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Études des relations entre leshmanioses et cancers : Leishmania infantum : recherche de sanctuaires de persistance et criblage in vitro de nouvelles molécules actives / Study of the relationship between leishmaniasis and cancers : Leishmania infantum : research sanctuary of persistence and screening in vitro of new actives molecules

Schwing-Chaïb, Aurélie 14 December 2018 (has links)
Les leishmanioses sont des maladies causées par une vingtaine d’espèces de protozoaires flagellés appartenant au genre Leishmania. Elles sont responsables d’une inflammation chronique tous comme les atteintes cancéreuses. Nous avons réalisé une revue de la littérature qui a permis de mettre en évidence les relations existantes entre les cancers et les leishmanioses. Nous avons mis en évidence les similarités cliniques de ces deux pathologies pouvant provoquer des erreurs de diagnostic fatales. Nous avons également recensé de nombreux cas de co-localisation des deux pathologies. Enfin, l’ensemble de cette étude soulève le potentiel lien de causalité des leishmanioses dans l’apparition de certains cancers. De plus, les traitements actuels contre les leishmanioses viscérales sont toxiques, présentent une efficacité limitée et un coût trop élevé. Il est donc nécessaire d’évaluer l’activité anti-Leishmania de nouveaux traitements. Dans ce but, un protocole de criblage in vitro de nouvelles molécules d’origine naturelle, actives contre Leishmania infantum, a été mis en place, utilisant des leishmanies bioluminescentes. Ce protocole a permis la sélection des extraits d’intérêts.Le second travail original a porté sur le phénomène de rechute après traitement souvent observé chez les patients. L’existence d’un ou plusieurs sanctuaires de persistance du parasite, pourrait être responsable de ces rechutes. En nous plaçant, dans le modèle murin, nous avons observé la présence de parasites au sein des tissus adipeux. Ainsi, le tissu adipeux semble pouvoir constituer un des sanctuaires potentiels de persistance des leishmanies. / Leishmaniases are chronic diseases caused by twenty species of flagellated protozoa of the genus Leishmania. Leishmaniases are responsible of a chronic inflammation as well as malignant diseases. Today, the relationship between chronic inflammation and cancers is well documented but the link between leishmaniases and cancers is under-explored. A literature review highlighted different links between leishmaniasis and malignant diseases. First, we shown the importance of differential diagnosis between these pathologies that can be clinically close . Then, we gathered clinical cases where leishmaniases and malignant diseases were present. Finally, this study raises the concern of the involvement of leishmaniasis in cancers development. In this thesis, two original works were performed simultaneously. Current treatments of visceral leishmaniasis are toxic, with limited efficacy and are too expensive. To date, no human vaccine exists. Therefore, it is necessary to develop new treatments against Leishmania. For this purpose, we performed an in vitro screening of new natural active molecule against Leishmania infantum, using bioluminescent Leishmania. This screening allowed us to rule out toxic natural extracts, and to select interesting extracts that were tested in vitro and in vivo studies.The second original work focused on relapse after treatment often observed in patients. Existence of sanctuaries site of leishmania parasite could be responsible for these relapses. In mouse model, we highlighted the presence of Leishmania in adipose tissue. We hypothesized that this tissue can be a sanctuary site for the parasite to persist.
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AVALIAÇÃO do Potencial Leishmanicida de Bacteriocinas

BARCELOS, D. H. F. 21 March 2018 (has links)
Made available in DSpace on 2018-08-23T21:50:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_12424_Dissertação_Divan Henrique Barcelos.pdf: 1490408 bytes, checksum: bfc34fc78982de3e46382c567f84009d (MD5) Previous issue date: 2018-03-21 / As leishmanioses são um grave problema de saúde pública no Brasil e no mundo, com 12 milhões de pessoas infectadas. Os tratamentos disponíveis embora eficientes, apresentam problemas como toxicidade, alto custo ou resistência pelo parasito. As bacteriocinas são peptídeos antimicrobianos produzidos no ribossomo por diversas bactérias. Sua ação de inibição in vitro já foi testada contra fungos, bactérias e protozoários, sendo por isso consideradas como uma substância de grande potencial biotecnológico. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a capacidade anti-leishmania das bacteriocinas A53; C55 e Nisina e da (substância inibitória do tipo bacteriocina) BLIS P16, contra as espécies de Leishmania infantum e Leishmania amazonensis. Os resultados de IC50 para L. amazonensis foram de: A53-24,78 μg/mL; C55-75,49 μg/mL e Nisina-3191 μg/mL. Já para o tratamento contra promastigotas de L. infantum foi observado IC50 de: A53-12,57 μg/mL; C55-44,31 μg/mL. Nisina-317,2 μg/mL e P16- 2,9 μg/mL. O tratamento contra amastigotas de L. infantum se mostrou mais eficiente que contra as formas promastigotas, apresentando um IC50 de 2,17 μg/mL para A53 e de 1,76 μg/mL para P16. Também foi avaliado a ação citotóxica de A53 e P16 sobre macrófagos da linhagem J774A.1, apresentando respectivamente IC50 de 9,75 μg/mL e de 6,6 μg/mL. Para se avaliar a interação entre a A53 e a P16 com a membrana externa de promastigotas de L. infantum foi realizada microscopia eletrônica de varredura, a qual demostrou que as substâncias testadas possuem a capacidade de alterar a morfologia externa do parasita. Foram realizados experimentos para se avaliar a capacidade do tratamento com P16 sobe a indução do estresse oxidativo em promastigotas de L. infantum. Foi verificado a capacidade de estimular apoptose nas formas promastigotas, bem como um estimulo a superprodução de espécies reativas de oxigênio (ROS) e uma interferência na progressão do ciclo celular. Os dados do presente trabalho demonstram que as bacteriocinas são promissoras para testes que visem o desenvolvimento de novas drogas contra as leishamanioses.
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Síntese e caracterização de compostos guanidínicos e estudo da atividade leishmanicida / Synthesis and characterization of guanidine compounds and study of the leishmanicidal activity

Santo, Rafael Dias do Espírito [UNESP] 23 February 2017 (has links)
Submitted by Rafael Dias do Espírito Santo null (rafael.lqof@gmail.com) on 2017-05-09T16:49:03Z No. of bitstreams: 1 Tese - Rafael Dias do Espírito Santo.pdf: 5290008 bytes, checksum: d5945a04420d68f212920428f82770e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-10T18:27:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santo_rde_dr_bauru.pdf: 5290008 bytes, checksum: d5945a04420d68f212920428f82770e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-10T18:27:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santo_rde_dr_bauru.pdf: 5290008 bytes, checksum: d5945a04420d68f212920428f82770e4 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Leishmanioses são doenças causadas por protozoários parasitas, causadas por mais de 20 espécies do gênero Leishmania, sendo estimados 1,3 milhões de novos casos anualmente, que resultam em 20 – 30 mil mortes. Os fármacos usados para o tratamento de leishmanioses são antigos, estão relacionados a graves efeitos tóxicos, e o aparecimento de cepas de parasitas resistentes a esses fármacos tem tornado urgente a necessidade de se encontrar medicamentos novos, seguros e eficazes contra leishmanioses. Compostos do tipo guanidinas são estudados para o tratamento de doenças tropicais negligenciadas, sendo que alguns estudos testaram a efetividade de compostos guanidínicos contra leishmaniose. O principal objetivo do presente trabalho foi sintetizar, caracterizar e avaliar a atividade leishmanicidade de compostos que possuem o núcleo guanidínico. A síntese dos compostos derivados guanidínicos foi descrito e os compostos foram caracterizados por Espectrometria de Massas usando Ionização por Eletrospray e por Espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear de 1H e de 13C. Quatorze compostos foram avaliados quanto à atividade leishmanicida frente às cepas promastigotas de L. amazonensis e também frente a macrófagos peritoneais de camundongo infestados com leishmania amastigotas. Os valores de IS de duas moléculas contra as formas amastigotas (SI=130,25 para o composto LQOF-G7 e 36,37 para o composto LQOF-G1), sugeriram que estes podem ser candidatos promissores para estudos in vivo. As análises preliminares dos resultados de avaliação biológica mostraram que os compostos que possuem grupos eletroretiradores ligados ao átomo C4 do anel da porção anilina, foram mais ativos e seletivos contra leishmania promastigota. O teste do micronúcleo para a mutagenicidade foi realizado para cinco compostos, incluindo três dos mais ativos contra Leishmania (LQOF-G1, LQOF-G2 e LQOF-G7). Para todos os compostos avaliados não foram observados diferenças significativas entre a frequência de células micronucleadas quando comparados com o controle negativo, sugerindo que os compostos não são mutagênicos quando avaliados pelo teste de micronúcleo, mesmo nas concentrações mais altas. / Leishmaniases are diseases caused by protozoan parasites from >20 Leishmania species, being estimated 1.3 million new cases annually, which result in 20,000–30,000 deaths. The drugs used for the treatment of leishmaniases are old and have serious toxic effects. In addition, the emergence of drug-resistant parasite strains has caused an urgent requirement for novel, safe, and efficacious drugs against leishmaniasis. Several guanidine derivatives have been studied in the treatment of neglected diseases and some of these studies tested the effectiveness of guanidine compounds against leishmaniasis. The main objective of the present work was the synthesis, characterization and evaluation of leishmanicide activity of compounds having guanidine nuclei. Synthesis of the guanidine derivatives was described and the compounds were characterized by Mass Spectrometry with Eletrospray Ionization and Nuclear Magnetic Ressonance for 1H and 13C. Fourteen compounds were evaluated for their leishmanicidal activity against L. amazonensis promastigotes and mouse peritoneal macrophages infested with leishmania amastigotes. The IS values, of two molecules, against the amastigote forms (SI = 130.25 for compound LQOF-G7 and 36.37 for compound LQOF-G1), suggested that they may be promising candidates for in vivo studies. The preliminary analysis of the results of biological evaluation showed that compounds, which contain electro-withdrawing groups bound to atom C4 of aniline ring, were more active and selectives against Leishmania promastigotes. The micronucleus test for mutagenicity was performed for five compounds, including three of the most active against Leishmania (LQOF-G1, LQOF-G2 and LQOF-G7). For all compounds evaluated, no significant differences were observed between the frequencies of micronucleated cells when compared to the negative control, suggesting that the compounds are not mutagenic when evaluated by the micronucleus test, even at the highest concentrations.
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Avaliação dos monócitos de pacientes com Leishmaniose Tegumentar Americana antes e após o tratamento / Evaluation of monocytes from patients with tegumentary leishmaniasis before and after treatment

Veras, Poliana Ribeiro Valadares 02 July 2015 (has links)
Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-01T11:58:23Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Poliana Ribeiro Valadares Veras - 2015.pdf: 4546054 bytes, checksum: d4bed497af887b82ba08b0d21d58ed42 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-01T11:58:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Poliana Ribeiro Valadares Veras - 2015.pdf: 4546054 bytes, checksum: d4bed497af887b82ba08b0d21d58ed42 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-01T11:58:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Poliana Ribeiro Valadares Veras - 2015.pdf: 4546054 bytes, checksum: d4bed497af887b82ba08b0d21d58ed42 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-07-02 / American tegumentary leishmaniasis (ATL) is an infectious parasitic disease caused by Leishmania protozoa. The disease presents as cutaneous leishmaniasis (CL) and mucosal leishmaniasis (ML). The mechanisms of the immunopathogenesis and infection control are not yet fully understood, and monocytes can be involved in these mechanisms. The monocytes are divided into three subsets (CD14hiCD16-, classical monocytes; CD14hiCD16+, the intermediates; and CD14loCD16+ non- classical) and are the major cell producing cytokines in peripheral blood.The objective of this study was to assess possible alterations in the percentages of monocytes subsets; and in the tumor necrosis factor (TNF) and interleukin 10 (IL -10) production in whole blood cultures from patients with CL and ML, before and after treatment. Peripheral blood from patients (n = 54; 31 CL and ML 23) and controls (n = 54) was used to identify monocytes by flow cytometry and for whole blood cultures. The blood was incubated in the absence (medium) or presence of toll-like receptor agonists (Pam3Cys and LPS for TLR2 and TLR4, respectively) or L. (V.) braziliensisantigens (AG) to assess TNF and IL-10. Cytokines were quantified by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).The results showed an increase in the percentage of CD16+ monocytes, especially CD14loCD16+monocyte subset in CL patients, but not in ML, before treatment (p <0.05). After treatment, the percentages of these monocytes in CL patients back to similar levels of those from healthy individuals. In patients with ML, there was also a reduction in the percentages of CD16+ monocytes after treatment. The production of TNF and IL-10 was not significantly altered in whole blood cultures from patients, compared with those from healthy controls. Among the stimuli used, only the AG did not induce significant amounts of IL-10 in whole blood cultures from patients. After treatment, TNF concentrations decreased in CL whole blood cultures, except when the stimulus was Pam3Cys (TLR2), which induced an increase in TNF levels (p <0.05). In ML whole blood cultures no significant differences were detected between the concentrations of TNF and IL-10 produced before and after treatment.The IL-10 concentrations were not significantly altered after treatment of CL patients. The data indicate that percentages of CD16+ monocytes are increased in CL. Also, they suggest that monocytes from patients with CL or ML show a decreased capacity to produce IL-10 in response to AG, what can hamper the control of the inflammatory response. The data also suggest that the ability of monocytes to be activatedthrough TLR2 can be suppressed in CL what isrecovered after treatment. An analysis of TLR2 and TLR4 in monocytes from patients with ATL can improve the knowledge about cytokine induction in these cells. / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença infecto-parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania. Esta doença apresenta-se como leishmaniose cutânea (LC) e leishmaniose mucosa (LM). Os mecanismos da imunopatogenia e do controle da infecção ainda não estão completamente esclarecidos, sendo que os monócitos podem participar destes mecanismos. Os monócitos são subdivididos em três populações (CD14hiCD16-, os clássicos; CD14hiCD16+, os intermediários; e CD14loCD16+, os não clássicos) e são as principais células produtoras de citocinas no sangue periférico. O objetivo deste estudo foi avaliar se existem alterações nas proporções das três subpopulações dos monócitos e das citocinas fator de necrose tumoral (TNF) e interleucina 10 (IL-10), em pacientes com LC ou LM, antes e após o tratamento. Sangue periférico de pacientes (n = 54; 31 LC e 23 LM) e controles (n = 54) foi utilizado para identificar os monócitos por citometria de fluxo e para hemoculturas. As hemoculturas foram incubadas na ausência (Meio) ou presença de agonistas (LPS, Pam3Cys) de receptores similares a toll dos tipos dois e quatro (TLR2 e TLR4) ou de antígenos (AG) de L. (Viannia) braziliensis, para avaliar a produção de TNF e IL-10. As citocinas foram quantificadas por ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados mostraram um aumento da porcentagem dos monócitos CD16+, especialmente da subpopulação CD14loCD16+, em pacientes com LC, mas não com LM, antes do tratamento (p < 0,05). Após o tratamento, as porcentagens destes monócitos, em pacientes com LC, retornaram para níveis similares àqueles de indivíduos sadios. Em pacientes com LM, também ocorreu uma redução das porcentagens dos monócitos CD16+ após o tratamento. A produção de TNF e a de IL-10 não estavam significantemente alteradas nas hemoculturas de pacientes, quando comparadas com as de controles sadios. Entre os estímulos usados, somente o AG não induziu quantidades significantes de IL-10 nas hemoculturas dos pacientes. Após o tratamento, as concentrações de TNF diminuíram nas hemoculturas de pacientes com LC, exceto quando o estímulo foi Pam3Cys (TLR2), o qual induziu aumento na produção de TNF (p < 0,05). Em hemoculturas de pacientes com LM não foram detectadas diferenças significantes entre as concentrações de TNF e IL-10 produzidas antes e após o tratamento. As concentrações de IL-10 também não foram significantemente alteradas após o tratamento dos pacientes com LC. Os dados indicam que as porcentagens de monócitos CD16+ estão aumentadas na LC. Ainda, sugerem que monócitos de pacientes com LC ou LM apresentam uma diminuída capacidade de produção de IL-10 em resposta ao AG, o que pode dificultar o controle da resposta inflamatória. Os dados também sugerem que a capacidade de resposta dos monócitos via TLR2 pode estar suprimida na LC, sendo elevada após o tratamento. Uma análise de TLR2 e TLR4 em monócitos de pacientes com LTA pode auxiliar a entender melhor a indução de citocinas nestas células.
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FAUNA FLEBOTOMÍNEA DE FRAGMENTOS DE MATA E PERIDOMICÍLIOS NA ÁREA URBANA DE NOVA ANDRADINA-MS E INFECÇÃO NATURAL POR Leishmania / FAULTY FLEBOTOMÍNEA OF WEED FRAGMENTS AND PERIDOMICÍLIOS IN THE URBAN AREA OF NEW ANDRADINA-MS AND NATURAL INFECTION BY Leishmania

Leite, Jhoy Alves 13 March 2015 (has links)
Submitted by Cibele Nogueira (cibelenogueira@ufgd.edu.br) on 2017-01-26T13:59:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) JHOYLEITE.pdf: 1672229 bytes, checksum: a842a3c0cc7cf9a97045d5acc3717c43 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-26T13:59:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) JHOYLEITE.pdf: 1672229 bytes, checksum: a842a3c0cc7cf9a97045d5acc3717c43 (MD5) Previous issue date: 2015-03-13 / The sand flies are widely distributed throughout the world. This insect group is of great interest in public health because their females are involved in the transmission of Leishmania, agents of cutaneous and visceral leishmaniasis. Forest fragments favor the maintenance of the life cycle of both, vector and agent, in nature. In Nova Andradina municipality, Mato Grosso do Sul state, Brazil, some cases of cutaneous leishmaniasis (CL) have been notified. So the goal of this study was to identify the sand fly fauna and investigate the presence of species naturally infected by Leishmania of urban forest fragments and peridomiciles close to them in Nova Andradina. The insects were captured from November 2013 to January 2015, using CDC light traps distributed in three urban forest fragments. Parasitological examination was performed to investigate flagellates in sand fly guts and Polymerase Chain Reaction - Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) for identification of Leishmania spp. A total of 302 sand flies were captured (101 males and 201 females) of six genus and 11 species: Brumptomyia brumpti, Evandromyia cortelezzii, Evandromyia lenti, Evandromyia teratodes, Evandromyia termitophila, Nyssomyia neivai, Psathyromyia aragaoi, Psathyromyia bigeniculata, Psathyromyia campograndensis, Pintomyia christenseni and Sciopemyia sordellii. Only Ny. neivai is recognized as vector of cutaneous leishmanaisis agents in Southeast and South Brazilian regions, Paraguay and Argentina. Thus it may be linked to cases in Nova Andradina-MS. Br. brumpti was the most abundant and present in peridomiciles along with Ev. lenti, Ev. termitophila, Ny. neivai and Pi. christenseni. Although specimens were collected in nearly every month, their highest frequencies occurred during rainy periods, mainly for Br. brumpti, Sc. sordellii, Pi. christenseni and Ev. lenti. Of the 106 females dissected and placed in 55 pools, the presence Leishmania (Leishmania) amazonensis DNA was detected by PCR-RFLP in three species: Ev. lenti, Ev. teratodes and Sc. sordellii, as well as of Leishmania spp. in two females of Pi. christenseni and one of Sc. sordellii, resulting in a minimum infection rate of 5.66% for each taxon of Leishmania. / Os flebotomíneos, com ampla distribuição mundial, constituem um grupo de insetos de grande importância na saúde pública, cujas fêmeas estão envolvidas na transmissão de Leishmania, agentes das leishmanioses tegumentar e visceral. Esses insetos são encontrados com frequência em fragmentos de matas, onde habitats naturais favorecem a manutenção do ciclo de vida desses vetores na natureza. No município de Nova Andradina, Estado de Mato Grosso do Sul, Brasil tem sido notificados vários casos de leishmaniose tegumentar. O objetivo deste estudo foi conhecer a fauna flebotomínea de fragmentos de mata e peridomicílios em área urbana e investigar a presença de espécies infectadas naturalmente por Leishmania. Os insetos foram coletados de novembro de 2013 a janeiro de 2015; utilizando-se armadilhas luminosas, tipo CDC distribuídas em três fragmentos de matas e peridomicílios adjacentes a estes, em área urbana de Nova Andradina. Foi realizado exame parasitológico para pesquisa de flagelados e análise molecular para identificação da espécie de Leishmania. Foram coletados 302 espécimes de flebotomíneos; 101 machos e 201 fêmeas. A fauna flebotomínea constituiu-se de seis gêneros e 11 espécies: Brumptomyia brumpti, Evandromyia cortelezzii, Evandromyia lenti, Evandromyia teratodes, Evandromyia termitophila, Nyssomyia neivai, Psathyromyia aragaoi, Psathyromyia bigeniculata, Psathyromyia campograndensis, Pintomyia christenseni e Sciopemyia sordellii. Dentre as espécies assinaladas, Ny. neivai é a única com importância na transmissão de agentes da leishmaniose tegumentar no Sudeste e Sul no Brasil, Paraguai e Argentina, e pode estar associada aos casos ocorridos em Nova Andradina-MS. Br. brumpti foi a espécie mais abundante e presente nos peridomicílios juntamente com Ev. lenti, Ev. termitophila, Ny. neivai e Pi. christenseni. Os espécimes foram coletados em quase todos os meses e verificou-se o aumento na abundância de indivíduos em períodos chuvosos e maior riqueza das espécies Br. brumpti, Sc. sordellii, Pi. christenseni e Ev. lenti em períodos com alta precipitação pluviométrica. Das 106 fêmeas dissecadas e acondicionadas em 55 pools, detectou-se a presença de DNA de Leishmania (Leishmania) amazonensis pela PCR seguida da análise de polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição, em um pool de cada uma das espécies: Ev. lenti, Ev. teratodes e Sc. sordellii, assim como de DNA de Leishmania spp., em dois pools de Pi. christenseni e um de Sc. sordellii; resultando, portanto, em uma taxa de infecção mínima de 5,66% para cada uma das leishmânias.
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Análise espacial e detecção de tripanosomatídeos em animais de produção de região endêmica para leishmaniose visceral

Paixão, Mirian dos Santos. January 2017 (has links)
Orientador: Simone Baldini Lucheis / Resumo: A família Trypanosomatidae é composta por protozoários flagelados da ordem Kinetoplastidae. Os protozoários do gênero Trypanosoma, causadores das tripanossomíases e gênero Leishmania, causadores das leishmanioses, são os parasitos de maior interesse médico e veterinário As tripanossomíases são causadas por diferentes espécies, dentre elas: Trypanosoma cruzi, Trypanosoma. theileri, Trypanosoma equiperdum, Trypanosoma evansi e Trypanosoma vivax, sendo os três últimos de maior importância para os animais de produção, causando prejuízos econômicos para o setor agropecuário. Com o objetivo de avaliar a ocorrência de tripanosomatídeos no municipío de Bauru-SP, região endêmica para leishmaniose, foram avaliados 200 animais, sendo 100 bovinos (Bos taurus) e 100 equídeos (Eqqus spp.), procedentes de áreas urbanas e periurbanas do município. Para entender a distribuição de fatores de riscos na análise espacial, avaliou-se fatores epidemiológicos das leishmanioses, relacionados a seu diagnóstico nos animais de produção avaliados e também em cães e em humanos em diferentes bairros do município de Bauru, visando sua compreensão e integrá-las a estratégias de controle da doença. O diagnóstico dos animais foi baseado em técnicas parasitológicas: esfregaço sanguíneo e hemocultura; sorológicas: Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) e moleculares: Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e seqüenciamento. Não foram encontradas formas sugestivas de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor
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Utilização da PCR diagnóstica, imunohistoquímica e perfil epidemiológico de Leishmania em cães no município de Porto Nacional  - TO / Use of diagnostic PCR, immunohistochemistry and epidemiological profile of Leishmania in dogs in the municipality of Porto Nacional-Tocantins

Oliveira, Kleverson Wessel de 23 November 2017 (has links)
A Leishmaniose é uma doença parasitária que se apresenta sob várias formas clínicas, desdês a mucocutânea até a visceral que é a forma mais grave da doença. Essa, é causada por um parasita flagelado do gênero Leishmania e apresenta um ciclo de vida heteróxeno, envolvendo o repasto sanguíneo da fêmea de flebotomíneo em animais silvestres e domésticos, como os cães, bem como no homem. Até o momento, o controle da Leishmaniose Visceral (LV) está associado a eliminação de reservatório infectado (cães), porém, isso requer métodos de diagnósticos confiáveis. Nesse estudo, foi utilizado a PCR diagnóstica a partir das sequências spliced leader de RNA (mini-exon) e ensaio Imunohisquímico, utilizando leishmanias spp. marcadas com anticorpos policlonais de biópsias embebidas em parafina. Além disso, utilizamos dados epidemiológicos de Leishmaniose canina e humana do município de Porto Nacional e do Estado Tocantins. Todos os fragmentos de fígado, baço e linfonodo apresentaram amplificação para L. infantum chagasi e nenhuma para L. braziliensis e L. amazonensis. Ao comparar a IHQ em relação a PCR, mostrou-se haver fraca replicabilidade, com P-valor obtido (0,0077), portanto p<0,05, denotando não haver concordâncias entre os dois testes. Quanto aos dados epidemiológicos de Porto Nacional, eles indicaram uma queda significativa do número de cães com Leishmaniose Visceral no ano de 2011 em relação a 2010, no entanto, esse número aumentou gradativamente, alcançando os índices de 2011 no ano de 2014. Para os casos humanos, os anos de 2010 e 2011 foram os anos com maiores registros, apresentando um declínio significativo a partir desse período. No comparativo entre casos humanos e caninos, verifica-se que enquanto os casos humanos apresentaram-se em queda a partir de 2011, os casos caninos vêm aumentando chegando a registrar-se maiores que os humanos a partir de 2012. / Leishmaniasis is a parasitic disease that presents various clinical forms, from mucocutaneous to visceral, which is the most severe form of the disease. It is caused by a flagellate parasite of the genus Leishmania and presents a heteroxenic life cycle, involving blood feeding of the female sand flies in wild and domestic animals, such as dogs, as well as in humans. So far, control of Visceral Leishmaniasis (LV) is associated with the elimination of infected reservoir (dogs), however, this requires reliable diagnostic methods. In this study, the diagnostic PCR based on the spliced leader sequences of RNA (mini-exon) and Immunohischemistry, using leishmanias spp. labeled with paraffin embedded biopsy polyclonal antibodies were used. In addition, we used epidemiological data on canine and human Leishmaniasis in the municipality of Porto Nacional and the state of Tocantins. All fragments of liver, spleen and lymph node showed amplification for L. infantum chagasi and none for L. braziliensis or L. amazonensis. When comparing IHC with respect to PCR, there was a low replicability, with a P-value of 0.0077, therefore p <0.05, denoting that there were no concordances between the two tests. Regarding epidemiological data from Porto Nacional, they indicated a significant decrease in the number of dogs with Visceral Leishmaniasis in 2011 compared to 2010, however, this number increased gradually, reaching the indexes of 2011 in 2014. For human cases, the years 2010 and 2011 were the years with the highest records, showing a significant decline from that period. In the comparison between human and canine cases, it is verified that while human cases have fallen since 2011, canine cases have been increasing and have become larger than humans since 2012.
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Estudo de Leishmania spp. em amostras provenientes de cães e humanos e suas implicações em saúde pública na região de Bauru, São Paulo. / Study of Leishmania spp. in samples from dogs and humans and their implications for public health in the region of Bauru, São Paulo.

Ramos-Augusto, Livia Carla 31 July 2018 (has links)
Submitted by Livia Carla Ramos Augusto (liviacramos@hotmail.com) on 2018-08-23T17:05:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Livia Carla Ramos Augusto.pdf: 6597021 bytes, checksum: 2e39e090a72fb96a31f56aeaf2a079f1 (MD5) / Approved for entry into archive by Sulamita Selma C Colnago null (sulamita@btu.unesp.br) on 2018-08-24T16:22:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ramosaugusto_lc_me_bot.pdf: 6597021 bytes, checksum: 2e39e090a72fb96a31f56aeaf2a079f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-24T16:22:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ramosaugusto_lc_me_bot.pdf: 6597021 bytes, checksum: 2e39e090a72fb96a31f56aeaf2a079f1 (MD5) Previous issue date: 2018-07-31 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As leishmanioses são doenças zoonóticas de importância em saúde pública. Os objetivos do trabalho foram comparar as técnicas laboratoriais convencionas utilizadas para o diagnóstico de infecção por Leishmania spp. em amostras de sangue humano e canino com técnicas moleculares e realizar a quantificação da carga parasitária. Além disso, realizar a análise espacial dos casos de leishmaniose visceral humana (LV) e canina (LVC), confirmados laboratorialmente e notificados, baseando-se na incidência da enfermidade, entre 2014 a 2016, no município de Bauru (SP), com intuito de identificar as áreas prioritárias para implementação de medidas de vigilância e de controle. Foram avaliadas amostras de 26 pacientes com suspeita clínica de LV por meio do exame parasitológico direto em aspirado de medula óssea, teste imunocromatográfico rápido (TR), reação de imunofluorescência indireta (RIFI), reação em cadeia da polimerase (PCR) e PCR em tempo real (qPCR). Além disso, foram avaliadas amostras de 22 pacientes humanos com suspeita clínica de leishmaniose tegumentar (LT) para realização da RIFI, PCR e qPCR. As amostras caninas foram obtidas por meio dos inquéritos sorológicos realizados em 4725 cães, pelo Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Bauru, e, mediante a positividade no TR (TR-DPP®) foi realizado o teste imunoenzimático (ELISA), PCR e qPCR. A análise espacial foi realizada em 39 casos humanos de LV, com diagnóstico obtido a partir do critério clínico-laboratorial, e nos 4725 cães pertencentes aos inquéritos sorológicos realizados entre 2014 a 2016, destacando os casos de LVC. Nas 26 amostras humanas analisadas para LV, a positividade obtida no parasitológico, TR, RIFI, PCR e qPCR foram: 80,8%, 80,8%, 73,1%, 84,6% e 84,6%. A RIFI foi a metodologia que obteve menor positividade e concordância com as demais metodologias e a carga parasitária se concentrou entre 100 e 1.000 parasitas/mL (68,2%). Nas 22 amostras humanas analisadas para LT, a positividade obtida na RIFI, PCR e qPCR foram: 9,1%, 18,2 e 18,2%. A RIFI obteve menor positividade e concordância insignificante com as técnicas moleculares e a carga parasitária das amostras se concentraram entre 100 e 1.000 parasitas/mL (100%). Nas amostras caninas, a positividade de 11,5% (543/4725) foi obtida em ambas as técnicas (TR-DPP® e ELISA). Nos cães TR-DPP® positivos, a positividade no ELISA, PCR e qPCR foram: 64,9%, 63,9% e 65%. A concordância foi excelente entre o ELISA e as técnicas moleculares. A carga parasitária se concentrou entre 1.000 e 10.000 parasitas/mL (73,9%). Foram identificadas cinco áreas com densidade alta de LV, localizadas nas regiões norte e oeste do município. Foram identificadas duas áreas com densidade alta de LVC, ambas localizadas na região norte. Em duas localidades, na região norte, houve sobreposição, compreendendo 68% dos casos de LVC notificados nos inquéritos sorológicos e 38,5% casos de LV humano. As técnicas moleculares em amostras de sangue constituem uma alternativa menos invasiva de diagnóstico tanto para LV quanto para LT em humanos, devido a alta positividade entre as amostras analisadas e/ou excelente concordância com as técnicas convencionais e, em cães, podem ser utilizadas tanto para o diagnóstico quanto para complementar os resultados sorológicos. As análises espaciais são capazes de gerar informações úteis que auxiliam em um melhor planejamento de ações de vigilância e no controle da doença, além da otimização do uso de recursos públicos para a execução dessas ações. / Leishmaniasis is a zoonotic disease of public health significance. The aims of the present study were to compare the conventional laboratory techniques used for the diagnosis of Leishmania spp. in human and canine blood samples with the molecular techniques and carry out the quantification of the parasite load. In addition, to perform a spatial analysis of visceral leishmaniasis in humans (VL) and dogs (CVL), laboratory confirmed and notified, based on the incidence of the disease in Bauru city (SP), during 2014 to 2016, with the objective of identify priority areas for surveillance and control of VL. Twenty-six samples with clinical suspicion of VL were evaluated through direct parasitological in bone marrow aspirate, rapid immunochromatographic test (RT), indirect immunofluorescent antibody test (IFAT), polymerase chain reaction (PCR) and real-time PCR (qPCR). In addition, twenty-two human cases with clinical suspicion of TL were selected for the accomplishment of IFAT, PCR and qPCR. The canine samples were obtained through serological investigations carried out in 4,725 dogs by the Center for Zoonoses Control (CCZ) in Bauru, and by means of the positivity in RT (RT-DPP®) was realized the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), PCR and qPCR. The spatial analysis was performed in thirty-nine human cases of VL, with a diagnosis obtained from clinical laboratory, and in 4,725 dogs belonging to the serological investigations conducted during 2014 to 2016, highlighting CVL cases. In the twenty-six human samples analyzed for VL, the positivity obtained in parasitological, RT, IFAT, PCR and qPCR were: 80.8%, 80.8%, 73.1%, 84.6% and 84.6%. IFAT was the methodology that obtained less positivity and agreement with other methodologies. The parasite load was concentrated between 100 and 1,000 parasites/mL (68.2%). In the twenty-two human samples analyzed for tegumentary leishmaniasis (TL), the positivity obtained in the IFAT, PCR and qPCR were: 9.1%, 18.2 and 18.2%. The IFAT obtained lower positivity and negligible agreement with the molecular techniques and the parasite load of the samples were concentrated between 100 and 1,000 parasites/mL (100%). In the canine samples, 11.5% (543/4,725) of positivity were obtained for both techniques (RT-DPP® and ELISA). In RT-DPP® positive dogs, positivity in ELISA, PCR and qPCR were: 64.9%, 63.9% and 65%. The agreement was excellent between ELISA and molecular techniques. The parasite load was concentrated between 1,000 and 10,000 parasites/ml (73.9%). Five areas with high VL density were identified, located in the north and west regions of the city. Two areas with high CVL density were identified, both located in the north region. In two locations in the north region was overlap, comprising 68% of cases of CVL notified in serological investigations and 38.5% cases of human VL. Molecular techniques in blood samples consist in a less invasive diagnostic alternative for both VL and TL in humans, due to the higher positivity between the samples analyzed and/or the excellent agreement with the conventional techniques and, in dogs, can be used both for diagnosis and to complement the serological results. Spatial analysis provides useful information and can assist in the better surveillance planning actions and control of the disease, besides optimizing the use of resources for the execution of these actions. / FAPESP: 12/21145-4 / 15/17519-4
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Estudo de Leishmania spp. em amostras provenientes de cães e humanos e suas implicações em saúde pública na região de Bauru, São Paulo.

Ramos-Augusto, Livia Carla January 2018 (has links)
Orientador: Virgínia Bodelão Richini-Pereira / Resumo: As leishmanioses são doenças zoonóticas de importância em saúde pública. Os objetivos do trabalho foram comparar as técnicas laboratoriais convencionas utilizadas para o diagnóstico de infecção por Leishmania spp. em amostras de sangue humano e canino com técnicas moleculares e realizar a quantificação da carga parasitária. Além disso, realizar a análise espacial dos casos de leishmaniose visceral humana (LV) e canina (LVC), confirmados laboratorialmente e notificados, baseando-se na incidência da enfermidade, entre 2014 a 2016, no município de Bauru (SP), com intuito de identificar as áreas prioritárias para implementação de medidas de vigilância e de controle. Foram avaliadas amostras de 26 pacientes com suspeita clínica de LV por meio do exame parasitológico direto em aspirado de medula óssea, teste imunocromatográfico rápido (TR), reação de imunofluorescência indireta (RIFI), reação em cadeia da polimerase (PCR) e PCR em tempo real (qPCR). Além disso, foram avaliadas amostras de 22 pacientes humanos com suspeita clínica de leishmaniose tegumentar (LT) para realização da RIFI, PCR e qPCR. As amostras caninas foram obtidas por meio dos inquéritos sorológicos realizados em 4725 cães, pelo Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Bauru, e, mediante a positividade no TR (TR-DPP®) foi realizado o teste imunoenzimático (ELISA), PCR e qPCR. A análise espacial foi realizada em 39 casos humanos de LV, com diagnóstico obtido a partir do critério clínico-laboratorial, e nos 4725 cães ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Leishmaniasis is a zoonotic disease of public health significance. The aims of the present study were to compare the conventional laboratory techniques used for the diagnosis of Leishmania spp. in human and canine blood samples with the molecular techniques and carry out the quantification of the parasite load. In addition, to perform a spatial analysis of visceral leishmaniasis in humans (VL) and dogs (CVL), laboratory confirmed and notified, based on the incidence of the disease in Bauru city (SP), during 2014 to 2016, with the objective of identify priority areas for surveillance and control of VL. Twenty-six samples with clinical suspicion of VL were evaluated through direct parasitological in bone marrow aspirate, rapid immunochromatographic test (RT), indirect immunofluorescent antibody test (IFAT), polymerase chain reaction (PCR) and real-time PCR (qPCR). In addition, twenty-two human cases with clinical suspicion of TL were selected for the accomplishment of IFAT, PCR and qPCR. The canine samples were obtained through serological investigations carried out in 4,725 dogs by the Center for Zoonoses Control (CCZ) in Bauru, and by means of the positivity in RT (RT-DPP®) was realized the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), PCR and qPCR. The spatial analysis was performed in thirty-nine human cases of VL, with a diagnosis obtained from clinical laboratory, and in 4,725 dogs belonging to the serological investigations conducted during 2014 to 2016, highlighting CVL ca... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Estudo epidemiológico da leishmaniose tegumentar na área urbana do município de Viçosa: prevalência canina e descrição dos casos humanos / Epidemiological study of cutaneous leishmaniasis in the urban area of the Viçosa city: canine prevalence and description of human cases

Alves, Waneska Alexandra 11 December 2001 (has links)
Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-28T11:31:47Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 787388 bytes, checksum: e4427091e3439191bcebe29096b6b773 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-28T11:31:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 787388 bytes, checksum: e4427091e3439191bcebe29096b6b773 (MD5) Previous issue date: 2001-12-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As leishmanioses representam, na atualidade, uma das mais importantes zoonoses do mundo. O estudo epidemiológico destas doenças torna-se importante, pois nosso país apresenta quadros graves de epidemias e endemias. Adicionalmente, em algumas áreas, estas doenças apresentam caráter emergente. O presente trabalho pretendeu avaliar a existência de condições propícias para a manutenção e transmissão da leishmaniose tegumentar na área urbana do município de Viçosa-MG, assim como, realizar a identificação e a descrição do perfil de ocorrência da doença no município. Foi realizada análise de banco de dados, constituído a partir do inquérito sorológico canino e da aplicação de questionário individualizado, contendo informações demográficas e sobre hábitos do animal, permitindo assim, caracterizar a distribuição da infecção canina no município. Foi encontrada taxa de prevalência da infecção canina de 9,9%, a qual variou segundo os distritos e bairros analisados. Não foram encontradas associações entre infecção canina e as variáveis sexo, idade, raça e tipo de pelagem do animal. Entretanto, cães com o hábito de “irem à rua sozinho” apresentaram maior chance de infecção, o que pode significar fator de risco para dispersão da doença pelo município e regiões circunvizinhas. Foi encontrado um alto percentual de cães assintomáticos reforçando a importância de animais aparentemente sadios, porém infectados, que servem como fonte de infecção para vetores e destes para o ser humano. Adicionalmente, foram analisadas as fichas de notificação de leishmaniose tegumentar humana existentes na Secretaria Municipal de Saúde de Viçosa, tendo sido observada a existência de casos autóctones humanos nas áreas urbana e rural. Estes achados associados à descrição prévia dos vetores Lutzomia whitmani e L. intermedia corroboram a hipótese de transmissão da leishmaniose tegumentar humana e canina no município de Viçosa. O fato de terem sido identificados casos autóctones humanos e caninos na área urbana sugere a existência de um processo de urbanização da leishmaniose tegumentar nesta área. Os dados obtidos denotam a importância desta zoonose no município de Viçosa, indicando que medidas de prevenção e controle da infecção canina devem ser implementadas, para que os níveis de prevalência humana e animal não aumentem. / Leishmaniasis represents, in the present time, one of the most important zoonose of the world. The epidemiological study of these illnesses becomes important because Brazil presents serious pictures of epidemics and endemic diseases. Additionally, in some areas, these illnesses present emergent character. The present work intended to evaluate the existence of propitious conditions for the maintenance and transmission of cutaneous leishmaniose in the urban area of Viçosa city, Minas Gerais state, as well as, to carry through the identification and the description of the ilness occurrence profile in the city. A data base was constituted from a canine serological inquiry and the application of a questionnaire contend demographic information and on habits of the animal. The prevalence of the canine infection was 9.9%. Associations between canine infection and the variables sex, age, race and type of coat of the animal had not been found. However, dogs with the habit “go to street alone” had presented greater infection probability, what it can mean a risk factor for ilness dispersion in the city and surrounding regions. A high percentage of dogs without signs of the disease was found, strengthening the importance of aparently healthy animals that can be source of infection for vectors and from these to human being. Additionally, the cases of human cutaneous leishmaniasis notificated to the Municipal Secretariat of Health of Viçosa had been analyzed, having been observed the existence of human autochthonous cases in the urban and rural areas. These findings, associates to the previous description of the vectors Lutzomia intermedia and L. whitmani, corroborate the hypothesis of human and canine cutaneous leishmaniasis transmission in Viçosa city. The human and canine autochthonous cases, in the urban area, suggest a urbanization process of the disease in this area. These datas denote the importance of this zoonose in the Viçosa city and actions to prevent and control the disease must be implemented, so that the human and animal prevalence levels do not magnify.

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