Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The immunostimulatory properties of inactivated parapoxvirus ovis (iPPVO) have been
investigated in different animal species and experimental settings. This study investigated the
effects of administration of iPPVO on selected events of the innate response in mice.
Neutrophil activation, phagocytic activity of macrophages, serum bactericidal activity,
induction and antiviral activity of interferon type I (IFN - I) and expression of several classes
of cytokines were assayed following intraperitoneal inoculation of Mus musculus with iPPVO
(107 TCID50). Serum from iPPVO-treated animals showed IFN-I activity against murine
encephalomyocarditis virus (EMCV) between 6 and 12 hours post infection (hpi), as shown
by plaque reduction. A significant activation of neutrophils at 6hpi was observed by NBT
reduction test in animals treated with the iPPVO. Peritoneal macrophages from mice treated
with iPPVO demonstrated a significant increase (p<0.01) in phagocytic activity against
Candida albicans both in vivo (between 12 and 96 hpi) and in vitro (24 and 72 hpi). iPPVO
treated mice showed increased serum bactericidal activity against Escherichia coli (p<0.05) at
two periods (24 and 72 hpi). A second study evaluated the expression of cytokines in response
to inoculation of iPPVO. For this, spleens and serum samples were collected from mice
treated with iPPVO at different intervals after inoculation and subjected to quantification of
messenger RNA (mRNA) by real time PCR (qRT-PCR) and detection/quantification of serum
cytokines by ELISA. Quantification of mRNA identified a significant and transient increase
in the expression of various cytokines, with variable magnitude and kinetics. mRNA
expression of proinflammatory cytokines (IL-1β, TNF-α and IL-8) peaked at 24 hpi (5.4 times
increase) and 48 hpi (3 and 10 times, respectively). A 15-fold increase in expression of INF-γ
and 6-fold for IL-12 was observed at 48 and 24 hpi, respectively. An increase in the
expression of self-regulatory cytokines (Th2) cells, especially IL-10 and IL-4 was detected at
later periods (72 and 96 hpi) with peaks of 4.7 and 4.9 fold, respectively. The determination
of the concentration of serum cytokines by ELISA showed an increase in IL-1β, TNF-α, IL-
12, IFN-γ and IL-10 with kinetics similar to that observed by qPCR, especially for IL-1 and
INF-γ. In summary, these results demonstrate that inoculation with iPPVO stimulates
transiently a number events associated with cellular and humoral innate immune responses. If
taken together, these effects would likely contribute for the enhanced resistance to certain
pathogens observed in animals treated with iPPVO. / As propriedades imunoestimulatórias do Parapoxvirus ovis inativado (iPPVO) têm sido
verificadas em diferentes espécies animais e condições experimentais. No presente trabalho
foram investigados os efeitos da administração do iPPVO sobre eventos da resposta inata de
camundongos. Ativação de neutrófilos, atividade fagocítica de macrófagos, atividade
bactericida do soro, indução e atividade antiviral do interferon tipo I (INF-I) e expressão de
várias classes de citocinas foram investigados em diferentes intervalos após inoculação de
Mus musculus pela via intraperitonial com iPPVO (dose 107 TCID50). O soro de animais
tratados com iPPVO apresentou atividade de INF-I frente ao vírus da encefalomiocardite
murina (EMCV) entre 6 e 12 horas pós inoculação (hpi), como demonstrado pela redução
significativa de formação de placas virais. Uma significativa ativação dos neutrófilos
circulantes foi observada pela técnica de redução do NBT em animais tratados com o iPPVO
às 6 hpi. Macrófagos peritoneais de camundongos tratados com iPPVO demonstraram um
aumento significativo (p<0,01) na atividade fagocítica frente a Candida albicans tanto in
vivo (entre 12 e 96 hpi) quanto in vitro (24 e 72hpi). Camundongos tratados com iPPVO
apresentaram aumento na atividade bactericida do soro frente à Escherichia coli (p<0,05) em
dois períodos avaliados (24 e 72 hpi). Um segundo estudo avaliou a expressão de citocinas em
resposta à inoculação do iPPVO. Para isso, amostras de baço e soro foram coletados de
camundongos tratados com iPPVO em diferentes intervalos após a inoculação e submetidas a
quantificação de RNA mensageiro (RNAm) por PCR em tempo real (qRT-PCR) e
detecção/quantificação de citocinas no soro por ELISA. A quantificação de RNAm permitiu
detectar um aumento significativo e transitório da expressão de várias citocinas, com
magnitude e cinética variáveis. A expressão de RNAm das citocinas pró-inflamatórias (IL-1β,
TNF-α e IL-8) atingiu o pico às 24 hpi (aumento de 5,4 vezes), 48 hpi (3 e 10 vezes,
respectivamente). Um aumento de 15 vezes na expressão gênica do INF-γ, e de 6 vezes para
a IL-12 foi observado às 48 e 24 hpi, respectivamente. Um incremento na expressão das
citocinas auto-regulatórias (Th2), principalmente IL-10 e IL-4, foi detectado em períodos
mais tardios (72 e 96 hpi) com picos de 4,7 e 4,9 vezes, respectivamente. A determinação da
concentração das citocinas séricas por ELISA revelou um aumento nos níveis de IL-1β, TNF-
α, IL-12, INF-γ e IL-10, com uma cinética similar à observada pela técnica de qPCR,
especialmente para IL-1β e INF-γ. Em resumo, esses resultados demonstram que o tratamento
com iPPVO estimula de forma significativa e transitória uma série de eventos celulares e
humorais ligados à resposta imune inata. Esses efeitos, se considerados em conjunto,
provavelmente contribuem para o aumento da magnitude da resposta imunológica a certos
patógenos observada em animais tratados com o iPPVO.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsm.br:1/4090 |
| Date | 08 November 2013 |
| Creators | Anziliero, Deniz |
| Contributors | Weiblen, Rudi, Flores, Eduardo Furtado, Scherer, Charles Fernando Capinos, Leal, Daniela Bitencourt Rosa, Lima, Marcelo de |
| Publisher | Universidade Federal de Santa Maria, Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, UFSM, BR, Medicina Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSM, instname:Universidade Federal de Santa Maria, instacron:UFSM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 500500000007, 400, 300, 300, 300, 300, 300, 300, 02776f4b-7154-4d1a-9f55-d68a031b94bc, 7c1ce42c-f8b0-4144-9460-4a62785060c9, fc942c69-bbbf-43f4-a567-55f21b90fd14, 414b0a2f-a2c9-40ab-92b8-a7ae8a88cb55, 57c82517-f994-4a9f-abc3-df1ffe4a214d, cc49bcf9-df7b-4e2e-8cdc-fd1ad6226e3b |
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