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Naiara Carvalho Teixeira Imunização de camundongos com fragmentos....pdf: 902012 bytes, checksum: 1ec320ac38a55ad96f41e4c20bcf883d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-01T18:43:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Naiara Carvalho Teixeira Imunização de camundongos com fragmentos....pdf: 902012 bytes, checksum: 1ec320ac38a55ad96f41e4c20bcf883d (MD5)
Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Leishmaniose visceral zoonótica (LV) é uma doença que afeta homens e cães e é causada por
protozoários das espécies Leishmania infantum e Leishmania chagasi. O cão doméstico é o
principal reservatório do agente causal. Uma vacina efetiva contra a LV canina poderá
contribuir para o controle da infecção e/ou doença humana e canina. A resposta imune
protetora contra a LV canina é do tipo celular (Th1). Em nosso laboratório, dentre um grupo
de cinco antígenos recombinantes selecionados de uma biblioteca de cDNA de L. chagasi,
usando-se uma mistura de soro de cães naturalmente infectados e que exibiam resposta imune
humoral e celular específica, um fragmento da extremidade carboxila de uma cinesina com
cauda de 6 histidinas (rLci2B-NH6), para permitir a purificação, foi escolhido para a
avaliação do seu potencial como candidato a componente de uma vacina contra LV canina.
No presente trabalho foi avaliada a imunização de camundongos BALB/c com rLci2BNH6/
saponina em associação com os plasmídeos pcDNA3.1-scmu-IL-12 e/ou pcDNA3.1-
mu-IL-2. Os animais imunizados com rLci2B-NH6/saponina em associação com a IL-12 e/ou
IL-2 produziram anticorpos IgG, IgG2a e IgG1 específicos. Esplenócitos desses animais
exibiram proliferação, mas não produziram IFN-γ ou IL-5 após estimulação in vitro com
rLci2B-NH6. Esses resultados sugerem que a adição de pcDNA3.1-mu-IL-2 no protocolo de
imunização não é capaz de promover uma resposta imune predominantemente Th1. Também
foi avaliada a imunização de camundongos com proteína recombinante quimérica (rLci2-NTCT-
NH6) formada pelos domínios não repetitivos presentes nas extremidades amina e
carboxila codificadas pelo gene da cinesina. Camundongos BALB/c imunizados com rLci2-
NT-CT-NH6 ou uma proteína recombinante químerica controle, contendo 5 domínios
repetitivos presentes em rLci2B-NH6 entre os domínios não repetitivos de rLci2-NT-CTNH6,
apresentaram produção de IgG, IgG2a e IgG1. Esplenócitos desses animais exibiram
proliferação, mas não produziram IFN-γ e apenas esplenócitos dos camundongos imunizados
com rLci2-NT-5R-CT-NH6 sintetizaram IL-5, após estimulação in vitro com as respectivas
proteínas. Contudo, durante a purificação de rLci2-NT-CT-NH6 e rLci2-NT-5R-CT-NH6
ocorreu intensa proteólise que pode ter resultado na destruição de epítopos capazes de induzir
resposta Th1. Previamente, em nosso laboratório, foi observada a morte de alguns
camundongos injetados com 100 μg saponina/dose, por isso, doses menores de saponina (50
ou 25 μg) foram avaliadas como adjuvante na indução de resposta imune a rLci2B-NH6. Os
resultados da mensuração dos anticorpos foram semelhantes nos três grupos. Curiosamente,
somente esplenócitos do grupo injetado com 25 μg/dose exibiram proliferação específica. O
grupo injetado com 100 μg/dose produziu IFN-γ e IL-5 e o grupo injetado com 50 μg/dose
sintetizou IFN-γ, mas não produziu IL-5, após estimulação in vitro com rLci2B-NH6. / Zoonotic visceral leishmaniasis (VL) is a disease that affects humans and dogs and is caused
by protozoan species Leishmania infantum and Leishmania chagasi. There is evidence to
suggest that the domestic dog is the main reservoir of the causative agent. An effective
vaccine against canine VL may contribute to infection control and/or human and canine
disease. The protective immune response against canine VL is cellular (Th1 type). In our
laboratory, among a group of five recombinant antigens selected from a cDNA library of L.
chagasi, using a mixture of sera from naturally infected dogs that showed humoral and
cellular specific responses, one fragment of the carboxyl terminus of a kinesin with a 6 His-
Tag (rLci2B-NH6) was chosen to evaluate its potential as a candidate component of a vaccine
against canine VL. In the present study, we evaluated the immune response of BALB/c
immunized with rLci2B-NH6/saponin in combination with pcDNA3.1-scmu-IL-12 and
pcDNA3.1-mu-IL-2. The animals immunized with rLci2B-NH6 associated IL-12 and/or IL-2
produced IgG, IgG2a and IgG1 reactive to rLci2B-NH6. Splenocytes of these animals
exhibited proliferation but failed to produce IFN-γ and IL-5 after in vitro stimulation with
rLci2B-NH6. These results suggest that adding IL-2 was not enough to induce a
predominantly Th1 immune response. We also analyzed the immunization of mice with
recombinant chimeric (rLci2-NT-CT-NH6) formed by non-repetitive domains present in the
amine and carboxyl ends encoded by the gene for kinesin. BALB/c mice immunized with
rLci2-NT-CT-NH6 or a control chimeric recombinant protein containing 5 repeated domains
present in rLci2B-NH6 between the domains of non-repetitive rLci2-NT-CT-NH6 showed
production of IgG, IgG2a and IgG1. Splenocytes of these animals exhibited proliferation, but
failed to produce IFN-γ and only splenocytes from mice immunized with rLci2-NT-5R-CTNH6
synthesized IL-5 after in vitro stimulation with the respective proteins. However, during
the purification rLci2-NT-CT-NH6 and rLci2-NT-5R-CT-NH6 occurred intense proteolysis
that may have resulted in the destruction of epitopes capable of inducing Th1. Previously, in
our laboratory, it was observed the death of some mice injected with 100 μg saponin/dose,
therefore, lower doses of saponin (50 or 25 μg) were evaluated as an adjuvant to induce an
immune response to rLci2B-NH6. The results of measuring the antibodies were similar in the
three groups. Interestingly, only splenocytes from the group injected with 25 μg/dose
exhibited specific proliferation. The group injected with 100 μg/dose produced IFN-γ and IL-
5 and the group injected with 50 μg /dose synthesized IFN-γ, but did not produce IL-5 after in
vitro stimulation with rLci2B-NH6.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/4256 |
| Date | January 2011 |
| Creators | Teixeira, Naiara Carvalho |
| Contributors | Ristow, Paula Carvalhal Lage Von Buettner, Cardillo, Fabíola, Grassi, Maria Fernanda Rios, Oliveira, Geraldo Gileno de Sá, Oliveira, Geraldo Gileno de Sá |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | English |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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