervalos de tempo nÃo houve influÃncia da proliferaÃÃo celular nas cÃlulas
Caco-2. O retinol aumentou a proliferaÃÃo celular na lesÃo induzida pela TxA
(0,1μg/mL) em 14,2; 23,8; 59,8; 8,4; 30,2; 44,1% (0,01; 0,03; 0,1; 1,0; 10; 100nM de
retinol, respectivamente), apÃs 24h comparado com controle com TxA. Depois de 12 e
24h de exposiÃÃo a TxA (0,01μg/mL), seguido do arranhÃo na monocamada da cÃlulas
IEC-6, a suplementaÃÃo do retinol aumentou significantemente a migraÃÃo nas
concentraÃÃes de 0,1-100nM em uma taxa de 30-80% e 60-100%, nas 12h e 24h,
respectivamente. O retinol reduziu a apoptose e a necrose induzida pela TxA nas
concentraÃÃes de 0,03-100nM, em comparaÃÃo com controle com a TxA. Os
resultados sugerem que o retinol exerce um importante papel na reduÃÃo da apoptose,
em aumentar a migraÃÃo e proliferaÃÃo e em prevenir a reduÃÃo da TER, na lesÃo pela
TxA, sugerindo que a vitamina A Ã um nutriente essencial na proteÃÃo na barreira
funcional epitelial / Vitamin A (retinol) is an essential nutrient that is necessary in small amounts for normal
functioning of the visual system, immune function and reproduction. Our group has
investigated the effect of oral dosis of vitamin A on the early childhood diarrhea in our
prospective community-based studies in high endemic areas in the Northeast of Brazil
and has found a benefit of retinol therapy in reducing the mean duration but not the
incidence of diarrheal episodes. In this study, we have explored the role of retinol
supplementation in intestinal cell lines, following Clostridium difficile toxin A (TxA)
cytotoxic challenge. C. difficile is the most common anaerobic pathogen that causes
antibiotic-associated diarrhea and pseudomembranous colitis. We have focused on
changes in transepithelial electrical resistance (TER) in Caco-2, a more differentiated
intestinal cell line, and on models of proliferation, migration and cell death in IEC-6
cells, an undifferentiated crypt cell line, following or not by TxA-induced cell injury. The
results showed retinol alone increased the TER, cell migration and proliferation, and
also promoved significant reduction of apoptosis and necrosis, however this effect was
not observed at the cell proliferation. To study the retinol effect on the TxA-induced
loss of TER, cells were exposed during 24h to 0,1μg/mL TxA. Retinol improved TER (%
of initial value) at the concentrations of 0,1nM and 0,3nM at 3h (59,3Â1,3; 69,8Â0,6 vs
59,3Â1,3Ωcm2, respectively), and at 4h (36,1Â 0,02; 33,5Â 1,8 vs 27,3Â0,2Ωcm2,
respectively) in relation to the untreated control challenged with TxA. During this time
there was no influence of the cell proliferation in the Caco-2 cells. Retinol increased cell
proliferation after TxA-induced cell damage (0,1μg/mL) at a rate of 14,2%, 23,8%,
59,8%; 8,4%; 30,2%; 44,1% after 24h (doses of 0,01; 0,03; 0,1; 1,0; 10; 100nM of
retinol, respectively), compared to controls only with TxA. After 24h of TxA exposure
(0,01μg/ml), following plate scraping, the retinol supplementation improved significantly
IEC-6 migration at the concentrations of 0,1-100nM in rate of 30-80% and 60-100%, in
12h and 24h, respectively. Retinol reduced TxA-induced apoptosis and necrosis at the
concentration of 0,03: 0,1; 1; 10 and 100nM, p<0.05, in comparison to the control with
TxA. These results suggest that retinol has a critical role in reducing apoptosis,
improving cell migration and proliferation and preventing the reduction in TER, following
TxA challenge, suggesting that vitamin A is an essential nutrient to protect the intestinal
epithelial barrier function
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:758 |
| Date | 27 July 2007 |
| Creators | Andressa Aby Farraj Linhares Maciel |
| Contributors | Aldo Ãngelo Moreira Lima, Helena Serra Azul Monteiro, Reinaldo Barreto Orià |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Farmacologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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