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Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Uma vacina efetiva contra a leishmaniose visceral (LV) canina pode contribuir para o
controle da doença no homem. Visando o desenvolvimento de uma vacina contra LV
canina, antígenos recombinantes de L. infantum foram selecionados em nosso
laboratório pelo uso de uma mistura de soros de seres humanos ou cães naturalmente
infectados pela L. infantum. Alguns destes antígenos foram testados em diversos
protocolos de imunização, incluindo uso de diferentes adjuvantes, em camundongos ou
cães. A imunização de camundongos ou cães com um dos antígenos recombinantes
(rLci2B) usado isoladamente ou em associação com saponina induziu resposta imune
Th2 ou Th1/Th2, respectivamente, não protetoras contra a infecção experimental. Com a
determinação da sequência deduzida de aminoácidos notou-se que a maioria dos
antígenos selecionados apresenta um segmento com sequência de aminoácidos única
(domínio não repetitivo) e segmentos com sequência de aminoácidos com motivos
repetitivos (domínios repetitivos). Possivelmente a incapacidade dos antígenos
recombinantes de induzir uma resposta imune predominantemente Th1, protetora contra
a LV, seria por conta da presença de domínios repetitivos, que favorecem a
apresentação antigênica por linfócitos B e, consequentemente, estimulam uma resposta
imune Th2. Para avaliar o direcionamento da resposta imune pelos dois tipos de
domínio, novas construções de DNA foram concebidas de modo a codificar apenas
domínio(s) não repetitivo(s) ou domínio(s) não repetitivo(s) e domínios repetitivos.
OBJETIVOS: Produzir quatro proteínas recombinantes com domínios não repetitivos
(rLci2-NT-CT, rLci3-NT-CT, rLci10-NT e rLci12-NT-CT) e avaliar a capacidade desses
polipeptídios de induzir resposta imune celular in vitro em cães assintomáticos
inoculados por via dérmica com L. infantum. MATERIAIS E MÉTODOS: Foram
realizadas: a) a subclonagem de construções de DNA (Lci3-NT-CT, Lci10-NT e Lci12-
NT-CT) em um plasmídeo apropriado para expressão em Escherichia coli, b) a
determinação de condições apropriadas para produção das proteínas recombinantes
(rLci2-NT-5R-CT, rLci2-NT-CT, rLci3-NT-2R-CT, rLci3-NT-CT, rLci10-NT-2R e rLci10-
NT) c) a purificação das proteínas recombinantes por cromatografia de afinidade e d)
avaliação da capacidade dos polipeptídios de induzir estimulação de células
mononucleares sangue periférico (PBMC) de cães assintomáticos inoculados por via
dérmica com L. infantum. RESULTADOS: Três (rLci2-NT-CT, rLci2-NT-5R-CT, rLci3-
NT-CT, rLci3-NT-2R-CT, rLci10-NT e rLci10-NT-2R) dos quatro pares de polipeptídios
recombinantes foram expressos, produzidos e purificados. Três antígenos
recombinantes (rLci2-NT-5R-CT, rLci2-NT-CT e rLci3-NT-2R-CT) promoveram a
linfoproliferação in vitro utilizando PBMC de cães assintomáticos inoculados por via
dérmica com L. infantum CONCLUSÕES: Três das seis proteínas produzidas induziram
a linfoproliferação, sendo a maior linfoproliferação encontrada para PBMC estimulado
com a proteína sem domínios repetitivos (rLci2-NT-CT). Avaliações adicionais são
necessárias para comprovar a utilidade destas moléculas em formulação de vacina
contra leishmaniose visceral canina. / An effective vaccine against visceral leishmaniasis (VL) dog can help to control the
disease in man. Aiming at development of a vaccine against canine VL, recombinant
antigens of L. infantum were selected in our laboratory by using a mixture of sera from
humans or dogs naturally infected with L. infantum. Some of these antigens were tested
in different immunization protocols, including use of different adjuvants in mice or dogs.
The immunization of mice or dogs with a recombinant antigens (rLci2B) used alone or in
combination with saponin induced Th2 response or Th1 / Th2, respectively, did not
protective against experimental infection. With the determination of the deduced amino
acid sequence it was noted that most of the antigens selected segment has a unique
amino acid sequence (non-repetitive domain) and segments of amino acid sequence
with repetitive motifs (repetitive domains). Possibly the inability of recombinant antigens
to induce an immune response predominantly Th1 protective against LV would be due to
the presence of repetitive domains that promote antigen presentation by B cells and thus
stimulate an immune response Th2. To assess the direction of the immune response by
two types of domain, new DNA constructs were designed to encode only the domain (s)
not repetitive (s) or domain (s) not repetitive (s) and repetitive fields. MATERIALS AND
METHODS: Were performed: a) subcloning DNA constructs (rLci3-NT-CT, rLci10-NT
and rLci12-NT-CT) into a suitable plasmid for expression in Escherichia coli, b)
determining the appropriate conditions for the production of proteins recombinant (rLci2-
NT-5R-CT, rLci2-NT-CT, rLci3-NT-2R-CT, rLci3-NT-CT, rLci10-NT-2R and rLci10-NT) c)
purification of recombinant proteins by chromatography affinity d) evaluating the ability of
polypeptides rLci2-NT-CT, rLci3-NT-CT and rLci10-NT to induce stimulation of peripheral
blood mononuclear cells (PBMC) from healthy dogs inoculated dermal with L. infantum.
RESULTS: Three (rLci2-NT-CT, rLci2-NT-5R-CT, rLci3-NT-CT, rLci3-NT-2R-CT, rLci10-
NT and rLci10-NT-2R) of the four pairs of recombinant polypeptides are expressed,
produced and purified. Three recombinant antigens (rLci2-NT-5R-CT, rLci2-NT-CT and
rLci3-NT-2R-CT) promoted lymphocyte proliferation in vitro using asymptomatic dogs
PBMC inoculated dermal L. infantum CONCLUSIONS: Three of the six proteins
produced induced lymphoproliferation, most lymphoproliferation was found to PBMC
stimulated with the protein without repetitive domains (rLci2-NT-CT). Additional
evaluations are necessary to confirm the utility of these molecules against canine
visceral leishmaniasis vaccine formulation
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/14161 |
| Date | January 2016 |
| Creators | Mendes, Jéssica Mariane Ferreira |
| Contributors | Pinheiro, Cristiane Gabborgine Melo de, Farias, Leonardo Paiva, Pacheco, Luis Gustavo Carvalho, Bessa, Theolis Costa Barbosa, Oliveira, Geraldo Gileno de Sá |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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