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Previous issue date: 2017-07-05 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Glucose oxidase (Gox) has several industrial applications. It is believed that there are diversified fungal species that have the production capacity of this enzyme and most are unexplored. The objective of this work was to investigate a production of Glucose Oxidase (EC 1.1.3.4) by fungi isolated from soil samples from the Amazon Forest. Soil fungi were isolated from the Adolpho Ducke Forest Reserve, located in the city of Manaus-Amazonas. To select good GOx producers, such as submitted in submerged bioprocess. The isolates highlighted in the production of the enzyme were submitted to kinetic tests where the enzyme production, biomass and substrate consumption by isolates were evaluated. Univariate and multivariate assays performed to optimize the production process. An enzymatic production for the semi-continuous process. The crude enzyme was purified by precipitation processes, dialysis ion exchange chromatography. The potential of this enzyme in the elaboration of a Glucose quantification kit through calibration curves, the regression coefficient, was investigated as biochemical characteristics and GOx (optimum temperature, optimum pH, stability and ionic effect in the enzymatic activity. However, only seven were identified as potential producers of this enzyme, being five of the genus Aspergillus and two of the genus Penicillium, with values ranging from 14.93 U/mL – 35.54 U/mL. Kinetics showed that the Aspergillus LMM01 isolate was the best producer of the enzyme, and this was used isolated in the subsequent experiments. Experiments with variants demonstrated with the greatest effect on the production of GOx were PH and agitation. A result for GOx (7.74 U/mL) was obtained, for 7 days, use the semi-continuous. After purification process, an activity and the enzyme improved 938%, a temperature of 40 ° C and pH 6.0 were the optimum for a catalytic action of the enzyme and stability presented as its main industrial needs. Fe+++, Pb++, Ag+, Hg++ and Cu++ ions showed significant inhibition of GOx activity. In the present study, a Pearson correlation of the developed Kit and the commercial Kit was strong positive, with value of r = 0.9978. The results are compatible with a literature where the genera Aspergillus and Penicillium stand out as the main industrial producers of GOx. / A glicose oxidase (GOx) possui diversas aplicações industriais. Acredita-se que existem diversificadas espécies fúngicas que possuem capacidade de produzir essa enzima e a maior parte encontra-se inexplorada. Este trabalho teve como finalidade investigar a produção de Glicose Oxidase (EC 1.1.3.4) por fungos isolados de amostras de solo da Floresta Amazônica. Foram isolados fungos filamentosos de amostras de solo da Reserva Florestal Adolpho Ducke, localizada na cidade de Manaus-Amazonas. Para selecionar bons produtores de GOx, esses foram submetidos em cultivo submerso. Os isolados destacados na produção da enzima foram submetidos a ensaios de cinética onde foi avaliada a produção da mesma, biomassa e o consumo do substrato pelos isolados. Ensaios univariados e multivariados foram realizados para otimizar o processo de produção. Uma produção enzimática foi realizada utilizando processo semi-contínuo. A enzima bruta foi purificada pelos processos de precipitação, diálise cromatografia de troca iônica. Foram investigadas as características bioquímicas da GOx (melhor temperatura, melhor pH, estabilidade e o efeito de íons na atividade enzimática). Analisou-se o potencial desta enzima na elaboração de um Kit de quantificação de Glicose através de curvas de calibração, o coeficiente de regressão e coeficiente de correlação. Quanto aos resultados obtidos, foi detectada a produção de GOx em todas as cepas analisadas, entretanto, apenas sete se destacaram como potenciais produtores desta enzima, sendo cinco do gênero Aspergillus e dois do gênero Penicillium, com valores que variaram de 14,93 U/mL – 35,54 U/mL. A cinética demonstrou que o isolado Aspergillus LMM01 foi o melhor produtor da enzima, sendo portanto este isolado, utilizado nos experimentos posteriores. Experiências multivariadas demonstraram que os parâmetros com maior efeito na produção de GOx foram o pH e a agitação. Obteve-se um resultado estável para GOx (7,74 U/mL), durante 7 dias, utilizando o processo semi-contínuo. Após o processo de purificação, a atividade da enzima melhorou 938%, a temperatura de 40° C e o pH 6,0 foram os melhores para a ação catalítica da enzima e a estabilidade apresentou-se adequada as suas principais necessidades industriais. Os íons Fe+++, Pb++, Ag+, Hg++ e Cu++ exibiram inibição significante na atividade de GOx. No presente estudo, a correlação de Pearson do Kit desenvolvido e o Kit comercial foi forte positiva, com valor de r = 0,9978. Os resultados foram compatíveis com a literatura, onde destacam-se os gêneros Aspergillus e Penicillium como os principais produtores industrias de GOx.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/5935 |
| Date | 05 July 2017 |
| Creators | Sousa, Diego Rayan Teixeira de, 92-99178-4777 |
| Contributors | ppgbiotec@ufam.edu.br, Souza, João Vicente Braga de |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Amazônia Legal - BIONORTE, UFAM, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 1984485651082134923, 500 |
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