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Previous issue date: 2008-07-02 / Staphylococcus aureus, Staphylococcus hyicus e Staphylococcus intermedius are
species of genus Staphylococcus capable of producing enterotoxins, as well as the
enzymes termonuclease and coagulase, and are called Staphylococcus Coagulase
Positive (SCP). They show very similar biochemical and morphological
characteristics, this fact, makes their differentiation and they identification in food by
phenotypic techniques very difficult. In this way, the aim of this work was the
development of a Multiplex PCR (mPCR), targetting the nuc gene (encoding for
thermonuclease) as target, for the identification of S. aureus, S. intermedius, and S.
hyicus. Initially, the mPCR was standartizeted using reference strains of S. aureus, S.
warneri, S. lugdunensis and Listeria monocytogenes and isolates of S. hyicus and S.
intermedius, affer words it was tested with 16 isolates of the three species of SCP.
The primers annealing to each of the three species, the conditions for mPCR, the
suitability of the Internal Amplification Control (IAC) for the genus Staphylococcus,
and the sequences obtained through the amplification by PCR were evaluated. After
this, the results were compared with those achieved by biochemical tests for
differentiation of SCP. Primers NUC1-NUC2 (for sequences of the S. aureus nuc
gene), NUC5-NUC6 (for sequences of the S. intermedius nuc gene), NUC7-NUC8
(for sequences of the S. hyicus nuc gene) and, as IAC, the primers 16S1 16S2 (for
sequences of the 16S of rRNA gene) were used. The mPCR proposed enable the
identification of S. aureus, S. hyicus e S. intermedius, and the IAC was suitable for
the genus. The sequences obtained in PCR showed a high degree of similarity with
the sequences of the thermonuclease gene deposited in GenBank. The mPCR
showed greater discriminatory power that the biochemical tests for identification the
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S. aureus, S. hyicus e S. intermedius, as well as reduced the time required for the
identification of ECP (reduction of 24h) or identification of specie (reduction of 72h). / Staphylococcus aureus, Staphylococcus hyicus e Staphylococcus intermedius são
espécies do gênero Staphylococcus com capacidade de produzir enterotoxinas, bem
como as enzimas termonuclease e coagulase, sendo denominadas de Estafilococos
Coagulase Positiva (ECP). Apresentam características morfológicas e bioquímicas
extremamente semelhantes, o que torna difícil sua diferenciação assim como sua
identificação em alimentos através de técnicas fenotípicas de análise microbiológica.
Dessa forma, este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um Multiplex
PCR (mPCR), tendo-se como alvo o gene nuc (codifica para a termonuclease), para
a identificação de S. aureus, S. intermedius e S. hyicus. Inicialmente, o mPCR foi
padronizado utilizando-se cepas padrão de S. aureus, S. warneri, S. lugdunensis e
Listeria monocytogenes e isolados de S. hyicus e S. intermedius, e, posteriormente,
foi testado em 16 isolados das três espécies de ECP. Foram avaliadas a
sensibilidade dos primers para cada uma das três espécies, as condições da mPCR,
a sensibilidade do Controle Interno de Amplificação (IAC) para o gênero
Estafilococos, e as seqüências obtidas através da amplificação por PCR.
Posteriormente, os resultados foram comparados aos obtidos com testes
bioquímicos de diferenciação de ECP. Foram utilizados os primers NUC1-NUC2
(para seqüências do gene nuc de S. aureus), NUC5-NUC6 (para seqüências do
gene nuc de S. intermedius), NUC7-NUC8 (para seqüências do gene nuc de S.
hyicus) e, para amplificação do IAC, os primers 16S1 16S2 (para seqüências do
gene 16S do rRNA). O mPCR proposto possibilitou a identificação das espécies S.
aureus, S. hyicus e S. intermedius, bem como o IAC utilizado apresentou
sensibilidade para o gênero. As seqüências obtidas na PCR apresentaram elevado
v
grau de similaridade com as seqüências do gene da termonuclease depositadas no
GenBank. A mPCR apresentou maior poder discriminatório que os testes
bioquímicos para identificação de S. aureus, S. hyicus e S. intermedius, bem como
reduziu significativamente o tempo necessário para a identificação de ECP (redução
de 24h) ou de identificação em nível de espécie (redução de 72h).
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpel.edu.br:123456789/1310 |
| Date | 02 July 2008 |
| Creators | Bastos, Caroline Peixoto |
| Contributors | CPF:30142725072, http://lattes.cnpq.br/5231261744494804, Silva, Wladimir Padilha da |
| Publisher | Universidade Federal de Pelotas, Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia Agroindustrial, UFPel, BR, Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPEL, instname:Universidade Federal de Pelotas, instacron:UFPEL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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