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Previous issue date: 2010-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study was divided in three stages and aimed to determine the cellular changes induced by heat stress on nuclear maturation in vitro and induction of cell death by apoptosis in goat oocytes and embryos. The ovaries of goats in the dry season and rainy season were collected in a slaughterhouse and transported to the Laboratory of Biotechnical Reproduction of UFRPE. The first stage, the cumulus oophorus complexes in goat of 12 repetitions were collected by the technique of "slicing" of the follicles from 2 to 6 mm in diameter and selected based on morphology. Divided into Group-1 (recovered) and Group-2 (in vitro matured), 25 oocytes per drop were placed in basic medium maturity (MBM). After collection of oocytes, it was determined the quality of oocytes, the enzyme activity of group II caspases with reagent PhiPhiLux-G1D2 and DNA fragmentation (TUNEL). Group-2, after maturation, were determined the stage of nuclear maturation, enzymes caspases and DNA fragmentation. In the stages of nuclear maturation stages of germinal vesicle, disruption of the germinal vesicle, metaphase I and II showed no significant difference (P > 0.05). There was no significant difference (P > 0.05) in the activity ofenzymes and caspases in DNA fragmentation of oocytes recovered and matured in vitro. The second stage, the cumulus oophorus complexes in goat were submitted to maturation, fertilization and in vitro. The percentage of cleaved oocytes was determined on day 3 (D-3) and the oocytes that developed to the stages of 8-16 cells (D-4), morulae (D-5) and blastocyst (D-8) after fertilization. The quality of blastocysts was assessed with the pigment DAPI and the determination of blastomeric positive for apoptosis by TUNEL assay. Significant difference (P < 0.05) stages of fertilization, cultivation in D-3 and morulae. No significant difference (P > 0.05) phases of maturation, growing on D-4, blastocyst and the TUNEL test. Based on these results, we concluded that the dry and rainy seasons will notinfluence the nuclear maturation in vitro apoptosis of oocytes and embryos and in vitro production of embryos in goats. / Este estudo foi dividido em duas etapas e teve como objetivo determinar as alterações celulares induzidas pelo estresse térmico na maturação nuclear in vitro e na indução da morte celular por apoptose em oócitos e embriões caprinos. Os ovários de cabras nas estações seca e chuvosa, foram coletados em abatedouro e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Na primeira etapa, os complexos cumulus oophorus caprinos de 12 repetições foram colhidos pela técnica de “slicing” dos folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro e selecionados com base na morfologia. Divididos em Grupo-1 (recuperado) e Grupo-2 (maturados in vitro), 25 oócitos foram colocados por gota em meio básico de maturação (MBM). Após a coleta dos oócitos, foi determinado a qualidade dos oócitos, atividade das enzimas Caspases do grupo II com reagente PhiPhiLux-G1D2 e fragmentação de DNA (TUNEL). O Grupo-2, após maturação, foi determinado o estádio de maturação nuclear, enzimas Caspases e fragmentação de DNA. Nos estádios de maturação nuclear as fases de Vesícula Germinativa, Rompimento da Vesícula Germinativa, MetáfaseI e II não apresentaram diferença significativa (P > 0,05). Não foi encontrada diferença significativa (P > 0,05) na atividade das enzimas Caspases e na fragmentação do DNA dos oócitos recuperados e maturados in vitro. Na segunda etapa, os complexos cumulus oophorus caprinos foram submetidos à maturação, fertilização e cultivo in vitro. A porcentagem de oócitos clivados foi determinada no dia 3 (D-3) e os oócitos que se desenvolveram aos estádios de 8-16 células (D-4), mórula (D-5) e blastocisto (D-8) após a fertilização. A qualidade dos blastocistos foi avaliada com o corante DAPI e a determinação de blastômeros positivos para apoptose através do ensaio de TUNEL. Foi encontrada diferença significativa (P < 0,05) nas fases de fertilização, cultivo no D-3 e mórula. Não apresentaram diferença significativa (P > 0,05) às fases de maturação, cultivono D-4, blastocisto e no teste de TUNEL. Com base nos dados obtidos, podemos concluir que as estações seca e chuvosa não exercem influência na maturação nuclear in vitro, na apoptose de oócitos e embriões e na produção in vitro de embriões da espécie caprina..
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2:tede2/5833 |
| Date | 22 February 2010 |
| Creators | CHAVES, Ricardo de Macêdo |
| Contributors | OLIVEIRA, Marcos Antonio Lemos de, LIMA, Paulo Fernandes de, CHIAMENTI, Adauto, RABELO, Marcelo Cavalcanti, AZEVEDO, Elielete Maria Pires de |
| Publisher | Universidade Federal Rural de Pernambuco, Programa de Pós-Graduação em Ciência Veterinária, UFRPE, Brasil, Departamento de Medicina Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRPE, instname:Universidade Federal Rural de Pernambuco, instacron:UFRPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -3061482854177903105, 600, 600, 600, 600, -3020210563763616780, 453670264235017319, 2075167498588264571 |
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