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Previous issue date: 2005-09-23 / Universidade Federal de Minas Gerais / In this work, analytical flow procedures were developed using multicommutation
concept and chemiluminescent detection for the determination of hydrogen
peroxide, glucose and cholesterol in food, biochemistry and pharmaceutical
samples. A personal computer Pentium 233 MHz equipped with PCL 711S
interface was employed to control the flow manifold and data acquisition. The
detection module consist of a flow-cell constructed with a coiled polyethylene
tubing (0.8 mm i.d.), a silicon photodiode (OSD-50E) and an electronic device
(model FAC 500) for signals conditioning and amplification, are devices were
placed in a dark box. The manifold and detection module were characterized by
hydrogen peroxide determination in pharmaceutical samples, monitoring the
radiation produced in the chemiluminescent reaction between luminol, H2O2 and
hexacyanoferrate(III). The analytical curve obtained was linear in the hydrogen
peroxide concentration ranging from 2.2 x 10-6 to 2.1 x 10-4 mol L-4 and the
detection limit obtained was 1.8 x 10-6 mol L-1. In the procedures for glucose
determination in food, pharmaceutical and biochemical samples, a solid-phase
reactor containing glucose oxidase immobilized in glass beads was employed. The
hydrogen peroxide generated in this enzymatic reaction was monitored by
chemiluminescent emission produced by the luminol/hexacyanoferrate(III)
reaction. The proposed procedure showed linear response from 5.0 to 160.0 mg
L-1 and a sampling rate of 160 samples per hour was obtained. The analytical
procedure was employed with success in the glucose determination in honey,
glucose pharmaceutical formulation, grape and tomato juices. For glucose
determination in blood serum, the manifold was reconfigured to minimize the
sample manipulation. The results obtained in the glucose determination in serum
using this proposed procedure are in close agreement with those obtained using
the comparative procedure at a confidence level of 95%. In the proposed
procedure for cholesterol determination in eggs a solid-phase reactor containing
immobilized cholesterol oxidase was used, the hydrogen peroxide produced was
monitored by the same chemiluminescent reaction. The linear range of analytical
curve obtained in optimized procedure ranged from 250 to 2500 mg L-1, and are
described by the equation: Intensity (mV)= 43.0 + 0.325 x [cholesterol], r= 0.999,
The luminol and hexacyanoferrate(III) consumption per determination were 356 µg
and 2.64 mg, respectively. The manifold was reconfigured for cholesterol
determination in serum. The results obtained were in agreement with those
obtained using the comparative procedure. Extraction and pre-purification of
enzyme peroxidase were carried out with the purpose of employing this enzyme
as a catalyst in the chemiluminescent reaction between the luminol and hydrogen
peroxide. / No presente trabalho, foram desenvolvidos procedimentos analíticos em fluxo
empregando o conceito de multicomutação e detecção por quimiluminescência
para a determinação de peróxido de hidrogênio, glicose e colesterol em amostras
alimentícias, bioquímicas e farmacêuticas. Para o controle do módulo de análise e
a aquisiçãode dados foi empregado um microcomputador Pentium 233 MHz
equipado com uma interface eletrônica (PCL-711S), através de programas em
linguagem Lab-View 6.0. O módulo de detecção consistiu de uma cela de fluxo de
polietileno (em espiral), um fotodiodo de silício (OSD-50E) e um dispositivo
eletrônico (modelo FAC 500), para condicionamento e amplificação dos sinais,
que foram acondicionados dentro de uma caixa plástica. O módulo de análise e
detecção foi caracterizado e empregado inicialmente na determinação de H2O2
em amostras farmacêuticas, monitorando-se a quimiluminesência produzida na
reação entre o luminol, H2O2 e hexacianoferrato(III) de potássio. A curva analítica
apresentou uma linearidade entre 2,2 x 10-6 a 2,1 x 10-4 mol L-4 e limite de
detecção estimado em 1,8 x 10-6 mol L-1. Nos procedimentos para a determinação
de glicose em amostras alimentícias, farmacêuticas e bioquímicas, foi acoplado
no percurso analítico, um reator enzimático contendo a enzima glicose oxidase
imobilizada. O H2O2 gerado na reação enzimática foi monitorado pela
quimiluminescência gerada na reação entre o luminol e hexacianoferrato(III) de
potássio. Após a otimização do procedimento analítico, obteve-se uma faixa linear
de resposta de 5,0 a 160,0 mg L-1 e uma freqüência de amostragem de 160
determinações por hora. O procedimento analítico foi empregado com sucesso
na determinação de glicose em mel, soro glicosado, suco de uva e suco de
tomate. Para a determinação de glicose em plasma sanguíneo, o modulo de
análise foi reconfigurado, a fim de se minimizar a manipulação da amostra. Os
resultados obtidos na determinação de glicose em plasma sanguíneo,
empregando o procedimento proposto, foram concordantes com o método
comparativo a um nível de confiança de 95%. No procedimento analítico para a
determinação de colesterol em ovos foi empregado um reator enzimático, no
percurso analítico, contendo a enzima colesterol oxidase imobilizada, o H2O2 foi
também monitorado pela reação quimiluminescente. A linearidade de resposta
obtida, após a otimização do sistema em fluxo, foi de 250 a 2500 mg L-1 descrito
pela equação: Intensidade (mV)= 43,0 + 0,325*[colesterol], R= 0,999, com
consumo de 356 µg e 2,64 mg de luminol e hexacianoferrato (III) de potássio por
determinação. O modulo de análise foi reconfigurado para a determinação de
colesterol em plasma sangüíneo, apresentando resultados concordantes com o
método comparativo. Foram realizados também estudos de extração e prépurificação
da enzima peroxidase, catalisador da reação quimiluminescente, entre
o luminol e H2O2.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufscar.br:ufscar/6071 |
| Date | 23 September 2005 |
| Creators | Leite, Oldair Donizeti |
| Contributors | Fatibello Filho, Orlando |
| Publisher | Universidade Federal de São Carlos, Programa de Pós-graduação em Química, UFSCar, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSCAR, instname:Universidade Federal de São Carlos, instacron:UFSCAR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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