β-glicosidases são enzimas que catalisam a hidrólise de ligações β-glicosídicas, e diversas aplicações biotecnológicas são postuladas para β-glicosidases microbianas. Este estudo apresenta a triagem de substratos para a produção de uma β-glicosidase extracelular por Monascus purpureus NRRL1992 em cultivo submerso, bem como a purificação parcial e a caracterização da enzima. A produção da enzima demonstrou ser indutível e controlada por repressão catabólica. A maior produção de β-glicosidase foi observada com a utilização de resíduo de uva e peptona como substratos. A purificação parcial da β-glicosidase envolveu a precipitação com acetona e etapas de cromatografia líquida (gel-filtração e interação hidrofóbica), resultando em fator de purificação de 92 vezes e recuperação de 23% a partir do extrato bruto. A enzima apresentou atividade ótima em amplas faixas de temperaturas e pHs frente ao substrato p-nitrofenil-β-D-glicopiranosídeo (pNPβG), sendo selecionadas as condições de 50 °C e pH 5,5. A β-glicosidase demonstrou ser moderadamente termoestável, apresentando atividade residual de 78% após 120 minutos a 60 °C. Os íons Hg2+ e Cr3+ inibiram a atividade β-glicolítica, provavelmente através de modificações estruturais da enzima. β-mercaptoetanol, SDS, entre outros reagentes não afetaram a catálise. Etanol ou metanol em baixas concentrações estimularam a atividade enzimática, possivelmente devido à atuação da enzima como glicosiltransferase; contudo, o aumento na concentração destes álcoois reduziu a atividade enzimática. A hidrólise de pNPβG, celobiose, maltose, salicina e n-octil-β-D-glicopiranosídeo indica a ampla especificidade da enzima frente à diferentes substratos. As constantes cinéticas Km e Vmax foram definidas para pNPβG, celobiose e maltose, sendo observados valores intermediários para β-glicosidases. Glicose e celobiose inibiram competitivamente a hidrólise de pNPβG. / β-glucosidases are enzymes that catalyse the hydrolysis of β-glycosidic linkages, and various biotechnological applications are proposed for microbial β-glucosidases. This study presents the screening of substrates for extracellular β-glucosidase production by Monascus purpureus NRRL1992 in submerged cultivations, as well as the enzyme partial purification and caracterization. The enzyme production showed to be inducible and controled by catabolic repression. The higher β-glucosidase production was observed with grape residue and peptone as substrates. The β-glucosidase partial purification involved acetone precipitation and liquid chromatography steps (gel-filtration and hydrophobic interaction), resulting in a 92-fold purification factor and a recovery of 23% from the crude extract. The enzyme showed optimal activity in a wide range of temperatures and pH values for p-nitrophenyl-β-Dglucopyranoside (pNPβG) hydrolysis. β-glucosidases are enzymes that catalyse the hydrolysis of β-glycosidic linkages, and various biotechnological applications are proposed for microbial β-glucosidases. This study presents the screening of substrates for extracellular β-glucosidase production by Monascus purpureus NRRL1992 in submerged cultivations, as well as the enzyme partial purification and caracterization. The enzyme production showed to be inducible and controled by catabolic repression. The higher β-glucosidase production was observed with grape residue and peptone as substrates. The β-glucosidase partial purification involved acetone precipitation and liquid chromatography steps (gel-filtration and hydrophobic interaction), resulting in a 92-fold purification factor and a recovery of 23% from the crude extract. The enzyme showed optimal activity in a wide range of temperatures and pH values for p-nitrophenyl-β-Dglucopyranoside (pNPβG) hydrolysis.

β-glicosidases são enzimas que catalisam a hidrólise de ligações β-glicosídicas, e diversas aplicações biotecnológicas são postuladas para β-glicosidases microbianas. Este estudo apresenta a triagem de substratos para a produção de uma β-glicosidase extracelular por Monascus purpureus NRRL1992 em cultivo submerso, bem como a purificação parcial e a caracterização da enzima. A produção da enzima demonstrou ser indutível e controlada por repressão catabólica. A maior produção de β-glicosidase foi observada com a utilização de resíduo de uva e peptona como substratos. A purificação parcial da β-glicosidase envolveu a precipitação com acetona e etapas de cromatografia líquida (gel-filtração e interação hidrofóbica), resultando em fator de purificação de 92 vezes e recuperação de 23% a partir do extrato bruto. A enzima apresentou atividade ótima em amplas faixas de temperaturas e pHs frente ao substrato p-nitrofenil-β-D-glicopiranosídeo (pNPβG), sendo selecionadas as condições de 50 °C e pH 5,5. A β-glicosidase demonstrou ser moderadamente termoestável, apresentando atividade residual de 78% após 120 minutos a 60 °C. Os íons Hg2+ e Cr3+ inibiram a atividade β-glicolítica, provavelmente através de modificações estruturais da enzima. β-mercaptoetanol, SDS, entre outros reagentes não afetaram a catálise. Etanol ou metanol em baixas concentrações estimularam a atividade enzimática, possivelmente devido à atuação da enzima como glicosiltransferase; contudo, o aumento na concentração destes álcoois reduziu a atividade enzimática. A hidrólise de pNPβG, celobiose, maltose, salicina e n-octil-β-D-glicopiranosídeo indica a ampla especificidade da enzima frente à diferentes substratos. As constantes cinéticas Km e Vmax foram definidas para pNPβG, celobiose e maltose, sendo observados valores intermediários para β-glicosidases. Glicose e celobiose inibiram competitivamente a hidrólise de pNPβG. / β-glucosidases are enzymes that catalyse the hydrolysis of β-glycosidic linkages, and various biotechnological applications are proposed for microbial β-glucosidases. This study presents the screening of substrates for extracellular β-glucosidase production by Monascus purpureus NRRL1992 in submerged cultivations, as well as the enzyme partial purification and caracterization. The enzyme production showed to be inducible and controled by catabolic repression. The higher β-glucosidase production was observed with grape residue and peptone as substrates. The β-glucosidase partial purification involved acetone precipitation and liquid chromatography steps (gel-filtration and hydrophobic interaction), resulting in a 92-fold purification factor and a recovery of 23% from the crude extract. The enzyme showed optimal activity in a wide range of temperatures and pH values for p-nitrophenyl-β-Dglucopyranoside (pNPβG) hydrolysis. β-glucosidases are enzymes that catalyse the hydrolysis of β-glycosidic linkages, and various biotechnological applications are proposed for microbial β-glucosidases. This study presents the screening of substrates for extracellular β-glucosidase production by Monascus purpureus NRRL1992 in submerged cultivations, as well as the enzyme partial purification and caracterization. The enzyme production showed to be inducible and controled by catabolic repression. The higher β-glucosidase production was observed with grape residue and peptone as substrates. The β-glucosidase partial purification involved acetone precipitation and liquid chromatography steps (gel-filtration and hydrophobic interaction), resulting in a 92-fold purification factor and a recovery of 23% from the crude extract. The enzyme showed optimal activity in a wide range of temperatures and pH values for p-nitrophenyl-β-Dglucopyranoside (pNPβG) hydrolysis.

β-glicosidases são enzimas que catalisam a hidrólise de ligações β-glicosídicas, e diversas aplicações biotecnológicas são postuladas para β-glicosidases microbianas. Este estudo apresenta a triagem de substratos para a produção de uma β-glicosidase extracelular por Monascus purpureus NRRL1992 em cultivo submerso, bem como a purificação parcial e a caracterização da enzima. A produção da enzima demonstrou ser indutível e controlada por repressão catabólica. A maior produção de β-glicosidase foi observada com a utilização de resíduo de uva e peptona como substratos. A purificação parcial da β-glicosidase envolveu a precipitação com acetona e etapas de cromatografia líquida (gel-filtração e interação hidrofóbica), resultando em fator de purificação de 92 vezes e recuperação de 23% a partir do extrato bruto. A enzima apresentou atividade ótima em amplas faixas de temperaturas e pHs frente ao substrato p-nitrofenil-β-D-glicopiranosídeo (pNPβG), sendo selecionadas as condições de 50 °C e pH 5,5. A β-glicosidase demonstrou ser moderadamente termoestável, apresentando atividade residual de 78% após 120 minutos a 60 °C. Os íons Hg2+ e Cr3+ inibiram a atividade β-glicolítica, provavelmente através de modificações estruturais da enzima. β-mercaptoetanol, SDS, entre outros reagentes não afetaram a catálise. Etanol ou metanol em baixas concentrações estimularam a atividade enzimática, possivelmente devido à atuação da enzima como glicosiltransferase; contudo, o aumento na concentração destes álcoois reduziu a atividade enzimática. A hidrólise de pNPβG, celobiose, maltose, salicina e n-octil-β-D-glicopiranosídeo indica a ampla especificidade da enzima frente à diferentes substratos. As constantes cinéticas Km e Vmax foram definidas para pNPβG, celobiose e maltose, sendo observados valores intermediários para β-glicosidases. Glicose e celobiose inibiram competitivamente a hidrólise de pNPβG. / β-glucosidases are enzymes that catalyse the hydrolysis of β-glycosidic linkages, and various biotechnological applications are proposed for microbial β-glucosidases. This study presents the screening of substrates for extracellular β-glucosidase production by Monascus purpureus NRRL1992 in submerged cultivations, as well as the enzyme partial purification and caracterization. The enzyme production showed to be inducible and controled by catabolic repression. The higher β-glucosidase production was observed with grape residue and peptone as substrates. The β-glucosidase partial purification involved acetone precipitation and liquid chromatography steps (gel-filtration and hydrophobic interaction), resulting in a 92-fold purification factor and a recovery of 23% from the crude extract. The enzyme showed optimal activity in a wide range of temperatures and pH values for p-nitrophenyl-β-Dglucopyranoside (pNPβG) hydrolysis. β-glucosidases are enzymes that catalyse the hydrolysis of β-glycosidic linkages, and various biotechnological applications are proposed for microbial β-glucosidases. This study presents the screening of substrates for extracellular β-glucosidase production by Monascus purpureus NRRL1992 in submerged cultivations, as well as the enzyme partial purification and caracterization. The enzyme production showed to be inducible and controled by catabolic repression. The higher β-glucosidase production was observed with grape residue and peptone as substrates. The β-glucosidase partial purification involved acetone precipitation and liquid chromatography steps (gel-filtration and hydrophobic interaction), resulting in a 92-fold purification factor and a recovery of 23% from the crude extract. The enzyme showed optimal activity in a wide range of temperatures and pH values for p-nitrophenyl-β-Dglucopyranoside (pNPβG) hydrolysis.

El trabajo de investigación que se describe en la presente memoria se plantea como objetivo el desarrollo de un EnFET con aplicación clínica en la medición de la concentración de urea de manera indirecta en líquido dializado para propósito de diagnóstico clínico más rápido, exacto y utilizando pequeñas cantidades de componentes químicos, específicamente en diálisis. El ENFET implementado atiende a la reacción química en donde la urea es catalizada por la enzima ureasa, utilizando una membrana enzimática con la ureasa como la enzima escogida. Para conseguir el objetivo planteado, se ha diseñado y puesto a punto la tecnología de fabricación del ISFET. Sobre la base de los resultados obtenidos por el propio autor en el desarrollo de su tesina, se ha desarrollado el tratamiento previo del transductor ISFET, su acondicionamiento y obtención de la sensibilidad adecuada para la aplicación clínica que se persigue. Se ha puesto también a punto el proceso de formación de la membrana enzimáticaconveniente, así como la técnica de inmovilización de la enzima ureasa y la "fijación" de la enzima ureasa sobre el transductor ISFET. La fijación de la membrana es uno de los puntos críticos del micro-sensor puesto que el período de vida del dispositivo depende totalmente de la "calidad" de la misma. Finalmente se han caracterizado en laboratorio los dispositivos EnFET obtenidos.El trabajo realizado ha generado un ENFET de fácil industrialización, con un tiempo de vida superior a dos meses y medio, eficiente para la medida indirecta de la concentración de urea en sangre a partir de la medida de la concentración de urea en el líquido dializado. El dispositivo se ha verificado en laboratorio realizando medidas de la concentración de urea sobre muestras ideales y comparando las medidas obtenidas con el dispositivo con medidas realizadas según procedimientos analíticos convencionales.Los parámetros del ENFET que reflejan su excelente calidad son Sensibilidad (mV/dec urea): 77.02; Límite inferior de respuesta lineal: 3.10-4 M; Rango lineal de Detección: 3.10-4 M - 2.10-3 M ;Tiempo de respuesta: 90s; Estabilidad del potencial medido: ±0.3mV; Tiempo de vida: 75 días. Los ENFETs desarrollados fueron sometidos a pruebas de reproducibilidad o repetitividad de la respuesta observándose que satisfacen ampliamente los requerimientos consistentes en que se obtienen valores de potencial eléctrico de valores similares en 10 mediciones efectuadas en dos días consecutivos. La desviación de los valores medidos respecto al valor promedio (253.61mV) aparece entre -0.34mV a 0.50mV. Estos valores del potencial eléctrico que aparece en la interfase membrana enzimática-óxido del ISFET, prácticamente constantes, y que esta relacionado en forma indirecta con la concentración de urea en la solución, permiten asegurar el buen desempeño del ENFET en pruebas reales en trabajo continuo. Posteriormente, el dispositivo se ha validado en aplicación realizando medidas de concentración de urea en muestras de liquido dializado de pacientes del Hospital Parc Tauli recogidas en distintas etapas del proceso de diálisis y procediendo a comparar y hacer las correlaciones respectivas con los valores medidos sobre las mismas muestras por un laboratorio comercial mostrándose que la diferencias en las medidas son del orden de 2.5%.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-19T14:47:34Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 388457 bytes, checksum: bd4950787613f149e5cd12a76f7c0eb8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-19T14:47:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 388457 bytes, checksum: bd4950787613f149e5cd12a76f7c0eb8 (MD5) Previous issue date: 2002-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O fungo Penicillium expansum, produtor de enzimas pectinolíticas e xilanolíticas, as quais possuem aplicação na indústria têxtil, na indústria de bebidas, principalmente na clarificação de sucos e vinhos, e na indústria de alimentos, está incluído entre as espécies toxigênicas capazes de produzir micotoxinas, dentre elas a citrinina. A presença dessa micotoxina inviabiliza a utilização de P. expansum na indústria de alimentos. Com o propósito de analisar a possibilidade desse fungo produzir simultaneamente as enzimas de interesse e a citrinina, foram verificadas seis linhagens de Penicillium , que vêm sendo utilizadas em estudos de produção de pectinases e xilanases na Universidade Federal de Viçosa. Dois métodos de análise, cromatografia em camada delgada (CCD) em sílica-gel e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em fase reversa, foram utilizados com o único propósito de detectar citrinina. Dentre as seis linhagens, P. citrinum (principal produtor de citrinina ), P. expansum GF (linhagem toxigênica isolada de maçãs deterioradas), P. expansum VIC, P. griseoroseum , P. roqueforti e P. camemberti , apenas P. citrinum e P. expansum GF produziram citrinina nos três meios de cultivo testados (Timonin, YES e Aveia). P. roqueforti produziu citrinina apenas em caldo Timonin e os demais não a produziram em nenhum dos meios testados. Apenas o fungo P. citrinum foi capaz de produzir citrinina sob condições de incubação estática e em agitação rotacional a 150 rpm, em longos períodos de tempo (40 dias). O fungo P. expansum GF produziu a citrinina somente em condições estáticas, os demais fungos testados, P. expansum VIC, e P. roqueforti , também cultivados em ambas as condições, foram incapazes de produzir citrinina. Deste modo, pode-se concluir que os fungos P. expansum VIC e P. griseoroseum não representam perigo quanto à produção de citrinina, quando utilizados na indústria de alimentos, pois não têm capacidade de produzir a micotoxina nas mesmas condições em que produzem as enzimas de interesse, poligalacturonase e xilanase. / The fungus Penicillium expansum , which produces pectinolytic and xylanolytic enzymes with application in the textile, food and beverage industries, is one of the toxigenic species capable of producing mycotoxins, one of which is citrinin. The presence of this mycotoxin would preclude the use of P. expansum in the food industry. Six lineages of Penicillium that are being used in studies of pectinase and xylanase production at the Universidade Federal de Viçosa were therefore evaluated for possible simultaneous production of the enzymes of interest and citrinin. Both thin layer (TLC) and reverse phase liquid (HPLC) chromatographies were used to detect citrinin. Of the six lineages evaluated, P. citrinum (principal citrinin producer) , P. expansum GF (a toxigenic lineage isolated from rotten apples), P. expansum VIC, P. camemberti , and P. roqueforti , only P. citrinum and P. expansum GF produced citrinin in the three culture media tested (Timonin, YES and oatmeal). P. roqueforti produced citrinin only in Timonin broth while the other lineages did not produce this mycotoxin in any of the media used. Only P. citrinum was able to produce citrinin when cultivated both with (150 rpm) and without agitation for long periods (40 days). The fungus P. expansum GF only produced citrinin under static growth conditions. The other fungi evaluated ( P. expansum VIC, and P. roqueforti ) were also cultivated with and without agitation but did not produce citrinin under either growth condition. It can therefore be concluded that P. expansum VIC and P. griseoroseum represent no threat to the food industry in terms of citrinin production since these fungi are unable to produce this mycotoxin under the conditions used to produce the enzymes of interest polygalacturonase and xylanase.

Submitted by Rafael Dias do Espírito Santo null (rafael.lqof@gmail.com) on 2017-05-09T16:49:03Z No. of bitstreams: 1 Tese - Rafael Dias do Espírito Santo.pdf: 5290008 bytes, checksum: d5945a04420d68f212920428f82770e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-10T18:27:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santo_rde_dr_bauru.pdf: 5290008 bytes, checksum: d5945a04420d68f212920428f82770e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-10T18:27:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santo_rde_dr_bauru.pdf: 5290008 bytes, checksum: d5945a04420d68f212920428f82770e4 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Leishmanioses são doenças causadas por protozoários parasitas, causadas por mais de 20 espécies do gênero Leishmania, sendo estimados 1,3 milhões de novos casos anualmente, que resultam em 20 – 30 mil mortes. Os fármacos usados para o tratamento de leishmanioses são antigos, estão relacionados a graves efeitos tóxicos, e o aparecimento de cepas de parasitas resistentes a esses fármacos tem tornado urgente a necessidade de se encontrar medicamentos novos, seguros e eficazes contra leishmanioses. Compostos do tipo guanidinas são estudados para o tratamento de doenças tropicais negligenciadas, sendo que alguns estudos testaram a efetividade de compostos guanidínicos contra leishmaniose. O principal objetivo do presente trabalho foi sintetizar, caracterizar e avaliar a atividade leishmanicidade de compostos que possuem o núcleo guanidínico. A síntese dos compostos derivados guanidínicos foi descrito e os compostos foram caracterizados por Espectrometria de Massas usando Ionização por Eletrospray e por Espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear de 1H e de 13C. Quatorze compostos foram avaliados quanto à atividade leishmanicida frente às cepas promastigotas de L. amazonensis e também frente a macrófagos peritoneais de camundongo infestados com leishmania amastigotas. Os valores de IS de duas moléculas contra as formas amastigotas (SI=130,25 para o composto LQOF-G7 e 36,37 para o composto LQOF-G1), sugeriram que estes podem ser candidatos promissores para estudos in vivo. As análises preliminares dos resultados de avaliação biológica mostraram que os compostos que possuem grupos eletroretiradores ligados ao átomo C4 do anel da porção anilina, foram mais ativos e seletivos contra leishmania promastigota. O teste do micronúcleo para a mutagenicidade foi realizado para cinco compostos, incluindo três dos mais ativos contra Leishmania (LQOF-G1, LQOF-G2 e LQOF-G7). Para todos os compostos avaliados não foram observados diferenças significativas entre a frequência de células micronucleadas quando comparados com o controle negativo, sugerindo que os compostos não são mutagênicos quando avaliados pelo teste de micronúcleo, mesmo nas concentrações mais altas. / Leishmaniases are diseases caused by protozoan parasites from >20 Leishmania species, being estimated 1.3 million new cases annually, which result in 20,000–30,000 deaths. The drugs used for the treatment of leishmaniases are old and have serious toxic effects. In addition, the emergence of drug-resistant parasite strains has caused an urgent requirement for novel, safe, and efficacious drugs against leishmaniasis. Several guanidine derivatives have been studied in the treatment of neglected diseases and some of these studies tested the effectiveness of guanidine compounds against leishmaniasis. The main objective of the present work was the synthesis, characterization and evaluation of leishmanicide activity of compounds having guanidine nuclei. Synthesis of the guanidine derivatives was described and the compounds were characterized by Mass Spectrometry with Eletrospray Ionization and Nuclear Magnetic Ressonance for 1H and 13C. Fourteen compounds were evaluated for their leishmanicidal activity against L. amazonensis promastigotes and mouse peritoneal macrophages infested with leishmania amastigotes. The IS values, of two molecules, against the amastigote forms (SI = 130.25 for compound LQOF-G7 and 36.37 for compound LQOF-G1), suggested that they may be promising candidates for in vivo studies. The preliminary analysis of the results of biological evaluation showed that compounds, which contain electro-withdrawing groups bound to atom C4 of aniline ring, were more active and selectives against Leishmania promastigotes. The micronucleus test for mutagenicity was performed for five compounds, including three of the most active against Leishmania (LQOF-G1, LQOF-G2 and LQOF-G7). For all compounds evaluated, no significant differences were observed between the frequencies of micronucleated cells when compared to the negative control, suggesting that the compounds are not mutagenic when evaluated by the micronucleus test, even at the highest concentrations.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2015. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-04-10T15:27:24Z No. of bitstreams: 1 2015_LilibetePereiradeOliveira.pdf: 832740 bytes, checksum: 639bc0308fdb43f58abcbf60390b2dd4 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-04-15T14:36:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_LilibetePereiradeOliveira.pdf: 832740 bytes, checksum: 639bc0308fdb43f58abcbf60390b2dd4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T14:36:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_LilibetePereiradeOliveira.pdf: 832740 bytes, checksum: 639bc0308fdb43f58abcbf60390b2dd4 (MD5) / Em diversas regiões brasileiras os acidentes provocados por arraias dulcícolas são temidos por serem causa comum de necrose tissular e infecções bacterianas secundárias, que frequentemente implicam em incapacidade física temporária ou permanente. Estudos anteriores relatam a presença de atividades tóxicas, dentre as quais cardiotoxicidade, hiperalgesia, necrosante e edematogênica. Entretanto componentes envolvidos na citotoxicidade permaneciam sem caracterização. Identificação destes componentes é útil para a busca de tratamentos mais eficazes para este tipo de acidente. O presente trabalho objetivou identificar e caracterizar componentes citotóxicos do extrato do epitélio glandular que reveste o ferrão da arraia Potamotrygon falkneri. Os resultados obtidos evidenciam que o extrato obtido de um ferrão desta arraia possui aproximadamente 86 μg de protéinas, e seu perfil cromatográfico revelou 6 regiões com massa molecular variando de 14,4 a 97 kDa quando analisadas em SDS-PAGE. O extrato bruto do ferrão apresentou atividade hemolítica, fosfolipásica e citotóxica. 34 μg/mL do extrato bruto induziu 59 % de hemólise e a atividade fosfolipásica na presença de cálcio foi de 28.276 U/mg de proteína, enquanto na ausência de cálcio foi de 22.680 U/mg. O ensaio de citotoxicidade do extrato bruto foi realizado pelo método exclusão de azul de trypan na linhagem H9 em 6, 12 e 24 horas, resultando positivo no tempo de 24 horas. O extrato bruto e as regiões cromatográficas foram submetidas ao ensaio citotóxico e hemolítico, do qual uma fração apresentou índice citotóxico (região 1) e outra região apresentou hemolítico de 26% (região 5). O ensaio de citotoxicidade da região 5 também revelou citotoxicidade, além da capacidade hemolítica. A fração hemolítica e citotóxica foi purificada e submetida a espectrometria de massa, revelando três componentes com massas de 11.330,146 Da, 13.577,574 Da e 16.808,068 Da. Por fim, realizou-se o teste de hemólise indireta de fosfolipase A2 nesta fração, resultando em uma atividade de 103, 33 U/mg de fração. O presente trabalho, portanto, evidencia a presença de enzima fosfolipase A2, com atividade citotóxica em hemácias e células H9, no extrato da peçonha de P. falkneri e na fração estudada. / In several Brazilian regions accidents caused by freshwater stingrays are feared by causing tissue necrosis and secondary bacterial infections, often promoting temporary or permanent disability. Previous studies reported toxic activities as cardiotoxicity, hyperalgesy, necrotic and edematogenic, however cytotoxic compounds remained uncharacterized. Identifying these compounds is useful for the development of more effective treatments for this type of accident, and the present work aimed to identify and characterize cytotoxic components from the extract of the glandular tissue sting sheath of the stingray Potamotrygon falkneri. The results reveal approximately 86 μg/mL of protein on this extract, and its chromatographic profile revealed 6 regions with molecular masses between 14.4 and 97 kDa when analyzed on SDS-PAGE. The sting sheath extract also revealed haemolytic, phospholipasis and cytotoxic activities. 34 μg/mL of the crude extract induced 59.57% hemolysis and the phospholipase activity was 28276 U/mg protein in the presence of calcium, and 22680 U/mg in the absence of calcium. Cytotoxicity assay of the crude extracts was performed by blue trypan exclusion upon H9 lineage at 6, 12 and 24 hours, and with positive results in 24 hours. The crude extract and chromatographic fractions were subjected to hemolytic and cytotoxic assays, with one fraction revealing cytotoxic activity (region 1) and another with 26% hemolytic index (region 5). Region 5 also revealed citotoxicity, in addition to its haemolytic action. The cytotoxic and haemolytic fraction were purified and analyzed by mass spectrometry, revealing three compounds with masses of 11330.146Da, 13.577.574 Da and 16,808,068 Da. Further, a indirect hemolysis phospholipase A2 test was performed, resulting on 103.33 U/mg fraction activity. The present work reveals the presence of a phospholipase A2 enzyme, toxic for erythrocytes and H9 cells, on the extract of P. falkneri and the studied fraction.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:49:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O polissacarídeo levana foi utilizado como revestimento de partículas de magnetita, as quais foram obtidas pelo método de co-precipitação de uma solução contendo íons de Fe(II) e Fe(III) em meio aquoso alcalino. As partículas de levana-magnetita foram caracterizadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV), magnetometria, difração de Raios-X (DRX) e espectroscopia na região do infravermelho (IV). As partículas de magnetita, não-revestidas e revestidas, foram ambas heterogêneas na forma sendo as partículas revestidas de tamanhos maiores. As partículas revestidas exibiram uma magnetização dez vezes menor comparada àquelas não-revestidas provavelmente devido à camada de revestimento. O difratograma de raios X mostrou que a magnetita é a fase dominante nas partículas revestidas e a espectroscopia no infravermelho mostrou bandas de absorção características do polissacarídeo levana e da magnetita presentes nas partículas com revestimento (O H, C O C, e Fe O). As partículas de levana-magnetita foram ativadas com periodato de sódio e utilizadas como matriz para imobilização da enzima proteolítica tripsina. A quantidade de proteína imobilizada foi de 79,66 % e sua atividade específica variou com a quantidade de enzima imobilizada. A tripsina imobilizada foi reutilizada dez vezes seguidas e apresentou uma atividade específica média igual a 17,41 ± 0,53 mU/mg correspondendo a 84,43 ± 5,42 % da atividade específica inicial. Após estocagem por 30 dias a 4 °C e 25 °C, a tripsina imobilizada mostrou uma perda de 40,69 % e 41,47 % da atividade inicial, respectivamente. Em relação ao tempo de prateleira, uma perda de 70,56 % da atividade inicial foi observada depois de estocada por 21 dias e reutilizada cinco vezes durante este período. Ela mostrou significantemente uma maior estabilidade em condições de aumento da temperatura (40°C e 50°C) quando comparada à enzima solúvel. A faixa de pH para atividade ótima da tripsina imobilizada foi de 8,5 9,0 e para tripsina solúvel foi de 8,0 9,0. A tripsina imobilizada apresentou um Km aparente (0,257 ± 0,04 mM) aproximadamente 2 vezes menor que aquele encontrado para a enzima solúvel (0,528 ± 0,26 mM). As partículas de magnetita revestidas mostraram boa capacidade para serem usadas como matriz para imobilização de enzimas, em especial sua capacidade para retenção de proteína, reuso e estabilidade térmica

Made available in DSpace on 2018-08-02T00:16:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7219_Texto completo.pdf: 1300539 bytes, checksum: 8d1ee1eca002ffd92f17fabc466872c9 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / Theobroma cacao L. (MALVACEAE) AO DÉFICE HÍDRICO Assim como em várias regiões do Brasil, o norte do estado do Espírito Santo, pólo produtor de cacau, apresenta intensos períodos de estiagem que provocam queda na produção agrícola. É anseio de qualquer agricultor o desenvolvimento de tecnologias de qualidade a baixo custo que permitam aumentar a produção agrícola, e é nesse contexto que surge a adubação com silício (Si), uma tecnologia pouco explorada no Brasil e que já se mostra promissora na manutenção ou aumento da produtividade em situações de estresse hídrico. Sendo assim, objetivou-se com este trabalho verificar as respostas fisiológicas e anatômicas de um clone de cacau (PH 16) submetido a um ciclo de défice hídrico após pulverização foliar com Si, visando a determinar se o Si confere tolerância à seca. O experimento foi instalado em casa de vegetação, no delineamento de blocos casualizados, com quatro repetições, em arranjo fatorial 2 x 3, constituído de dois regimes hídricos, irrigado ou não irrigado, e três doses de Si, 0,0, 1,5 e 3,0 mg/mL, com pó molhável de SiO2. Após vinte dias de suspensão da irrigação, avaliações foram realizadas na 2ª ou 3ª folha completamente expandida a partir do ápice do eixo ortotrópico. Os resultados mostraram que o teor de fenóis foi elevado com a aplicação de SiO2 independente da dose. O uso do SiO2 melhorou a estabilidade das membranas celulares das plantas sob défice hídrico, e a atividade de algumas enzimas antioxidantes: catalase (CAT), peroxidase do ascorbato (APX), peroxidase do guaiacol (POD) e polifenoloxidase (PPO), sendo a dose de 1,5 mg/mL a melhor. A aplicação dessa dose favoreceu as reações fotoquímicas, a taxa fotossintética, a eficiência do uso da água e a taxa de carboxilação das plantas de cacau sob défice. A densidade estomática foi reduzida nas plantas não irrigadas sob maior dose de Si. Contudo, a aplicação de Si não interferiu no conteúdo de água das folhas sob défice, apesar de reduzir o potencial hídrico foliar. Presume-se que a mucilagem tenha um papel importante na manutenção do conteúdo hídrico das folhas de T. cacao. As espessuras dos tecidos foliares (epiderme, parênquima paliçádico e esponjoso), bem como o teor de pigmentos fotossintetizantes e o conteúdo de Si nas folhas, não sofreram influência das doses de Si. Desse modo, sugere-se que o acúmulo de Si sobre as folhas foi benéfica, sendo a dose de 1,5 mg/mL, a mais eficiente para a tolerância das plantas de cacau ao défice hídrico. Palavras-chave: Anatomia, cacau, défice hídrico, enzimas antioxidantes, fotossíntese, silício.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-09-27T18:39:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Diego Rayan T. Sousa.pdf: 2251149 bytes, checksum: 0676c4939462fb50c6f72152c72fc4c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-09-27T18:42:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Diego Rayan T. Sousa.pdf: 2251149 bytes, checksum: 0676c4939462fb50c6f72152c72fc4c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-27T18:42:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Diego Rayan T. Sousa.pdf: 2251149 bytes, checksum: 0676c4939462fb50c6f72152c72fc4c7 (MD5) Previous issue date: 2017-07-05 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Glucose oxidase (Gox) has several industrial applications. It is believed that there are diversified fungal species that have the production capacity of this enzyme and most are unexplored. The objective of this work was to investigate a production of Glucose Oxidase (EC 1.1.3.4) by fungi isolated from soil samples from the Amazon Forest. Soil fungi were isolated from the Adolpho Ducke Forest Reserve, located in the city of Manaus-Amazonas. To select good GOx producers, such as submitted in submerged bioprocess. The isolates highlighted in the production of the enzyme were submitted to kinetic tests where the enzyme production, biomass and substrate consumption by isolates were evaluated. Univariate and multivariate assays performed to optimize the production process. An enzymatic production for the semi-continuous process. The crude enzyme was purified by precipitation processes, dialysis ion exchange chromatography. The potential of this enzyme in the elaboration of a Glucose quantification kit through calibration curves, the regression coefficient, was investigated as biochemical characteristics and GOx (optimum temperature, optimum pH, stability and ionic effect in the enzymatic activity. However, only seven were identified as potential producers of this enzyme, being five of the genus Aspergillus and two of the genus Penicillium, with values ranging from 14.93 U/mL – 35.54 U/mL. Kinetics showed that the Aspergillus LMM01 isolate was the best producer of the enzyme, and this was used isolated in the subsequent experiments. Experiments with variants demonstrated with the greatest effect on the production of GOx were PH and agitation. A result for GOx (7.74 U/mL) was obtained, for 7 days, use the semi-continuous. After purification process, an activity and the enzyme improved 938%, a temperature of 40 ° C and pH 6.0 were the optimum for a catalytic action of the enzyme and stability presented as its main industrial needs. Fe+++, Pb++, Ag+, Hg++ and Cu++ ions showed significant inhibition of GOx activity. In the present study, a Pearson correlation of the developed Kit and the commercial Kit was strong positive, with value of r = 0.9978. The results are compatible with a literature where the genera Aspergillus and Penicillium stand out as the main industrial producers of GOx. / A glicose oxidase (GOx) possui diversas aplicações industriais. Acredita-se que existem diversificadas espécies fúngicas que possuem capacidade de produzir essa enzima e a maior parte encontra-se inexplorada. Este trabalho teve como finalidade investigar a produção de Glicose Oxidase (EC 1.1.3.4) por fungos isolados de amostras de solo da Floresta Amazônica. Foram isolados fungos filamentosos de amostras de solo da Reserva Florestal Adolpho Ducke, localizada na cidade de Manaus-Amazonas. Para selecionar bons produtores de GOx, esses foram submetidos em cultivo submerso. Os isolados destacados na produção da enzima foram submetidos a ensaios de cinética onde foi avaliada a produção da mesma, biomassa e o consumo do substrato pelos isolados. Ensaios univariados e multivariados foram realizados para otimizar o processo de produção. Uma produção enzimática foi realizada utilizando processo semi-contínuo. A enzima bruta foi purificada pelos processos de precipitação, diálise cromatografia de troca iônica. Foram investigadas as características bioquímicas da GOx (melhor temperatura, melhor pH, estabilidade e o efeito de íons na atividade enzimática). Analisou-se o potencial desta enzima na elaboração de um Kit de quantificação de Glicose através de curvas de calibração, o coeficiente de regressão e coeficiente de correlação. Quanto aos resultados obtidos, foi detectada a produção de GOx em todas as cepas analisadas, entretanto, apenas sete se destacaram como potenciais produtores desta enzima, sendo cinco do gênero Aspergillus e dois do gênero Penicillium, com valores que variaram de 14,93 U/mL – 35,54 U/mL. A cinética demonstrou que o isolado Aspergillus LMM01 foi o melhor produtor da enzima, sendo portanto este isolado, utilizado nos experimentos posteriores. Experiências multivariadas demonstraram que os parâmetros com maior efeito na produção de GOx foram o pH e a agitação. Obteve-se um resultado estável para GOx (7,74 U/mL), durante 7 dias, utilizando o processo semi-contínuo. Após o processo de purificação, a atividade da enzima melhorou 938%, a temperatura de 40° C e o pH 6,0 foram os melhores para a ação catalítica da enzima e a estabilidade apresentou-se adequada as suas principais necessidades industriais. Os íons Fe+++, Pb++, Ag+, Hg++ e Cu++ exibiram inibição significante na atividade de GOx. No presente estudo, a correlação de Pearson do Kit desenvolvido e o Kit comercial foi forte positiva, com valor de r = 0,9978. Os resultados foram compatíveis com a literatura, onde destacam-se os gêneros Aspergillus e Penicillium como os principais produtores industrias de GOx.