As bactérias usam proteínas intracelulares de estocagem de ferro (ferritinas) que permitem acesso ao metal quando está em baixa quantidade. Neste trabalho, o papel das ferritina Bfr e Dps foi estudado através da análise de fenótipo de linhagens mutantes, e sua regulação foi estudada utilizando o gene repórter lacZ, em ensaios de atividade de <font face=\"Symbol\">b-galactosidase. Os resultados mostraram aumento de expressão de bfr em excesso de ferro, e que este gene é positivamente regulado por Fur. A expressão de dps teve aumento em carência de ferro e na fase estacionária. Ensaios de expressão nas linhagens mutantes <font face=\"Symbol\">DoxyR, <font face=\"Symbol\">DsRNA1 e <font face=\"Symbol\">DsRNA2, mostraram diferenças nos níveis de expressão em comparação aos atingidos na linhagem selvagem. O fator sigma ECF SigJ é importante para níveis máximos de expressão de bfr e o fator SigT para máxima expressão de dps. Foram deletadas as regiões codificadoras de bfr e dps separadamente, ou ambas. Os resultados mostraram que o mutante <font face=\"Symbol\">Ddps e o mutante duplo apresentaram maior sensibilidade a H2O2, tendo a linhagem <font face=\"Symbol\">Dbfr padrão similar à linhagem NA1000. O ensaio de quantificação de ferro mostrou que as ferritinas têm papel equivalente na estocagem de ferro intracelular. / Bacteria utilize intracellular iron storage proteins (ferritins) that allow access to the metal when it is present in low amount. In this study the role of ferritins Bfr and Dps was studied by analyzing the phenotype of mutant strains, and their regulation was studied using the lacZ reporter gene, in <font face=\"Symbol\">b-galactosidase activity assays. The results showed increased expression of bfr in iron excess, and that this gene is positively regulated by Fur. dps expression was increased under iron deficiency and in the stationary phase. Expression assays in the mutant strains <font face=\"Symbol\">DoxyR, <font face=\"Symbol\">DsRNA1 and <font face=\"Symbol\">DsRNA2 showed differences in expression levels compared to wild type. ECF sigma factor SigJ is important for maximum levels of bfr expression and SigT for maximal dps expression. The coding regions of bfr, dps or both have been deleted. The results showed that the <font face=\"Symbol\">Ddps and double mutant strains showed increased susceptibility to H2O2, and <font face=\"Symbol\">Dbfr showed a similar pattern to the NA1000 strain. The iron concentration determination showed that both ferritins play equivalent roles in intracellular iron storage.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-09112012-113033 |
| Date | 13 July 2012 |
| Creators | Rodrigues, Mirian Molnar |
| Contributors | Marques, Marilis do Valle |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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