Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias mención Patología Animal / Niveles elevados de aldosterona causan hipertensión arterial y un estado
inflamatorio moderado en tejido renal y cardiovascular. La evidencia clínica y
experimental ha demostrado que el bloqueo del receptor de
aldosterona/mineralocorticoides (MR) reduce la inflamación tisular y la
producción de diferentes citoquinas proinflamatorias. Sin embargo, el perfil y la
temporalidad de los fenómenos inflamatorios asociados a la activación del MR
son poco conocidos. Estudios recientes han identificado una nueva vía
inflamatoria, la vía IL-23/IL-17, que participa en el daño autoinmune en
enfermedades inflamatorias del sistema digestivo y el sistema nervioso central.
Además, estudios en modelos experimentales de autoinmunidad e hipertensión
arterial indican que el desarrollo de inflamación se podría asociar a la
disminución de la función de linfocitos reguladores (TregFoxP3+). En este trabajo
estudiamos si la activación del MR mediante el tratamiento con
deoxicorticosterona acetato y una dieta rica en sal (DOCA-sal) causa la
activación del eje IL-23/IL-17 y/o modifica linfocitos Treg, en células
mononucleares sanguíneas, bazo, corazón y en tejido renal.
En una primera serie de experimentos evaluamos la cinética de activación de la
vía IL-23/IL17 y el efecto de la activación y bloqueo del MR sobre esta vía
inflamatoria. Estudiamos tres grupos de ratas uninefrectomizadas a 4, 8, 16 y
28 días, con los siguientes tratamientos: 1) Vehículo, 2) DOCA (0,5 mg/0,1kg) +
1% NaCl en la bebida (DOCA-sal), y 3) DOCA-sal + espironolactona (50
mg/kg/día). En una segunda serie experimental evaluamos si la activación de la
vía IL-17/IL-23 era secundaria a la hipertensión (efecto hemodinámico) y/o la
activación del MR, suministrando terapia antihipertensiva (triterapia) a los
animales que recibían tratamiento DOCA-sal. Analizamos cuatro grupos
experimentales 1) Vehículo, 2) DOCA-sal, 3) DOCA-sal+Triterapia
antihipertensiva (Tri; Hidroclorotiazida 4 mg/kg/día, Reserpina 0,32 mg/kg./día,
Hidralazina 6,5 mg/kg/día). En ambas series experimentales realizamos
estudios fisiológicos, bioquímicos, de biología molecular, e histológicos para
evaluar el desarrollo de hipertensión arterial, daño tisular y su correlación con la
activación de la vía IL-23/IL-17.
Al cuarto día de tratamiento DOCA-sal, se evidenció hipertensión arterial
sistólica (159±8,3 mm Hg vs Vehículo 116±7,1 mm Hg, p<0,001), seguido al
octavo día por un aumento de los ARNm de IL-17, TGF-β1 y RORγt (un factor
de transcripción que determina la diferenciación Th17) en células
mononucleares sanguíneas. Observamos efectos similares en el bazo de ratas
DOCA-sal. Posteriormente, al día 16 de tratamiento, aumentó la abundancia
renal y cardíaca de los ARNm de citoquinas que favorecen la polarización Th17
(IL-23 e IL-1β), coincidente con la expresión proteica de IL-17 y el infiltrado de
linfocitos T CD4+/IL-17A+. El tratamiento con espironolactona previno el
desarrollo de hipertensión arterial en animales tratados con DOCA-sal (117±8 mm Hg vs grupo DOCA-sal, p<0,001), el aumento en la expresión del ARNm de
citoquinas pertenecientes al eje IL-23/IL-17 y la infiltración tisular por células T
CD4+/IL-17A+en tejido renal. Además, espironolactona incrementó a los 8 días
la abundancia del ARNm Foxp3.
Al suministrar la triterapia antihipertensiva a ratas DOCA-sal observamos
aunque este tratamiento previno efectivamente la hipertensión arterial, no
bloqueó la polarización Th17.
En base a los resultados obtenidos, se concluye que el proceso inflamatorio
inducido por el tratamiento DOCA-sal implica la activación del eje inflamatorio
Th17, tanto en células mononucleares sanguíneas como en tejido renal y
cardiaco. La activación Th17 es prevenida por antagonista del MR
espironolactona y no por el tratamiento anti-hipertensivo. Estos resultados
indican que la activación del MR es necesaria para la polarización Th17 que
caracteriza la hipertensión DOCA-sal y sugieren que el tratamiento con
antagonistas farmacológicos del MR podría ser utilizado en clínica como una
estrategia anti-inflamatoria en el tratamiento de la hipertensión arterial / High levels of aldosterone cause hypertension and moderate inflammatory state
in renal and cardiovascular tissue. Clinical and experimental evidence has
demonstrated that blocking aldosterone receptor (mineralocorticoid receptor,
MR) reduces tissue inflammation and the production of several pro-inflammatory
cytokines. However, the profile and timing of the inflammatory phenomena
associated with MR activation are poorly understood. Recent studies have
identified a new inflammatory axis, the IL-23/IL-17 pathway, which is involved in
autoimmune damage in inflammatory diseases of the digestive system and the
central nervous system. Furthermore, studies in experimental models of
autoimmunity and hypertension indicate that the development of inflammation
could be associated with reduced regulatory T lymphocytes (TregFoxP3+). We
studied whether the activation of the MR by the treatment with
deoxycorticosterone acetate plus high salt diet (DOCA-salt) causes the
activation of the IL-23/IL-17 and/or modifies Treg in blood mononuclear cells,
spleen, cardiac and renal tissue.
In a first set of experiments, we evaluated the kinetics of IL-23/IL17 pathway
activation, and the activation and effect of pharmacological blockade of the MR
on IL-23/IL-17 pathway. We studied three groups of uninephrectomized rats at
4, 8, 16 and 28 days: 1) vehicle, 2) DOCA (0.5 mg/kg 0.1) + 0.9% NaCl in the
beverage (DOCA-salt) and 3) DOCA-salt+spironolactone (50 mg/kg/day). In a
second set of experiments, we evaluated whether IL-23/ IL-17 pathway
activation is secondary to hypertension (hemodynamic effect) and/or activation
of MR. We analyzed three experimental groups: 1) vehicle, 2) DOCA / salt, 3)
DOCA-salt + antihypertensive tripletherapy (Tri; 4mg/kg/day
Hydrochlorothiazide, Reserpine 0.32 mg/kg/day, Hydralazine 6.5 mg/kg/day). In
both sets of experiments we evaluated the development of hypertension, tissue
damage and its correlation with IL-23/IL-17 pathway activation.
On the fourth day of DOCA-salt treatment, the rats the evidenced systolic
hypertension (159 ± 8.3 mm Hg vs vehicle 116 ± 7.1 mm Hg, p < 0.001). At the
eighth day, we observed an increase of IL-17, TGF-β1 and RORγt mRNAs in
blood mononuclear cells. Similar results were observed in spleen samples from
DOCA-salt rats. At day 16 of treatment, we observed increased abundance of
renal and cardiac cytokines mRNAs that favors Th17 polarization (IL-23 and IL-
1β), that was coincident with increased expression of IL-17A protein and the
appearance of CD4+ / IL-17A+ cell infiltrate. The treatment with spironolactone
prevented the development of hypertension (117 ± 8 mm Hg vs group DOCAsalt,
p < 0.001), the increase of cytokines transcripts and the cell infiltration.
Furthermore, at 8 days of treatment, spironolactone increased the abundance of
Foxp3 mRNA. The treatment of the DOCA-salt rats with antihypertensive therapy did not
prevented the up regulation of IL-23/IL-17 pathway, although the Tri effectively
prevented hypertension.
Based on these results, it is concluded that the inflammatory process induced by
DOCA-salt involves the activation of IL-23/IL-17 inflammatory axis in blood
mononuclear cells, spleen, kidney and heart tissue. IL23/IL17 activation is
depended on the MR activation and independent of hypertension.
These results indicate that activation of the MR is required for the Th17
polarization caused by DOCA-salt treatment, and suggests the pharmacological
treatment with MR antagonists (spironolactone, eplerenone) may be used
clinically as an anti-inflammatory approach in the treatment of hypertension
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UCHILE/oai:repositorio.uchile.cl:2250/146005 |
| Date | January 2013 |
| Creators | Peña Méndez, Juan Pedro |
| Contributors | Michea Acevedo, Luis, Farías Roldán, Gustavo, Parraguez Gamboa, Víctor Hugo, Vergara Castillo, Ulises, Zúñiga Martí, Claudio |
| Publisher | Universidad de Chile |
| Source Sets | Universidad de Chile |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | Tesis |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Chile, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/ |
Page generated in 0.0023 seconds