La comercialización de la fibra de alpaca es una de las principales fuentes de sustento para más de un millón de personas en el Perú, siendo de mucha importancia para su economía por ser el principal productor de fibra. Teniendo en cuenta que dos de los factores importantes en la calidad de la fibra son su diámetro y su longitud, se analizaron los ESTs de la alpaca depositados en la base de datos del NCBI para identificar los genes relacionados a la síntesis de fibra y microsatélites que tendrían una función importante relacionada a su calidad. Se analizaron 7286 ESTs de piel de una alpaca del tipo huacaya, resultando en 2428 secuencias ensambladas o unigenes, posteriormente se realizó la búsqueda de homologías y la anotación de secuencias. Se identificaron 22 genes relacionados a la síntesis de la fibra (KRT10, KRT25, KRT31, KRT14, KRT15, KRT5, KRT78, KRT81, KRT85, KRTAP3-2, KRTAP10, KRTAP11-1, TNFSF12, sFRP4, RACK1, COL1A1, COL1A2, DAB2IP, GLI1, BMP1, BMP4 y CTNNB1) donde se observó 4 de estos con una alta expresión (TNFSF12, sFRP4, COL1A1 y COL1A2) y 10 genes poseen microsatélites (COL1A1, TNFSF12, DAB2IP, GLI1, BMP4, KRT81, KRT5, KRT15, KRT85 y KRTAP3-2). El presente estudio aporta la identificación de genes relacionados a la síntesis de fibra y marcadores EST-SSR con los cuales se pueden probar en la alpaca para establecer de forma experimental si estos genes tienen una relación con el diámetro.

PAULINO, L.R.F.M. Efeito do fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e da interleucina-1 beta (IL-1β) sobre o desenvolvimento in vitro de folículos secundários bovinos isolados. 2017. 82f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) – Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2017. / Submitted by Mestrado Biotecnologia (biotecnologiasobral@gmail.com) on 2017-03-28T13:50:28Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_lrfmpaulino.pdf: 4160564 bytes, checksum: 35cbb24778d8e39c94be8695be1bad2a (MD5) / Rejected by Ana Márcia Sousa (marciasousa@ufc.br), reason: Prezada, Favor verificar os seguintes itens: Quanto a submissão: Nos campos autor, título em português e título em inglês fazer em letras maiúsculas e minusculas conforme guia. Quanto a dissertação: Solicitar ao autor que corrija os elementos introdutórios conforme normalização de trabalhos acadêmicos da UFC. Ex. de alguns erros encontrados, folha de rosto sem nome do orientador, ficha catalográfica com título todo maiúsculo e listas de ilustrações e tabelas desalinhadas. on 2017-04-11T13:37:23Z (GMT) / Submitted by Mestrado Biotecnologia (biotecnologiasobral@gmail.com) on 2017-05-18T13:36:54Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_lrfmpaulino.pdf: 4179675 bytes, checksum: 7d98eadd97e812f42d8bf4f9283b6f2a (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-05-24T15:17:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_lrfmpaulino.pdf: 4179675 bytes, checksum: 7d98eadd97e812f42d8bf4f9283b6f2a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-24T15:17:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_lrfmpaulino.pdf: 4179675 bytes, checksum: 7d98eadd97e812f42d8bf4f9283b6f2a (MD5) Previous issue date: 2017-03-07 / Ovarian follicular growth is regulated by various substances, such as hormones, growth factors and cytokines. Tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-1β (IL-1β) are proinflammatory cytokines that have several sites of synthesis in the ovary. In this context, the study of the effect of these cytokines during the in vitro growth of preantral follicles is of great importance for understanding the mechanisms that control follicular development in vitro. The objective of the present study was to determine the effect of TNF-α and IL-1β on development and survival of bovine secondary follicles after 18 days of culture in vitro. Secondary follicles (~0.2mm) were isolated from ovarian cortex of cows and individually cultured. The secondary follicles were randomly distributed in the following treatments: (I) TCM-199+ alone (culture control), or supplemented with (II) 10 ng/mL IL-1β, (III) 10 ng/mL TNF-α and (IV) both TNF- α and IL-1β. The follicles were cultured at 38.5°C, with 5% CO2 in air, for 18 days. Thereafter, the effect of these treatments on growth, follicular survival, antrum formation, viability, ultrastructure and mRNA levels for GDF9, C-MOS, H1foo and Cyclin B1 were then evaluated. At the end of 18 days of in vitro culture, TNF-α increased follicular diameter and the rate of antrum formation. On the other hand, IL-1β and both IL-1β and TNF-α did not influence follicle growth. All treatments maintained viability rates after culture between 74.32 and 92.00%. Ultrastructural analysis of showed that follicles cultured in the presence of TNF-α had oocyte citoplasm and granulosa cells well preserved. The presence of TNF-α, IL-1β or both did not influence the expression o mRNAs for GDF9, C-MOS, H1foo and Cyclin B1 after 18 days of culture. In conclusion, TNF-α promotes follicular growth and maintains the ultrastructure of isolated bovine secondary follicles cultured in vitro. / O crescimento folicular ovariano é regulado por diversas substâncias, tais como hormônios, fatores de crescimento e citocinas. O fator de necrose tumoral-α (TNF-α) e a interleucina-1β (IL-1β) são citocinas pró-inflamatórias que apresentam vários locais de síntese no ovário. Nesse contexto, o estudo do efeito destas citocinas durante o crescimento in vitro de folículos pré- antrais é de grande importância para a compreensão dos mecanismos que controlam o desenvolvimento folicular in vitro. O objetivo do presente estudo foi determinar o efeito do TNF-α e IL-1β sobre o desenvolvimento e a sobrevivência de folículos secundários bovinos após 18 dias de cultivo in vitro. Folículos secundários (~ 0,2 mm) foram isolados do córtex ovariano de vacas e cultivados individualmente. Os folículos secundários foram distribuídos aleatoriamente nos seguintes tratamentos: (I) TCM-199+ sozinho (controle) ou suplementado com (II) IL-1β (10 ng/mL), (III) TNF-α (10 ng/mL) e (IV) e ambos TNF-α e IL-1β. Os folículos foram cultivados a 38,5 °C, com 5% de CO2, durante 18 dias. A cada dois dias, 60 µL de meio de cultivo foram substituídos por meio fresco. Em seguida, avaliou-se o efeito destes tratamentos sobre crescimento, sobrevivência folicular, formação do antro, viabilidade, ultraestrutura e níveis de RNAm para GDF9, C-MOS, H1foo e Ciclina B1. No final de 18 dias de cultivo in vitro, o diâmetro folicular e taxa de formação de antro aumentaram após o cultivo em meio suplementado com apenas TNF-α. Todos os tratamentos mantiveram viabilidade após o cultivo entre 74.32 e 92.00%. A análise da ultraestrutura mostrou que os folículos cultivados na presença do TNF-α e IL-1β mantiveram a ultraestrutura do citoplasma do oócito e das células da granulosa. Os folículos cultivados expressaram RNAm para GDF9, C-MOS, H1foo e Ciclina B1, mas não houve diferença significativa entre os tratamentos. Em conclusão, o TNF-α contribui para o crescimento folicular e a manutenção da ultra-estrutura de folículos secundários bovinos cultivados in vitro.

Submitted by Luiza Maria Pereira de Oliveira (luiza.oliveira@ufpe.br) on 2015-05-18T14:57:00Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_Ciria Vieira Barbosa.pdf: 1682880 bytes, checksum: 405863d4d293c22faf7b3cadd39e3e25 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-18T14:57:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_Ciria Vieira Barbosa.pdf: 1682880 bytes, checksum: 405863d4d293c22faf7b3cadd39e3e25 (MD5) Previous issue date: 2015-04-06 / A alopecia androgênica (AGA) é a mais comum das doenças crônicas dermatológicas e, entre os tratamentos utilizados para esta disfunção, o minoxidil (MNX) a 2% e 5% em soluções hidroalcoólicas tópicas apresenta sintomas relacionados à absorção sistêmica do fármaco, irritação do couro cabeludo devido ao álcool contido na formulação e retorno dos sintomas após interrupção do tratamento. O objetivo deste trabalho foi preparar, caracterizar e avaliar o perfil de liberação, a retenção no estrato córneo (EC) e nos folículos pilosos do MNX em lipossomas (LMNX) e destes lipossomas incorporados ao gel de hidroxipropilmetilcelulose (LMNX/HPMC). Estudos de estabilidade, difração de Raios-X (DR-X), espectroscopia no infravermelho (FTIR) e calorimetria diferencial exploratória (DSC) foram realizados para LMNX/HPMC (4 mg/mL). O perfil de liberação in vitro, retenção e permeação foi realizado em células de difusão de Franz, comparando-se às formulações LMNX e LMNX/HPMC a solução hidroalcoólica de MNX (20 mg/mL). A atividade promotora de crescimento capilar in vivo de LMNX/HPMC foi avaliada em ratos Wistar tratados por via tópica com os LMNX/HPMC e medicamento referência (Regaine®) a 2%. Análises de DR-X, FTIR e DSC sugerem interação fármaco-lipossoma e lipossoma-hidrogel. Porém, nos resultados da liberação in vitro, os coeficientes de difusão do MNX a partir de LMNX (D×10-6 = 4,8205±0,0451 cm2/s) e a partir de LMNX/HPMC (D×10-6 = 4,5900±0,0451 cm2/s) são semelhantes (p > 0,05) indicando que HPMC não interfere na liberação do fármaco. A retenção no EC in vitro apresentou-se na seguinte ordem decrescente: MNX em solução (19,05±1,58 μg/cm2) > LMNX (8,65±2,15 μg/cm2) > LMNX/HPMC (4,08±0,70 μg/cm2). Contudo, a retenção in vitro de MNX nos folículos a partir de LMNX/HPMC (2,42±0,77 μg/cm2) foi semelhante à obtida a partir da solução de MNX (4,40±2,81 μg/cm2) e significativamente menor que a obtida a partir de LMNX (14,60±4,47μg/cm2), possivelmente devido à maior habilidade de formulações lipossomais promoverem depósito folicular. Ao contrário do observado para o MNX em solução, a partir das formulações lipossomais, não foi detectada a presença de MNX no meio receptor. Nos estudos in vivo, o número de folículos por milímetro linear de pele apresentou-se na seguinte ordem decrescente: grupo referência (25,82±1,04) > LMNX/HPMC (20,97±0,46) > controle (11,79±0,25), indicando a grande eficiência de LMNX/HPMC, que apesar de possuir uma concentração de MNX vinte vezes menor que o medicamento referência, sua atividade foi apenas 19% inferior à deste. LMNX/HPMC foi capaz de prolongar a fase anágena de folículos dos animais, desde a primeira semana de tratamento (100% de folículos em fase anágena) e apresentou o menor tempo entre início e final do crescimento de novos pelos comparado ao produto referência e ao grupo controle. Portanto, conclui-se que o sistema lipossomal foi capaz de evitar a penetração de MNX através da pele, mostrou-se hábil em promover depósito folicular e que sua incorporação ao gel de HPMC não influenciou na liberação do fármaco, constituindo-se assim em formulações adequadas ao uso tópico do minoxidil.

Resumo não disponível

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A manipulação no período neonatal tem sido utilizada há algumas décadas como modelo experimental para analisar os mecanismos pelos quais variações precoces no ambiente do animal afetam o desenvolvimento de sistemas neurais, dando origem a alterações comportamentais e neuroendócrinas estáveis na vida adulta. Em ratos, a manipulação neonatal consiste do manuseio suave dos filhotes por alguns minutos, em geral durante as duas primeiras semanas de vida. Trabalhos prévios demonstram que a manipulação neonatal altera o eixo hipotálamo-hipófise-gônada, reduzindo a capacidade reprodutiva de fêmeas através da diminuição do comportamento sexual, do bloqueio da ovulação e promove um atraso na instalação da puberdade. Com isso, o objetivo desse trabalho foi estudar os efeitos da manipulação neonatal sobre a função ovariana de ratas. Animais foram submetidos à manipulação neonatal durante 1 minuto, nos dez primeiros dias de vida pós-natal, e após três ciclos estrais regulares os ovários foram retirados, na fase do proestro, para análise histológica dos mesmos. A análise estrutural dos ovários das ratas manipuladas mostrou que não houve diferença estatisticamente significativa no peso ovariano, no número total de folículos antrais por ovário e nos diferentes diâmetros da espessura da camada das células da teca de folículos antrais normais e atrésicos. A manipulação neonatal induziu aumento do número de folículos antrais normais por ovário, redução no número de folículos antrais atrésicos por ovário, aumento do númerode folículos antrais normais com diâmetros inferiores a 300 mm e uma diminuição do número de folículos antrais atrésicos com diâmetros entre 401-500 mm. Em conjunto, nossos resultados demonstraram que a manipulação neonatal não induz alterações no desenvolvimento morfológico folicular e que, os mecanismos que levam a redução da capacidade reprodutiva de fêmeas provocada pela manipulação neonatal, como o bloqueio da ovulação, já visto em trabalhos do nosso laboratório, não estão associados a alterações de estrutura ovariana.

A individualização do tratamento é o desafio atual no campo da reprodução assistida. Fatores prognósticos clássicos como idade ou testes de avaliação da reserva ovariana não são suficientes para predizer completamente a resposta das pacientes à indução da ovulação. Essa tese investiga se polimorfismos do receptor do Hormônio Folículo Estimulante ou do receptor do Hormônio Anti-Mulleriano influenciam na resposta ovariana à administração de uma dose padrão de gonadotrofinas para Fertilização In Vitro numa população caucasiana francesa altamente selecionada. Para avaliação correta da resposta à indução da ovulação, usamos parâmetros clássicos como número de oócitos recuperados ou embriões obtidos e também a relação entre o número de folículos que atingem a maturidade ao final do ciclo de indução e o número basal de folículos antrais – taxa de maturação folicular. Como resultados, apresentamos que a presença do alelo G para o receptor do Hormônio Anti Müllleriano está associado com um número menor de oócitos recuperados na punção ovariana. Já o polimorfismo do receptor do FSH Ser 680, apesar de associado com um nível de FSH basal mais elevado, não altera a taxa de maturação folicular. Esses dados podem ajudar, no futuro, a escolha correta do melhor protocolo de indução da ovulação assim como a dose de gonadotrofina a ser utilizada. / Tailoring for a single patient the use of controlled ovarian stimulation is the next challenge in the field of reproductive technology. Classic prognostic factors such as age or ovarian reserve tests have shown to be limited to predict patient’s response towards ovulation induction. This thesis searches to investigate if whether FSH or AMH receptor polymorphisms influence ovarian response to standard gonadotropins administration in a high selected French Caucasian population. In order to correctly evaluate the real ovarian response of each patient, we make use of classical parameters like the number of oocytes retrieved or number of embryos obtained at the end of an IVF cycle, and also the relationship between the number of follicles that reach maturity criteria and the total number of pre antral follicles – follicular output rate. Our results show that the presence of the G allele in the AMH receptor is associated with a lower number of oocytes retrieved. In addition, although FSHR Ser680 genotype is associated with higher basal FSH levels, this polymorphism as well as the Ala307 does not influence the follicular output rate. Our data can help to choose the best protocol and initial dose of gonadotrophin for ovulation induction in the future.

A endometriose atinge 10-15% das mulheres. Portadoras dessa patologia têm 20 vezes mais chances de serem inférteis e 30-60% das pacientes com endometriose apresentam infertilidade associada. Nosso grupo de pesquisa demonstrou que mulheres com endometriose e infertilidade apresentam diversas anormalidades hormonais tais como hiperprolactinemia, insuficiência lútea, diminuição de fatores de crescimento intra-folicular e, mais recentemente, a coorte folicular ovariana heterogênea com uma redução da reserva folicular. Portanto, estudaremos a prevalência do polimorfismo do gene do receptor do hormônio folículo estimulante (FSH) em pacientes com endometriose e infertilidade. Acreditamos que polimorfismos no gene que sintetiza o receptor do FSH são mais prevalentes nesse grupo de pacientes. Tal polimorfismo, que altera a transdução do sinal do receptor, pode ser o responsável por uma resposta ovariana inadequada ao FSH. Conduzimos, ao longo dessa dissertação, um estudo caso-controle. Os casos compreendem 50 pacientes com infertilidade e endometriose. Os controles, 51 pacientes férteis sem endometriose. Determinaremos a prevalência alélica da substituição da asparagina (N) pela serina (S) no códon 680 (N680S) e da treonina (T) pela alanina (A) no códon 307 (T307A), localizados no éxon 10, em ambos os alelos do gene que sintetiza o receptor do FSH. Para tal, utilizaremos técnicas de reação em cadeia da polimerase em ambos os alelos. Os dois grupos não diferiram em sua avaliação demográfica. No grupo de pacientes com endometriose e infertilidade foram encontradas 10 pacientes homozigotas S/S e 10 pacientes A/A, 23 pacientes heterozigotas N/S e 17 T/A. Além de 17 pacientes genotipicamente N/N e 23 T/T. No grupo controle, houve 9 pacientes com homozigose S/S e 15 A/A, 25 heterozigotas N/S e 22 T/A. Finalmente, 17 pacientes com genótipo N/N e 14 T/T . Não obtivemos diferença significativa entre os grupos (P>0,05). Esse estudo pioneiro rejeita a hipotética associação entre endometriose e os polimorfismos N680S e T307A no gene que sintetiza o receptor do FSH.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T06:06:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 295105.pdf: 2193083 bytes, checksum: 9a0cebe808795e41f914d26e96e95c19 (MD5) / Células tronco são células com capacidade de auto renovação, e de diferenciação em diversos tipos celulares. Nos últimos anos, muitos estudos têm se dedicado à identificação de células tronco em tecidos adultos como modo de desenvolver estratégias para regeneração e reparo tecidual. A crista neural é uma estrutura embrionária de vertebrados, originada na parte dorsal do tubo neural em fechamento, durante o processo de neurulação. Estas células possuem uma característica migratória, que é iniciada com o fechamento do tubo neural, e são distribuídas pelo embrião contribuindo para o desenvolvimento de vários tecidos. O folículo piloso é uma estrutura exclusiva de mamíferos, e é considerado um anexo do tecido epitelial. Esta estrutura possui uma composição complexa, que inclui glândula sebácea, a saliência do bulge, eixo do cabelo (que se projeta externamente da epiderme), e a papila dermal. Assim como outros tecidos adultos o folículo piloso dispõe de células tronco residentes, presentes no bulge, que é um discreto microambiente, também conhecido como saliência do folículo piloso. As células tronco epidermais encontradas no bulge são identificadas principalmente pela expressão das citoqueratinas 15 e 19 (KRT 15 e 19). Em contrapartida, também são encontradas no bulge, células que apresentam as citoqueratinas 5 e 14 (KRT15 e 14), que caracterizam células no estágio final de diferenciação da linhagem epidermal. Com isso, nosso trabalho focou em analisar o folículo piloso de vibrissas de camundongos como potencial nicho de células tronco com características epidermais e de crista neural, avaliando diferentes condições de cultivo. Utilizamos camundongos com idade entre 8 e 10 semanas, dos quais eram isoladas as vibrissas, o folículo piloso dissecado, e o bulge cultivado como explante. As culturas de explante do bulge eram realizadas em placas de 24 poços sobre colágeno tipo I. Após 7 ou 14 dias estas eram fixadas para realização de imunoflorescência indireta ou extração de mRNA e realização do RT-PCR. Os marcadores celulares testados foram KRT14, P75, Nestina e TRP2. . Avaliamos a ação dos meios simples, simples com EE e complexo, além de verificar os efeitos da adição do morfógeno sonic headhog (SHH, 10nM e 100nm) ao meio complexo e também medimos o halo de migração/crescimento em volta do explante. Observamos que as células iniciam sua migração do explante para a placa de cultura por volta do 4o dia de cultivo e representam uma população heterogênea com grandes variações nas mesmas condições testadas. Estas células apresentam características epidermais (TRP2 e KRT14, marcadores de melanócitos e queratinócitos, respectivamente) e também de crista neural (Nestina e P75). A expressão dos marcadores de crista neural foi mais expressiva nas culturas de 14 dias. O meio complexo também se mostrou mais eficiente que os demais, em relação a migração das células KRT14 do folículo piloso para a placa de cultura e diferenciação para queratinócitos. Em conjunto, nossos resultados demonstram que o folículo piloso corresponde a um nicho com populações de células progenitoras com características epidermais e de crista neural e com importante potencial terapêutico e biotecnológico. / Stem cells are cells with self-renewal ability and differentiation into various cellular types. In recent years, many studies have been dedicated to the identification of stem cells in adult tissues as a way to develop strategies for regeneration and tissue repair. The neural crest is an embryonic structure of vertebrates, originated at the dorsal neural tube closure, during the process of neurulation. These cells have a migratory feature, which starts with the closure of the neural tube, and are distributed by embryo contributing to the development of various tissues. The hair follicle is a unique structure to mammals, and is considered an attachment of epidermal tissue. This structure has a complex composition, which includes sebaceous gland, the bulge salience, the hair shaft (that falls outside of the epidermis), and the dermal papilla. As well as other adult tissues has the follicle stem cells residents in the bulge, which is a discreet microenviroment, also known as salience of the follicle. The epidermal stem cells found in the bulge are identified mainly by the expression of cytoqueratins 15 and 19 (KRT 15 and 19). In contrast, are also found in the bulge, cells that have the cytokeratins 5 and 14 (KRT15 and 14), that characterize cells in the final stage of epidermal lineage. With this, our work focused on analyzing the follicle pits of mice as potential stem cell niche with epidermal features and neural crest, evaluating different cultivation conditions. We use mice aged between 8 and 10 weeks of which were isolated from the whiskers, the follicle dissected, and the bulge cultivated as explants. Explants cultures of the bulge were realized in 24 wells plate dishes, on type I collagen. After 7 or 14 days these cultures were fixed for achievement of indirect immunofluorescence or mRNA extraction and realization of RT-PCR. This cells markers was tested were KRT14, P75, Nestin and TRP2. . Evaluate the action simple medium, simple medium with EE and complex medium, and check the effects of addition of morfogen sonic headhog (SHH, 10nM to 100nm) in the complex medium and also measure the migration/border around the explants growth. We note that the cells start their migration from explants culture card around the day 4 of cultivation and represent a heterogeneous population with large variations in the same conditions tested. These cells presents epidermal characteristics (TRP2 and KRT14, markers of melanocytes and keratinocytes, respectively) and also of neural crest (Nestina and P75). The expression of neural crest markers was more expressive with 14 days. The complex also proved more efficient than the other, in relation to the cells migration KRT14 follicle to the culture and differentiation to keratinocytes. Together, our results show that the follicle is a niche with populations of progenitor cells with epidermal characteristics and neural crest and important potential therapeutic biotechnology.

SILVA, A.W.B. Efeito da Ativina-A e do Hormônio Folículo Estimulante (FSH) sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais bovinos. 2012. 88 f. Dissertação (MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2012. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-08-23T12:10:03Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_awbsilva.pdf: 1265381 bytes, checksum: a7525f915d1304e7cbab05e24fe3f5b4 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-25T14:57:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_awbsilva.pdf: 1265381 bytes, checksum: a7525f915d1304e7cbab05e24fe3f5b4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-25T14:57:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_awbsilva.pdf: 1265381 bytes, checksum: a7525f915d1304e7cbab05e24fe3f5b4 (MD5) Previous issue date: 2012 / The aim of this study was to evaluate the effect of FSH alone or in combination with activin-A on survival, growth and expression of mRNA for ActR- IB, ActR- IIB, FSH-R, PCNA, and HAS1/2/3 in bovine secondary follicles cultured in vitro for 18 days. Preantral follicles (~0,2mm) were isolated from the cortex of bovine ovaries and individually cultured in the absence (control medium) or presence of activin-A alone at concentrations of (100ng/mL); FSH alone in increased concentrations - 50ng/mL (from day 0 to day 6), 100ng/mL (from day 7 to day 12), and 200ng/mL (from day 13 to day 18) or in association with activin-A in the same concentrations. After 18 days in vitro, follicles cultured with FSH showed a significant increase in diameter compared to the other treatments. On the other hand, the activin-A alone did not increase follicular diameter compared to control medium. Moreover, when combined with FSH, activin-A inhibited the growth promoted by FSH. At the end of 18 days of culture, all treatments presented antrum formation but without difference between treatments. Ultrastructural analysis confirmed the integrity of follicles cultured in FSH after 18 days. Follicles cultured in the presence of activin-A in association with FSH significantly reduced (P<0.05) levels of mRNA for ActR-IB, ActR-IIB, FSH-R and PCNA. Moreover, in follicles cultured with FSH alone, levels of mRNA for HAS 1 and HAS 2 were significantly higher (P<0.05) that in follicles cultured with activin-A in association with FSH. In addition, the level of mRNA expression for HAS-3 did not differ (P> 0.05) between treatments. In conclusion, activin-A is important for early follicular development (up to 6 days), but reduces the stimulatory effect of FSH on bovine preantral follicles after 18 days of culture in vitro. Our results also indicate that FSH is a key factor for survival and growth of bovine preantral follicles cultured in vitro for a long period (18 days). Moreover, activin-A in combination with FSH reduce the levels of mRNA for activin receptor type IB (ActR-IB), type II-B (ActR-IIB), FSH-R and PCNA after 18 days in vitro. In addition, follicles cultured in medium supplemented with FSH alone levels of mRNA for HAS-1 and HAS-2 were higher than in follicles cultured in medium supplemented by the association of activin-A and FSH. / O objetivo deste estudo foi o de avaliar o efeito do FSH sozinho ou em combinação com a ativina-A na sobrevivência, crescimento e expressão de RNAm para ActR-IB, ActR-IIB, FSH-R, PCNA e HAS1/2/3 em folículos secundários de bovinos cultivados in vitro por 18 dias. Folículos pré-antrais (~0,2mm) foram isolados do córtex de ovários bovinos e cultivados individualmente na ausência- α-MEM+ (grupo controle) ou na presença de ativina-A sozinha na concentração de (100ng/mL); FSH sozinho em concentrações seriadas - 50ng/mL (do dia 0 ao dia 6), 100 ng/mL (do dia 7 ao dia 12), e 200ng/mL (do dia 13 ao dia 18) ou em associação com a ativina-A nas mesmas concentrações. Após 18 dias de cultivo in vitro, folículos cultivados com FSH apresentaram aumento significativo no diâmetro em comparação aos demais tratamentos. Por outro lado, a ativina- A sozinha não induz o crescimento folicular comparado ao grupo controle. Além disso, quando combinada com FSH, a ativina-A inibiu o crescimento folicular promovido pelo FSH. Ao final de 18 dias de cultivo, todos os tratamentos apresentaram a formação de antro embora sem diferenças significativas entre os tratamentos. A análise ultra-estrutural confirmou a integridade dos folículos cultivados em FSH após 18 dias de cultivo. Folículos cultivados na presença de ativina-A associada ao FSH, reduziram significativamente (p <0,05) os níveis de RNAm para ActR-IB, ActR-IIB, FSH-R e PCNA. Além disso, em folículos cultivados com FSH sozinho, os níveis de RNAm para HAS1 e HAS 2 foram significativamente maiores (p<0,05) que em folículos cultivados com ativina-A em associação ao FSH. Ademais, o nível de expressão do RNAm para HAS-3 não diferiu (p>0,05) entre os tratamentos. Em conclusão, a ativina-A é importante para o desenvolvimento folicular inicial (até 6 dias), mas reduz o efeito estimulatório do FSH em folículos pré-antrais bovinos após 18 dias de cultivo in vitro. Nossos resultados apontam que o FSH é um fator chave para a sobrevivência e crescimento de folículos pré-antrais cultivados in vitro por um longo período (18 dias). Além disso, ativina-A em associação ao FSH reduz os níveis de RNAm para o receptor de ativina do tipo IB (ActR-IB), tipo II-B (ActR-IIB), FSH-R e PCNA, após 18 dias in vitro. Em adição, folículos cultivados em meio suplementado com FSH sozinho, apresentaram níveis de expressão de RNAm para HAS-1 e HAS-2 maiores que em folículos cultivados em meio suplementado pela associação de ativina-A e FSH.