Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, Brasília, 2014. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2014-08-12T13:27:23Z
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2014_RafaelaCristinaFerreiraBorges_Parcial.pdf: 2768328 bytes, checksum: 7e1025646edc62fe1a390d6722f2f79a (MD5) / A teca (Tectona grandis) é uma espécie florestal nativa do subcontinente Índico e do Sudeste Asiático que foi introduzida no Centro-Oeste Brasileiro a partir da década de 1970. Essa espécie possui alto valor comercial por apresentar madeira de alta durabilidade e resistência. A madeira pode ser usada para a confecção de móveis finos, esquadrias, pisos, construção naval e painéis. As duas principais doenças que afetam a cultura da teca são de etiologia fúngica: a ferrugem causada por (Olivea tectonae) e o cancro da teca. Nos últimos anos, o cancro da teca vem ganhando importância pelo grande número de árvores afetadas. Assim, considerando a importância desta doença, é necessária a busca de alternativas de controle, a partir de conhecimentos básicos sobre a enfermidade como: etiologia, variabilidade genética da população do patógeno e caracterização morfocultural, molecular e patogênica de isolados do fungo L. theobromae, identificado como o agente causal. Assim, discos de madeira com sintomas de escurecimento em povoamento de Teca foram coletados no estado do Mato Grosso, dos quais foram obtidos isolados de L. theobromae. As colônias fúngicas foram caracterizadas morfologicamente e a identificação de L. theobromae foi confirmada. Os isolados estudados foram caracterizados morfologicamente em culturais, avaliados quanto ao crescimento micelial em BDA, MEA, V8, Aveia-ágar e Cenoura-ágar, nas temperaturas de 25, 30 e 35°C. Para a caracterização molecular, realizou-se a extração do DNA de todos os isolados estudados através do método CTAB modificado. O DNA total foi submetido à reação de PCR para amplificação das regiões intergênicas do DNA ribossomal (regiões ITS1 e ITS2) e fator de elongação, a partir dos primers ITS1, ITS4 e TEF1-F, EF1-728F. A fim de comprovar a patogenicidade, mudas de teca foram inoculadas com dois isolados de L. theobromae (RB01) e (RB05) em três clones designados A, B e C. As inoculações foram unidirecionais quando se usou isolados de outras hospedeiras no clone A de teca. Os isolados de L. theobromae cresceram melhor em BDA, MEA e V8 a partir de 25°C com temperatura ótima da 35°C. As análises de sequencia das regiões do fator de elongação da tradução e do DNA ribosomal confirmaram a classificação dos isolados de teca como Lasiodiplodia theobromae. De acordo com o teste de patogenicidade, verificou-se que os clones A, B e C mostraram-se susceptíveis aos dois isolados de L. theobromae estudados. O clone A, proveniente de plantas seminais foi o que apresentou maior susceptibilidade ao isolado de L. theobromae, seguido do clone B, enquanto o clone C apresentou maior resistência. Quando realizada a inoculação unidirecional no clone A, verificou-se que esse clone foi susceptível a todos os isolados estudados, independentemente de origem, diferindo apenas em nível de severidade. Os isolados originários de hospedeiras distintas de teca proporcionaram maiores níveis de doença. A diversidade genética dos isolados foi estudada usando-se marcadores moleculares RAPD (“Random amplified polymorphic DNA”), resultando em quatro grupos e quatorze subgrupos com alta variabilidade dentro dos subgrupos. A similaridade dos isolados variou de 50% a 100%, sendo que estes com 100% de similaridade são isolados obtidos de teca. / Teak (Tectona grandis) is a forest species native to the Indian subcontinent and Southeast Asia, and it was introduced in Brazil’s midwestern region in the 1970s. This species has a high commercial value, because its timber is highly durable and resistant. The wood may be used to make fine furniture, door and window frames, floors, naval constructions and panels. The two main diseases that affect teak plantations are of fungal etiology; they are rust caused by Olivea tectonae and teak canker. In recent years, teak canker has been increasingly important in that it affects a large number of trees. Thus, considering the importance of this disease, alternatives for its control need to be sought, using basic knowledge about the disease such as its etiology, the genetic variability of the pathogen population, and the morphocultural, molecular and pathogenic characterization of isolates of the fungus L. theobromae, identified as the causal agent. To this end, discs of wood with darkening symptoms were collected in a teak plantation in the state of Mato Grosso and, from these, isolates of L. theobromae were obtained. The fungal colonies were morphologically characterized, and the identification of L. theobromae was confirmed. The isolates studied were morphologically characterized in culture media and evaluated for mycelial growth in PDA, MEA, V8, oatmeal-agar and carrot-agar, at temperatures of 25, 30 and 35°C. For molecular characterization, extraction of DNA was carried out for all isolates studied, using the modified CTAB method. Total DNA was submitted to PCR for amplification of the intergene regions of ribosomal DNA (regions ITS1 and ITS2) and elongation factor, from the primers ITS1, ITS4 and TEF1-F, EF1-728F. To prove the pathogenicity, teak seedlings were inoculated with two isolates of L. theobromae (RB01) and (RB05) in three clones designated A, B and C. The inoculations were unidirectional when isolates were used from other hosts in clone A of teak. The isolates of L. theobromae grew better on PDA, MEA and V8 from 25°C upwards, with an optimum temperature of 35°C. The isolates studied were not clearly distinguished when only sequences of ITS and TEF were used. In accordance with the pathogenicity test, it was confirmed that clones A, B and C were susceptible to the two isolates of L. theobromae studied. Clone A from the seminal plants was the one that presented the greatest susceptibility to the isolate of L. theobromae, followed by clone B, while clone C presented greatest resistance. When unidirectional inoculation of clone A was done, it was confirmed that this clone was susceptible to all the isolates studied, independent of their origin, differing only in level of severity. The original isolates from non-teak hosts provided the highest disease levels. The genetic diversity of the isolates was studied using RAPD molecular markers (Random amplified polymorphic DNA), resulting in four groups and 14 subgroups with high variability within the subgroups. The similarity of the isolates varied from 50% to 100%, and those with 100% similarity were isolates obtained from teak.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/16069 |
| Date | 28 March 2014 |
| Creators | Borges, Rafaela Cristina Ferreira |
| Contributors | Mello, Sueli Corrêa Marques de |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB |
| Rights | A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data., info:eu-repo/semantics/openAccess |
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