Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-04T13:11:29Z No. of bitstreams: 1 Rosana Leo de Santana.pdf: 693786 bytes, checksum: b9d2b7d60669ce82e4b87ed63463daad (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-04T13:11:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosana Leo de Santana.pdf: 693786 bytes, checksum: b9d2b7d60669ce82e4b87ed63463daad (MD5) Previous issue date: 2008-02-28 / Contagious ectima is a severe and proliferartive virus among ovine and caprine caused by the contagious ectima virus (ECV) of the Parapoxvirus genus. The control of the infection in endemic regions is done with vaccines, however there are limitations in the vaccine production due to the difficulties in replicating the virus in cell cultures. The purpose of this paper is to evaluate the behavior of ECV samples in primary cultures of fetal caprine cornea cells, a system of cultures yet untested for the replication of ECV. Crust samples from nine sheep and two goats from the states of Bahia, Sergipe and Paraiba and presenting the clinical symptoms of EC were inoculated in monolayers of the cells, during seven consecutive passages at weekly intervals. During all the occasions we observed, after 24 hours of infection, the cytopathic effect (CE) characterized by cell rounding, fusion with the formation of small sincicia, cytoplasmatic inclusion and vacuolation. The intensity of detachment from the cell layers ranged from 25% to 100% which varied according to the sample. We concluded that the primary cell cultures of the fetal caprine cornea appeared highly permissible to replication of ECV and the isolated samples of ECV appeared to adapt to the utilized culture with slight variation among samples. / Ectima contagioso (EC) é uma virose aguda e proliferativa de ovinos e caprinos, causada pelo vírus do ectima contagioso (ECV), do gênero Parapoxvirus. O controle da infecção em regiões endêmicas é realizado através de vacinação, porém existem limitações nas técnicas de produção de vacinas, que é a dificuldade de replicação do vírus em cultivo celular. Este trabalho foi conduzido com o objetivo de isolar e avaliar o comportamento das amostras de ECV em cultivo primário de células de córnea fetal caprina (CFC), sistema de cultivo ainda não testado para replicação de ECV. Amostras de crostas de nove ovinos e de dois caprinos que apresentavam sintomatologia clínica de EC, originários dos Estados da Bahia, Sergipe e Paraíba, foram inoculadas em monocamadas de células epiteliais de córnea de feto caprino, durante sete passagens consecutivas, a intervalos semanais. Observou-se em todas passagens, a partir de 24 horas pós infecção, efeito citopático (ECP) caracterizado pelo arredondamento celular, fusão com formação de pequenos sincícios, vacuolização e corpúsculos de inclusão citoplasmático, com intensidade de 25% a 100% de desprendimento da camada celular, que variou de acordo com a amostra. Conclui-se que as culturas de células primárias de córnea fetal caprina mostraram-se altamente permissíveis à replicação do ECV e que as amostras de ECV isoladas mostraram-seadaptadas ao cultivo utilizado, com pequena variação entre as amostras.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The immunostimulatory properties of inactivated parapoxvirus ovis (iPPVO) have been investigated in different animal species and experimental settings. This study investigated the effects of administration of iPPVO on selected events of the innate response in mice. Neutrophil activation, phagocytic activity of macrophages, serum bactericidal activity, induction and antiviral activity of interferon type I (IFN - I) and expression of several classes of cytokines were assayed following intraperitoneal inoculation of Mus musculus with iPPVO (107 TCID50). Serum from iPPVO-treated animals showed IFN-I activity against murine encephalomyocarditis virus (EMCV) between 6 and 12 hours post infection (hpi), as shown by plaque reduction. A significant activation of neutrophils at 6hpi was observed by NBT reduction test in animals treated with the iPPVO. Peritoneal macrophages from mice treated with iPPVO demonstrated a significant increase (p<0.01) in phagocytic activity against Candida albicans both in vivo (between 12 and 96 hpi) and in vitro (24 and 72 hpi). iPPVO treated mice showed increased serum bactericidal activity against Escherichia coli (p<0.05) at two periods (24 and 72 hpi). A second study evaluated the expression of cytokines in response to inoculation of iPPVO. For this, spleens and serum samples were collected from mice treated with iPPVO at different intervals after inoculation and subjected to quantification of messenger RNA (mRNA) by real time PCR (qRT-PCR) and detection/quantification of serum cytokines by ELISA. Quantification of mRNA identified a significant and transient increase in the expression of various cytokines, with variable magnitude and kinetics. mRNA expression of proinflammatory cytokines (IL-1β, TNF-α and IL-8) peaked at 24 hpi (5.4 times increase) and 48 hpi (3 and 10 times, respectively). A 15-fold increase in expression of INF-γ and 6-fold for IL-12 was observed at 48 and 24 hpi, respectively. An increase in the expression of self-regulatory cytokines (Th2) cells, especially IL-10 and IL-4 was detected at later periods (72 and 96 hpi) with peaks of 4.7 and 4.9 fold, respectively. The determination of the concentration of serum cytokines by ELISA showed an increase in IL-1β, TNF-α, IL- 12, IFN-γ and IL-10 with kinetics similar to that observed by qPCR, especially for IL-1 and INF-γ. In summary, these results demonstrate that inoculation with iPPVO stimulates transiently a number events associated with cellular and humoral innate immune responses. If taken together, these effects would likely contribute for the enhanced resistance to certain pathogens observed in animals treated with iPPVO. / As propriedades imunoestimulatórias do Parapoxvirus ovis inativado (iPPVO) têm sido verificadas em diferentes espécies animais e condições experimentais. No presente trabalho foram investigados os efeitos da administração do iPPVO sobre eventos da resposta inata de camundongos. Ativação de neutrófilos, atividade fagocítica de macrófagos, atividade bactericida do soro, indução e atividade antiviral do interferon tipo I (INF-I) e expressão de várias classes de citocinas foram investigados em diferentes intervalos após inoculação de Mus musculus pela via intraperitonial com iPPVO (dose 107 TCID50). O soro de animais tratados com iPPVO apresentou atividade de INF-I frente ao vírus da encefalomiocardite murina (EMCV) entre 6 e 12 horas pós inoculação (hpi), como demonstrado pela redução significativa de formação de placas virais. Uma significativa ativação dos neutrófilos circulantes foi observada pela técnica de redução do NBT em animais tratados com o iPPVO às 6 hpi. Macrófagos peritoneais de camundongos tratados com iPPVO demonstraram um aumento significativo (p<0,01) na atividade fagocítica frente a Candida albicans tanto in vivo (entre 12 e 96 hpi) quanto in vitro (24 e 72hpi). Camundongos tratados com iPPVO apresentaram aumento na atividade bactericida do soro frente à Escherichia coli (p<0,05) em dois períodos avaliados (24 e 72 hpi). Um segundo estudo avaliou a expressão de citocinas em resposta à inoculação do iPPVO. Para isso, amostras de baço e soro foram coletados de camundongos tratados com iPPVO em diferentes intervalos após a inoculação e submetidas a quantificação de RNA mensageiro (RNAm) por PCR em tempo real (qRT-PCR) e detecção/quantificação de citocinas no soro por ELISA. A quantificação de RNAm permitiu detectar um aumento significativo e transitório da expressão de várias citocinas, com magnitude e cinética variáveis. A expressão de RNAm das citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, TNF-α e IL-8) atingiu o pico às 24 hpi (aumento de 5,4 vezes), 48 hpi (3 e 10 vezes, respectivamente). Um aumento de 15 vezes na expressão gênica do INF-γ, e de 6 vezes para a IL-12 foi observado às 48 e 24 hpi, respectivamente. Um incremento na expressão das citocinas auto-regulatórias (Th2), principalmente IL-10 e IL-4, foi detectado em períodos mais tardios (72 e 96 hpi) com picos de 4,7 e 4,9 vezes, respectivamente. A determinação da concentração das citocinas séricas por ELISA revelou um aumento nos níveis de IL-1β, TNF- α, IL-12, INF-γ e IL-10, com uma cinética similar à observada pela técnica de qPCR, especialmente para IL-1β e INF-γ. Em resumo, esses resultados demonstram que o tratamento com iPPVO estimula de forma significativa e transitória uma série de eventos celulares e humorais ligados à resposta imune inata. Esses efeitos, se considerados em conjunto, provavelmente contribuem para o aumento da magnitude da resposta imunológica a certos patógenos observada em animais tratados com o iPPVO.