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Previous issue date: 2010-03-10 / Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis of zoonotic character, cosmopolitan
development subacute or chronic whose agent the dimorphic fungus Sporothrix
schenckii affecting man and various species of animals, especially the domestic cat,
being considered of interest to Public Healt. Considering the difficulties in the
therapeutic treatment of ringworm in this animal species, including toxicity and
the development of resistance to antifungal agents traditionally used to treat
disease the study aimed evaluate the immunogenic capacity of yeast cells of S.
schenckii inactivated both in immunoprophylaxis and immunotherapy of
sporotrichosis. We used 160 Wistar albin rats (Rattus norvegicus) at 70 days
(80 in immunoprophylaxis and 80 in immunotheraphy) were divided into four
groups that were immunized three times every 15 days. The groups were
divided as follows: G1 (control, mineral oil), G2 (Ag + incomplete freund
adjuvant), G3 (Ag + Freund's complete adjuvant) and G4 (Ag + incomplete
freund adjuvant + propolis). Preparation of the vaccine used was an isolate of
S. schenckii from yeast in the form of a case of cutaneous sporotrichosis of
domestic cat. The fungus was grown in medium liquid (Brain-Heart broth),
incubated for 10 days at 370C and kept under constant agitation to obtain the
yeast form. The culture was filtered through a double layer of sterile gauze,
centrifuged, washed twice with buffered saline (PBS), homogenized and
standardized in 108 cells of S. schenckii / ml. The cells were inactivated with
0.02% thimerosal and then emulsified with mineral oil, and vaccines packaged
in sterilized sealed and kept at a temperature of 40C throughout the
experimental period. Was used a dose of 0.1 ml/animal intramuscularly. Rats
that received the vaccine as immunoprophylaxis after the three doses were
challenged, and inoculated subcutaneously with 2X103 cells / ml of S. schenckii
in the right footpad and evaluated for 10 days. Animals treated with
immunotherapy were inoculated with the agent after 14 days and received three doses of immunogen. After the experimental period all were euthanized
and necropsy to mycological examination, histopathology and counting colony
forming units. The results were: immunoprophylaxis in the pathological
changes showed statistically significant differences (P <0.05) in the vaccinated
groups (G2, G3 and G4) compared to the control group (G1) to the point of
inoculation, with no statistical difference the evaluation of internal organs.
Immunotherapy clinical evaluation at the injection showed that there was no
statistical difference among the four experimental groups, but at the end of the
experiment the groups G1, G2, G3 and G4 had respectively 8.3%, 58.3%, 41.7
% and 50% of injuries in the process of regression and healing. In relation to
injuries in other body areas only in the last week of the experiment, the G2 and
G3 differ statistically (P <0.05) in the control group (G1). Pathological changes
were found in the internal organs of the four experimental groups, but with a
greater number of lesions in group CONT. Both in immunoprophylaxis and
immunotherapy the retroisolation of the agent and count of colony forming units
showed that there was growth of S. schenckii in the four experimental groups,
but with less frequency and quantification of CFU at the point of inoculation
and internal organs of the groups G2, G3 and G4. In histopathologic
evaluation to determine the presence of granulomas and pyogranulomas focal
and multifocal in the point of inoculation and internal organs of the four groups,
but the animals that received immunoprophylactic changes were more
restricted to the point of inoculation. The results indicate that the three vaccine
formulations (AIF ACF and AIFP) used as immunoprophylactic and
immunotherapy have not been effective for the remission of the lesions of
experimental cutaneous sporotrichosis. / Esporotricose é uma micose subcutânea de caráter zoonótico, cosmopolita de
evolução subaguda ou crônica que tem como agente etiológico o fungo dimórfico
Sporothrix schenckii afetando o homem e várias espécies de animais, principalmente
o felino doméstico, sendo considerada de interesse para a Saúde Pública.
Considerando as dificuldades terapêuticas no tratamento da micose nessa espécie
animal, incluindo toxicidade e o desenvolvimento de resistência aos antifúngicos
tradicionalmente utilizados na terapia da enfermidade o estudo objetivou avaliar a
capacidade imunogênica de células leveduriformes de S. schenckii inativadas tanto
na imunoprofilaxia como na imunoterapia da esporotricose. Foram utilizados 160
ratos albinos wistar (Rattus norvergicus) com 70 dias (80 na imunoprofilaxia e 80 na
imunoterapia) sendo divididos em quatro grupos que receberam três doses do
imunógeno a cada 14 dias. Os grupos foram divididos em: G1 (controle- óleo
mineral), G2 (Ag+ adjuvante incompleto de freund), G3 (Ag + adjuvante completo de
freund) e G4 (Ag + adjuvante incompleto de freund + própolis). Para preparação da
vacina foi utilizado um isolado de S. schenckii na forma leveduriforme proveniente de
um caso de esporotricose cutânea de felino doméstico. O fungo foi cultivado em
meio líquido (Brain-Heart broth), incubado durante 10 dias a 37oC e mantido sob
agitação constante para obtenção da forma leveduriforme. A cultura foi filtrada em
dupla camada de gaze estéril, centrifugada, lavada duas vezes com solução salina
tamponada (PBS), homogeneizada e padronizada em 108 células de S. schenckii/
ml. As células foram inativadas com thimerosal a 0,02% e posteriormente
emulsificadas com óleo mineral, sendo as vacinas acondicionadas em frascos
estéreis fechados e mantidas a temperatura de 40C durante todo o período
experimental. Foi utilizada uma dose de 0,1 ml/animal por via intramuscular. Os ratos
que receberem a vacina como imunoprofilaxia após as três doses foram desafiados,
sendo inoculados por via subcutânea com 2X103 células/ml de S. schenckii e
avaliados durante 10 dias. Os animais tratados com imunoterápico foram inoculados
com o agente e após 14 dias receberam três doses do imunógeno. Após o período
experimental todos foram eutanasiados e feita necropsia para realização de análise
micológica, histopatológica e contagem das Unidades Formadoras de Colônias.
Os resultados obtidos foram: na imunoprofilaxia as alterações anatomopatológicas
demonstraram diferença estatísticamente significativa (P<0,05) dos grupos
vacinados (G2, G3 e G4) quando comparados ao grupo controle (G1) em relação ao
ponto de inoculação, não havendo diferença estatística na avaliação dos órgãos
internos. Na imunoterapia a avaliação clínica no ponto de inoculação evidenciou que
não houve diferença estatística entre os quatro grupos experimentais, porém ao final
do experimento os grupos G1, G2, G3 e G4 apresentavam respectivamente 8,3%,
58,3%, 41,7% e 50% das lesões em processo de regressão e cicatrização. Em
relação a lesões em outras áreas corpóreas somente na última semana do
experimento os grupos G2 e G3 diferiram estatisticamente (P<0,05) do grupo
controle (G1). Alterações anatomopatológicas foram encontradas nos órgãos
internos dos quatro grupos experimentais, porém com um maior numero de lesões
nos animais do grupo CONT. Tanto na imunoprofilaxia quanto na imunoterapia o
retroisolamento do agente e Contagem das Unidades Formadoras de colônias
demonstraram que houve crescimento do S. schenckii nos quatro grupos
experimentais, porém com menor freqüência e quantificação de UFCs no ponto de
inoculação e órgãos internos dos grupos G2, G3 e G4. Na avaliação histopatológica
foi verificada a presença de granulomas e piogranulomas focais e multifocais no
ponto de inoculação e órgãos internos dos quatro grupos, porém os animais que
receberam imunoprofilático as alterações ficaram mais restritas ao ponto de
inoculação. Os resultados permitem concluir que as três formulações de vacinas
(AIF, ACF e AIFP) utilizadas como imunoprofilático e imunoterápico não foram
eficazes para a remissão completa das lesões de esporotricose cutânea
experimental.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpel.edu.br:123456789/2544 |
| Date | 10 March 2010 |
| Creators | Antunes, Tatiana de ávila |
| Contributors | CPF:24289710000, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799478H9, Nascente, Patrícia da Silva, CPF:95373861049, http://lattes.cnpq.br/3560823637748071, Schuch, Luiz Felipe Damé, Meireles, Mario Carlos Araújo |
| Publisher | Universidade Federal de Pelotas, Programa de Pós-Graduação em Veterinária, UFPel, BR, Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPEL, instname:Universidade Federal de Pelotas, instacron:UFPEL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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