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Construção de sistema que permite a ancoragem de proteína recombinante à superfície celular de levedura. / Construction of a system that allows anchoring of recombinant protein to the cell surface of yeast.

Sistemas do tipo cell surface display vêm sendo desenvolvidos para expressão de proteínas heterólogas ancoradas à superfície celular de microrganismos. Várias aplicações foram reportadas destes sistemas, incluindo o emprego como biocatalizador celular, desenvolvimento de vacinas e biosorventes celulares. Neste trabalho foi desenvolvido um sistema que permite ancoragem da proteína glicoamilase de Aspergillus awamori à superfície da parede celular da levedura Saccharomyces cerevisiae. O gene codificador da glicoamilase com sua seqüência sinal foi fusionado ao fragmento do gene codificador da região C-terminal da proteína Flo1p (Flo428), que foi utilizada como âncora (fragmento CG*FC). As células de levedura foram transformadas com o fragmento híbrido CG*FC e os transformantes foram capazes de degradar amido e liberar glicose. A atividade da glicoamilase não foi detectada no meio de cultura, porém está presente no sedimento celular. Estes resultados demonstram que a glicoamilase foi ancorada à parede celular da nova linhagem recombinante de levedura. / Cell surface display systems have being developed for expression of heterologous proteins anchored to the cell surface of microorganisms. Several applications of these systems have been reported, including employment as whole-cell biocatalysts, development of vaccines and cellular biosorvents. In this work it was developed a system that allows the anchoring of the Aspergillus awamori glucoamylase protein to the cell wall surface of the yeast Saccharomyces cerevisiae. The gene encoding glucoamylase with its secretion signal was fused to the gene fragment encoding the C-terminal region of Flo1 protein, used as an anchor (CG*FC fragment). Yeast cells were transformed with hybrid CG*FC fragment and transformants were able to degrade starch and release glucose. Glucoamylase activity was not detected in the culture medium, but only in sedimented cells. These results demonstrate that glucoamylase was anchored to the cell wall of the new yeast recombinant strain.

Identiferoai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-08012009-163245
Date03 July 2008
CreatorsNavarro, Jessica Paola Fuentes Rivera
ContributorsVicente, Elisabete Jose
PublisherBiblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Source SetsUniversidade de São Paulo
LanguagePortuguese
Detected LanguageEnglish
TypeDissertação de Mestrado
Formatapplication/pdf
RightsLiberar o conteúdo para acesso público.

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