Submitted by Carvalho Dias João Paulo (joao.dias@famerp.br) on 2018-04-09T14:42:14Z
No. of bitstreams: 1
fernandohenriqueamurata_dissert.pdf: 1552059 bytes, checksum: 21664cbdf1320b051bb618047511b2eb (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-09T14:42:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1
fernandohenriqueamurata_dissert.pdf: 1552059 bytes, checksum: 21664cbdf1320b051bb618047511b2eb (MD5)
Previous issue date: 2016-04-13 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP / Introduction: T. gondii infection is high in Brazil and could lead to the development of
serious sequelae such as ocular and neurological injuries, especially when it occurs
during pregnancy for the risk of congenital transmission, and in immunocompromised
patients. Clinical diagnosis is often difficult because the majority of affected people do
not develop symptoms, therefore the use of serological and molecular methods are
essential to support the diagnosis. Thus the use of sensitive and specific tests for the
diagnosis of this condition is necessary. Objectives: To investigate and characterize the
infection by T. gondii in their serological and molecular aspects in the northwest region
of São Paulo. Methods: Peripheral blood samples were collected from patients treated
in the Outpatient Clinic of High Risk Pregnancy and Fetal Medicine, and Retinopathy to
analyze the serological methods (ELISA and ELFA) and molecular (cnPCR, Nested
PCR and qPCR). Amniotic fluid samples were collected from pregnant women with
suspect toxoplasmosis to perform the cnPCR. The results were compared using the
Kappa index and calculated the sensitivity (S), specificity (SP), positive predictive value
(PPV) and negative (NPV). Results: For the group of pregnant women, serological tests
showed good agreement when applied to the Kappa index, G1: IgG = 0.83, IgM = 1.0;
G2: IgG = 1.0, IgM = 0.78. When compared to IgM class antibodies by ELISA and
ELFA had S = 75.5%, E = 100.0%, PPV = 100.0%, NPV = 87.8% and S = 79.2%, and
= 100.0%, PPV = 100.0%, NPV = 89.5%, respectively. When compared to IgG showed
S = 100.0%, E = 46.8%, PPV = 51.5%, NPV = 100.0% and 100.0% S = E = 38.3%,
PPV = 47 7% NPV = 100.0%, respectively, and molecular methods performed by PCRs
cnPCR (JW62 / 63), nested PCR, cnPCR (B22 / 23) and qPCR showed 0.0% S = E =
100, 0%, PPV = 0.0%, NPV = 63.9%, S = 5.7%, E = 100.0%, PPV = 100.0%, NPV =
65.3%, S = 7.5 % E = 98.9%, PPV = 80.0%, NPV = 65.5% and S = 1.9%, E = 100.0%, PPV = 100.0%, NPV = 64.4%, respectively. For the group of patients treated in the
Retinopathy Clinic, serological tests for detection of anti-T. gondii IgG antibodies
showed good agreement when applied to the Kappa index, G1: IgG = 0.97, IgM = 0.49;
G2: = 0.85 IgG, IgM = 0.74. When compared to IgM class antibodies by ELISA and
ELFA had S = 6.1% and = 96.8%, PPV = 62.5%, NPV = 53.7% and S = 3.7%, and =
98.9%, PPV = 75.0%, NPV = 53.7% respectively. When compared to IgG showed S =
96.3%, E = 34.6%, PPV = 56.6%, NPV = 91.4% and S = 95.1%, E = 35.7%, PPV = 56 ,
7%, NPV = 89.2%, respectively, and the molecular methods performed by PCRs cnPCR
(JW62 / 63), Nested, cnPCR (B22 / 23) and qPCR showed S = 1.8% and = 99.5 %, PPV
= 75.0%, NPV = 53.3%, S = 2.4%, and 99.5%, PPV = 80.0%, NPV = 53.5%, S = 6.1%
E = 98.4%, PPV = 76.7%, NPV = 54.2% and S = 8.5% and = 98.4%, PPV = 82.3%,
NPV = 54.8%, respectively. For the group of neonates of 50 samples tested, 45 (90.0%)
were positive for IgG 1 (2.0%) for IgM, 3 (6.0%) for IgA and 13 (26.0%) in cnPCR.
Conclusion: The commercial serological tests for identifying anti- T. gondii IgG and
IgM antibodies by ELISA and ELFA showed concordant results, and the molecular
conventional PCR tests (cnPCR), Nested PCR and real-time PCR (qPCR) were
discordant. / Introdução: A infecção por T. gondii é elevada no Brasil, podendo levar ao
desenvolvimento de sequelas graves como lesões oculares e neurológicas,
principalmente quando ocorre durante a gestação com risco de transmissão congênita, e
em pacientes imunocomprometidos. A maioria dos indivíduos acometidos não
desenvolvem sintomas, tornando o diagnóstico clínico difícil, sendo assim necessária a
utilização de testes que auxiliem no diagnóstico, como o uso dos métodos sorológicos e
moleculares. Desta forma, é essencial a utilização de testes sensíveis e específicos para
o correto diagnóstico da doença. Objetivos: Investigar e caracterizar a infecção por T.
gondii em seus aspectos sorológicos e moleculares em pacientes da região noroeste do
Estado de São Paulo. Casuística e métodos: Foram coletadas amostras de sangue
periférico de gestantes, neonatos e pacientes com doenças oculares sugestivas e não
sugestivas de toxoplasmose, atendidos nos Ambulatórios de Gestação de Alto Risco e
Medicina Fetal, e Retinopatia para realização dos métodos sorológicos (ELISA e
ELFA) e moleculares (cnPCR, Nested PCR e qPCR). Foram coletadas também
amostras de líquido amniótico para realização da cnPCR das gestantes com suspeita
clínica de toxoplasmose. Os resultados foram comparados pelo índice Kappa, e
calculados os valores de sensibilidade (S), especificidade (E), valor preditivo positivo
(VPP) e negativo (VPN). Resultados: Para o grupo de gestantes analisadas, os testes
sorológicos apresentaram concordância quando aplicados ao Kappa, G1: IgG = 0,83,
IgM = 1,0; G2: IgG = 1,0, IgM = 0,78 . Quando comparados a pesquisa de anticorpos da
classe IgM por ELISA e ELFA apresentaram S=75,5%, E=100,0%, VPP=100,0%,
VPN=87,8% e S=79,2%, E=100,0%, VPP=100,0%, VPN=89,5%, respectivamente.
Quando comparados com IgG apresentaram S=100,0%, E=46,8%, VPP=51,5%,
VPN=100,0% e S=100,0%, E=38,3%, VPP=47,7%, VPN=100,0%, respectivamente, e
para os métodos moleculares realizados pelas PCRs cnPCR (JW62/63), Nested PCR,
cnPCR (B22/23) e qPCR apresentaram S=0,0%, E=100,0%, VPP=0,0%, VPN=63,9%,
S=5,7%, E=100,0%, VPP=100,0%, VPN=65,3%, S=7,5%, E=98,9%, VPP=80,0%,
VPN=65,5% e S=1,9%, E=100,0%, VPP=100,0%, VPN=64,4%, respectivamente. Para
o grupo de pacientes atendidos no ambulatório de Oftalmologia, os testes sorológicos
para pesquisa de anticorpos anti-T.gondii da classe IgG apresentaram boa concordância
quando aplicados ao índice Kappa, G1: IgG = 0,97, IgM = 0,49; G2: IgG = 0,85, IgM =
0,74. Quando comparados à pesquisa de anticorpos da classe IgM por ELISA e ELFA,
apresentaram S=6,1%, E=96,8%, VPP=62,5%, VPN=53,7% e S=3,7%, E=98,9%,
VPP=75,0%, VPN=53,7%, respectivamente. Quando comparados com IgG
apresentaram S=96,3%, E=34,6%, VPP=56,6%, VPN=91,4% e S=95,1%, E=35,7%,
VPP=56,7%, VPN=89,2%, respectivamente, e para os métodos moleculares realizados
pelas PCRs cnPCR (JW62/63), Nested, cnPCR (B22/23) e qPCR, apresentaram
S=1,8%, E=99,5%, VPP=75,0%, VPN=53,3%, S=2,4%, E=99,5%, VPP=80,0%,
VPN=53,5%, S=6,1%, E=98,4%, VPP=76,7%, VPN=54,2% e S=8,5%, E=98,4%,
VPP=82,3%, VPN=54,8%, respectivamente. Para o grupo de neonatos, das 50 amostras
analisadas, 45 (90,0%) foram positivas para IgG, 1 (2,0%) para IgM, 3 (6,0%) para IgA
e 13 (26,0%) no cnPCR. Conclusão: Os testes sorológicos comerciais na identificação
de anticorpos anti-T.gondii das classes IgG e IgM por ELISA e ELFA apresentaram
resultados concordantes, e os testes moleculares PCR convencional (cnPCR), PCR
Nested e PCR em tempo real (qPCR) apresentaram resultados discordantes.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:tede/409 |
| Date | 13 April 2016 |
| Creators | Fernando Henrique Antunes, Murata |
| Contributors | Cinara de Cássia Brandão de , Mattos, Vânia Belintani, Piatto, Heloisa da Silveira Paro, Pedro |
| Publisher | Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, FAMERP, Brasil, Faculdade 1::Departamento 1 |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da FAMERP, instname:Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto, instacron:FAMERP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -6954410853678806574, 500, 500, 600, 600, 306626487509624506, 8765449414823306929, -6491868300948288337 |
Page generated in 0.0031 seconds