Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-09Bitstream added on 2014-06-13T18:08:11Z : No. of bitstreams: 1 lorenzon_cs_me_jabo.pdf: 230149 bytes, checksum: d9f1485e99a4471e89d6e1d273b98a86 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo deste trabalho foi determinar o número de coliformes totais, termotolerantes, Staphylococcus coagulase positivo e a presença de bactéria do gênero Salmonella no músculo, no tecido superficial, no trato gastrintestinal de peixes e na água de cultivo de pesque-pagues situados na microbacia do Córrego Rico, região nordeste do estado de São Paulo. Não foi detectado Staphylococcus coagulase positivo em nenhuma amostra de água e peixe. Na contagem de Staphylococcus sp. a água de enxaguadura da pele apresentou números que variam de 1,0 x 102 a 3,3 x 105 UFC.mL-1; no músculo de 1,0 X 102 a 6,7 x 103 UFC.g-1; no trato gastrintestinal de 1,0 x 103 a 2,9 x 105 UFC.g-\ e na água de cultivo de < 20 a 3,3 x 102 UFC.mL-1. O número mais provável (NMP) de coliformes totais na pele variou de 1,5 x 103 a > 1,1 x 104 NMP.100mL-1; no músculo variou de 2,0 x 10 a> 1,1 x 103 NMP.g-1; no trato gastrintestinal variou de 2,6 x 103 a> 1,1 x 104 NMP.g-1; e na água de cultivo variou de 4,2 x 104 a> 2,4 x 105 NMP.100mL-1. Para coliformes termotolerantes a água de enxaguadura da pele variou de < 3,0 x 10 a 1,4 x 103 NMP.IOOmL-1; no músculo variou de < 3 a 6 NMP.g-1; no trato gastrintestinal variou de 1,2 X 103 a 5,1 x 103 NMP.g-1; e na água de cultivo variou de 3,8 x 102 a 2,0 x 104 NMP.100mL-1. Não houve diferença estatística (P>0,05) entre as populações de microrganismos pesquisados na água, pele e trato gastrintestinal o que reflete a relação direta entre a presença dos microrganismos na água e nesses dois locais analisados. No que se refere à musculatura verifica-se que existe diferença (P<0,05) entre a população de microrganismos na água e na musculatura, sendo na musculatura sempre menor. Foi isolada Salmonella sp. em uma amostra de músculo e em duas amostras de trato gastrintestinal. O pescado pode ser veículo de contaminação cruzada, tendo como... / The aim of this work was to determine the number of total coliforms, thermotolerant, Staphylococcus coagulase positive and the presence of bacteria of the genus Salmonella in the muscle, in the surface tissue, in the gastrointestinal tract of fish and pond water of fee- fishing located in Cón-ego Rico microwatershed, northeast region of São Paulo state. Staphylococcus coagulase positive was not detected in any sample of pond water and fish. In the Staphylococcus sp. counts the surface tis sue ranged from 1,0 x 102 to 3,3 X 105 UFC.mL-1; in the musc1e from 1,0 x 102 to 6,7 x 103 UFC.g-1; in the gastrointestinal tract of fish from 1,0 x 103 to 2,9 X 105 UFC.g-1; and in pond water from < 20 to 3,3 X 102 UFC.mL¬1. The most probable number (NMP) of total coliforms in the surface tissue ranged from 1,5 x 103 to > 1,1 X 104 NMP.100mL-1; in the muscle from 2,0 x 10 to > 1,1 X 103 NMP.g-1; in the gastrointestinal tract offish from de 2,6 x 103 to> 1,1 X 104 NMP.g-1; and in pond water from 4,2 x 104 to > 2,4 X 105 NMP.1 00mL-1 . In thermotolerant coliforms the surface tissue ranged from < 3,0 x 10 to 1,4 X 103 NMP.100mL-1; in the musc1e from < 3 to 6 NMP.g-1; in the gastrointestinal tract of fish from de 1,2 x 103 to 5,1 X 103 NMP.g-1; and in pond water from 3,8 x 102 to 2,0 X 104 NMP.100mL-1. There was no statistical difference (P>0,05) among the studied populations of microorganisms in water, skin and gastrointestinal tract that reflects the relationship between the presence of microorganisms in water and in these two tissues analyzed. Conceming the musc1e there is difference (P<0,05) among the population of microorganisms in water and muscle, in which muscles were always smaller. Salmonella sp. was isolated in a sample of muscle and in two samples of gastrointestinal tract. The fish ean be a vehic1e of cross contamination, and the gastrointestinal tract and skin as a source of microorganisms... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Luiz Augusto do Amaral / Banca: Laudicéia Giacometti Lopes / Banca: Maria da Glória Buzinaro / Resumo: O objetivo deste trabalho foi determinar o número de coliformes totais, termotolerantes, Staphylococcus coagulase positivo e a presença de bactéria do gênero Salmonella no músculo, no tecido superficial, no trato gastrintestinal de peixes e na água de cultivo de pesque-pagues situados na microbacia do Córrego Rico, região nordeste do estado de São Paulo. Não foi detectado Staphylococcus coagulase positivo em nenhuma amostra de água e peixe. Na contagem de Staphylococcus sp. a água de enxaguadura da pele apresentou números que variam de 1,0 x 102 a 3,3 x 105 UFC.mL-1; no músculo de 1,0 X 102 a 6,7 x 103 UFC.g-1; no trato gastrintestinal de 1,0 x 103 a 2,9 x 105 UFC.g-\ e na água de cultivo de < 20 a 3,3 x 102 UFC.mL-1. O número mais provável (NMP) de coliformes totais na pele variou de 1,5 x 103 a > 1,1 x 104 NMP.100mL-1; no músculo variou de 2,0 x 10 a> 1,1 x 103 NMP.g-1; no trato gastrintestinal variou de 2,6 x 103 a> 1,1 x 104 NMP.g-1; e na água de cultivo variou de 4,2 x 104 a> 2,4 x 105 NMP.100mL-1. Para coliformes termotolerantes a água de enxaguadura da pele variou de < 3,0 x 10 a 1,4 x 103 NMP.IOOmL-1; no músculo variou de < 3 a 6 NMP.g-1; no trato gastrintestinal variou de 1,2 X 103 a 5,1 x 103 NMP.g-1; e na água de cultivo variou de 3,8 x 102 a 2,0 x 104 NMP.100mL-1. Não houve diferença estatística (P>0,05) entre as populações de microrganismos pesquisados na água, pele e trato gastrintestinal o que reflete a relação direta entre a presença dos microrganismos na água e nesses dois locais analisados. No que se refere à musculatura verifica-se que existe diferença (P<0,05) entre a população de microrganismos na água e na musculatura, sendo na musculatura sempre menor. Foi isolada Salmonella sp. em uma amostra de músculo e em duas amostras de trato gastrintestinal. O pescado pode ser veículo de contaminação cruzada, tendo como... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this work was to determine the number of total coliforms, thermotolerant, Staphylococcus coagulase positive and the presence of bacteria of the genus Salmonella in the muscle, in the surface tissue, in the gastrointestinal tract of fish and pond water of fee- fishing located in Cón-ego Rico microwatershed, northeast region of São Paulo state. Staphylococcus coagulase positive was not detected in any sample of pond water and fish. In the Staphylococcus sp. counts the surface tis sue ranged from 1,0 x 102 to 3,3 X 105 UFC.mL-1; in the musc1e from 1,0 x 102 to 6,7 x 103 UFC.g-1; in the gastrointestinal tract of fish from 1,0 x 103 to 2,9 X 105 UFC.g-1; and in pond water from < 20 to 3,3 X 102 UFC.mL¬1. The most probable number (NMP) of total coliforms in the surface tissue ranged from 1,5 x 103 to > 1,1 X 104 NMP.100mL-1; in the muscle from 2,0 x 10 to > 1,1 X 103 NMP.g-1; in the gastrointestinal tract offish from de 2,6 x 103 to> 1,1 X 104 NMP.g-1; and in pond water from 4,2 x 104 to > 2,4 X 105 NMP.1 00mL-1 . In thermotolerant coliforms the surface tissue ranged from < 3,0 x 10 to 1,4 X 103 NMP.100mL-1; in the musc1e from < 3 to 6 NMP.g-1; in the gastrointestinal tract of fish from de 1,2 x 103 to 5,1 X 103 NMP.g-1; and in pond water from 3,8 x 102 to 2,0 X 104 NMP.100mL-1. There was no statistical difference (P>0,05) among the studied populations of microorganisms in water, skin and gastrointestinal tract that reflects the relationship between the presence of microorganisms in water and in these two tissues analyzed. Conceming the musc1e there is difference (P<0,05) among the population of microorganisms in water and muscle, in which muscles were always smaller. Salmonella sp. was isolated in a sample of muscle and in two samples of gastrointestinal tract. The fish ean be a vehic1e of cross contamination, and the gastrointestinal tract and skin as a source of microorganisms... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:42:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_ Caroline_Peixoto_ Bastos.pdf: 482424 bytes, checksum: 0f1a1fb787f50f0f7f89d2501df4b4db (MD5) Previous issue date: 2008-07-02 / Staphylococcus aureus, Staphylococcus hyicus e Staphylococcus intermedius are species of genus Staphylococcus capable of producing enterotoxins, as well as the enzymes termonuclease and coagulase, and are called Staphylococcus Coagulase Positive (SCP). They show very similar biochemical and morphological characteristics, this fact, makes their differentiation and they identification in food by phenotypic techniques very difficult. In this way, the aim of this work was the development of a Multiplex PCR (mPCR), targetting the nuc gene (encoding for thermonuclease) as target, for the identification of S. aureus, S. intermedius, and S. hyicus. Initially, the mPCR was standartizeted using reference strains of S. aureus, S. warneri, S. lugdunensis and Listeria monocytogenes and isolates of S. hyicus and S. intermedius, affer words it was tested with 16 isolates of the three species of SCP. The primers annealing to each of the three species, the conditions for mPCR, the suitability of the Internal Amplification Control (IAC) for the genus Staphylococcus, and the sequences obtained through the amplification by PCR were evaluated. After this, the results were compared with those achieved by biochemical tests for differentiation of SCP. Primers NUC1-NUC2 (for sequences of the S. aureus nuc gene), NUC5-NUC6 (for sequences of the S. intermedius nuc gene), NUC7-NUC8 (for sequences of the S. hyicus nuc gene) and, as IAC, the primers 16S1 16S2 (for sequences of the 16S of rRNA gene) were used. The mPCR proposed enable the identification of S. aureus, S. hyicus e S. intermedius, and the IAC was suitable for the genus. The sequences obtained in PCR showed a high degree of similarity with the sequences of the thermonuclease gene deposited in GenBank. The mPCR showed greater discriminatory power that the biochemical tests for identification the vii S. aureus, S. hyicus e S. intermedius, as well as reduced the time required for the identification of ECP (reduction of 24h) or identification of specie (reduction of 72h). / Staphylococcus aureus, Staphylococcus hyicus e Staphylococcus intermedius são espécies do gênero Staphylococcus com capacidade de produzir enterotoxinas, bem como as enzimas termonuclease e coagulase, sendo denominadas de Estafilococos Coagulase Positiva (ECP). Apresentam características morfológicas e bioquímicas extremamente semelhantes, o que torna difícil sua diferenciação assim como sua identificação em alimentos através de técnicas fenotípicas de análise microbiológica. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um Multiplex PCR (mPCR), tendo-se como alvo o gene nuc (codifica para a termonuclease), para a identificação de S. aureus, S. intermedius e S. hyicus. Inicialmente, o mPCR foi padronizado utilizando-se cepas padrão de S. aureus, S. warneri, S. lugdunensis e Listeria monocytogenes e isolados de S. hyicus e S. intermedius, e, posteriormente, foi testado em 16 isolados das três espécies de ECP. Foram avaliadas a sensibilidade dos primers para cada uma das três espécies, as condições da mPCR, a sensibilidade do Controle Interno de Amplificação (IAC) para o gênero Estafilococos, e as seqüências obtidas através da amplificação por PCR. Posteriormente, os resultados foram comparados aos obtidos com testes bioquímicos de diferenciação de ECP. Foram utilizados os primers NUC1-NUC2 (para seqüências do gene nuc de S. aureus), NUC5-NUC6 (para seqüências do gene nuc de S. intermedius), NUC7-NUC8 (para seqüências do gene nuc de S. hyicus) e, para amplificação do IAC, os primers 16S1 16S2 (para seqüências do gene 16S do rRNA). O mPCR proposto possibilitou a identificação das espécies S. aureus, S. hyicus e S. intermedius, bem como o IAC utilizado apresentou sensibilidade para o gênero. As seqüências obtidas na PCR apresentaram elevado v grau de similaridade com as seqüências do gene da termonuclease depositadas no GenBank. A mPCR apresentou maior poder discriminatório que os testes bioquímicos para identificação de S. aureus, S. hyicus e S. intermedius, bem como reduziu significativamente o tempo necessário para a identificação de ECP (redução de 24h) ou de identificação em nível de espécie (redução de 72h).