Tripomastigotas, formas infectivas do T. cruzi, expressam em sua superfície uma família de glicoproteínas denominada Tc-85, que pertence à superfamília gênica das gp85/trans-sialidases. Nosso laboratório clonou e caracterizou um membro da família da Tc85 (Tc85-11), cuja região carboxila terminal (clone Tc85-1) adere em laminina e em células de mamíferos. O uso de peptídeos sintéticos, correspondendo em sequência à Tc85-1 possibilitou a caracterização do motivo mais conservado da superfamília gênica das gp85/trans-sialidases (VTVxNVfLYNR), que não está relacionado com a adesão a laminina, como o domínio de adesão em células de mamíferos. Por cromatografia de extratos de membrana de células LLC-MK2 numa coluna de afinidade contendo o motivo de adesão, foi isolada uma molécula de 45 kDa identificada como citoqueratina 18 (CK18). Dados da literatura, de acordo com experimentos realizados em nosso laboratório, indicam que células epiteliais apresentam CK18 em sua superfície. Além disso, células K562, que não são infectadas pelo T. cruzi e não ligam ao motivo VTVxNVfLYNR nem à Tc85-1, não expõem CK18 em sua superfície. A adição de anticorpos anti-CK18 ao meio de cultura inibe a infecção de células epiteliais pelo T. cruzi, enquanto que a adição de pf-Tc85-11 ou VTVxNVfLYNR estimula a infecção. Esses dados sugerem que a adesão de membros da família das trans-sialidases a CK18 prepara a célula para invasão. / Trypomastigotes, which are the infective form of Trypanosoma cruzi, express a set of surface glycoproteins known, collectively, as Tc-85, a subset of the gp85/transsialidase supergene family. A member of that family, Tc85-11, has been cloned, whose carboxy-terminal fragment (Tc85-1) showed adhesive properties to laminin and cell surfaces (Giordano et al., 1999). The use of synthetic peptides, corresponding to the Tc85-1 sequence, enabled us to characterize the most conserved motif of the Trypanosoma trans-sialidase supergene family (VTVxNVfLYNR) as the mammalian cell binding domain. Although Tc85-1 binds to laminin, this domain does not bind to laminin nor inhibits cell binding to it. Affinity chromatography experiments with LLC-MK2 cell membrane extract enabled us to isolate the VTVxNVfLYNR motif receptor as a 45 kDa molecule that was identified as cytokeratin 18 (CK18) after trypsin digestion. This result is in agreement with published data, showing that CK18 is exposed on the outer membrane surface of epithelial cells. Furthermore, K562 cells which are not susceptible to T. cruzi infection, did not bind to Tc85-1 nor showed CK18 on their surface. The addition of anti-cytokeratin antibodies to the culture medium significantly inhibited the infection of epithelial cells by T. cruzi, while addition of fusion proteinTc85-11 or VTVxNVFLYNR slightly stimulated the infection. These results indicate that, the binding of the trans-sialidase family members to CK18 may prepare the hostcell for parasite invasion. Furthermore, our data suggest that Tc85-11 is a multiadhesive glycoprotein, encoding at least two diferent binding sites, one for laminin and one for CK18 that help the parasite to overcome the barriers interposed by cell membranes, extracellular matrices and basal laminae.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-31012019-100521 |
| Date | 12 February 2001 |
| Creators | Magdesian, Margaret Haiganouch |
| Contributors | Alves, Maria Julia Manso |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Tese de Doutorado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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