El objetivo de este estudio fue determinar los cambios histopatológicos que se presentan en los folículos dentales, en relación a los espacios pericoronarios y la posición de los terceros molares no erupcionados, extraídos de pacientes que acuden al Servicio de Cirugía Oral y Maxilofacial del Centro Médico Naval “Cirujano Mayor Santiago Távara”. Un estudio de tipo Descriptivo correlacional y transversal se llevó a cabo mediante el análisis radiográfico e histológico de 128 muestras foliculares. El análisis estadístico se llevó a cabo mediante la prueba de Chi-cuadrado para evaluar si existe asociación estadística entre las variables. De los participantes, 60.9% eran del sexo femenino y el 39.1% del masculino con edades entre 15 a 49 años. Se encontró un porcentaje importante de cambios histopatológicos (75.7%) en el grupo con medidas de espacios foliculares ≤2.5mm, cuando no debería haberse observado patología, sin embargo no se encontró una asociación estadísticamente significativa entre las variables. Se observó que entre la presencia de cambios histopatológicos y la posición del tercer molar no erupcionado según la clasificación de Pell y Gregory, específicamente la Clase IB, existe una asociación estadísticamente significativa (p=0.031). El análisis radiográfico puede no ser una técnica fiable para la evaluación de patología folicular, ya que esta no se hace visible en etapas tempranas, siendo indispensable en análisis histopatológico para diagnosticar la presencia de estas alteraciones. Se recomienda extraer profilácticamente los terceros molares no erupcionados, como una medida para evitar el desarrollo de altos porcentajes de patología folicular. / The purpose of this study was to determine the histopathological changes that occur in dental follicles in relation to pericoronal spaces and position of unerupted third molars extracted from patients attending the Department of Oral and Maxillofacial Surgery Naval Medical Center "Cirujano Mayor Santiago Tavara". A study correlational and cross-sectional descriptive type was carried out by radiographic and histologic analysis of 128 specimens follicular. Statistical analysis was performed by Chi-square test to assess whether there is statistical association between the variables. Of the participants, 60.9% were female and 39.1% of men aged 15-49 years. A significant percentage of histopathological changes (75.7%) in the group with follicular spaces ≤2.5mm measures was found, when there should have observed pathology, however no statistically significant association between variables was found. Was observed between the presence of histopathological changes and the position of the third molar unerupted according to Pell and Gregory classification, Class IB specifically, there is a statistically significant association (p = 0.031). Radiographic analysis may not be a reliable technique for evaluating follicular disease, since this is not visible in the early stages, be indispensable in histopathological analysis to diagnose the presence of these abnormalities. It is recommended prophylactically extract third molars unerupted, as a measure to prevent the development of high percentages of follicular disease. KEYWORDS: Histopathological changes - third molars - dental follicle - pericoronary space.

Resumo não disponível.

Orientador: Luis Bahamondes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-11-07T17:23:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Juliato_CassiaRaquelTeatin_M.pdf: 280510 bytes, checksum: c78408b05a7314aa913954d99c363d57 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Introdução: Este foi um estudo sobre a utilidade clínica da dosagem de FSH em mulheres que utilizavam o contraceptivo acetato de medroxiprogesterona de depósito (AMPD) no período da transição para menopausa. O objetivo deste estudo foi determinar o perfil sérico das isoformas do hormônio folículo-estimulante (FSH), das inibinas B e pró-aC em mulheres com idade igual ou superior a 45 anos, que estavam em amenorréia secundária ao uso de AMPD. Materiais e Métodos: Foram incluídas no estudo 11 usuárias de AMPD, com idade superior a 45 anos e que estavam em amenorréia há mais de 12 meses (grupo de estudo). Estas mulheres foram pareadas com 11 não usuárias por idade (± 1 ano) e peso (± 2kg). No grupo de estudo, as amostras de sangue foram coletadas imediatamente antes da injeção de AMPD (90 ± 5 dias da última injeção) e no grupo das não usuárias no nono dia do ciclo (± 1 dia). Foram realizadas dosagens séricas de estradiol, FSH, de inibinas B e pró-aC e determinação das isoformas de FSH. Resultados: As usuárias de AMPD tiveram níveis significativamente maiores de FSH e menores de estradiol, inibinas B e pró-aC do que as não usuárias (p<0,01). Não houve diferença na proporção de FSH isolada no pH abaixo de 4,1. A distribuição das isoformas de FSH mostrou similar proporção de UB (unbound), WB (weakly bound) e FB (firmly bound). Foram observadas correlações inversa (r= -0,48, p<0,05) e direta (r= 0,52, p< 0,05) entre idade e as isoformas de FSH UB e FB, respectivamente. Conclusões: As usuárias e não usuárias de AMPD na perimenopausa têm perfil de isoformas de FSH semelhante, apesar de as usuárias apresentarem menores níveis de estradiol. O ambiente hormonal provavelmente não foi determinante na regulação do polimorfismo do FSH e da sua atividade hormonal na transição para a menopausa. A dosagem de FSH por RIA em usuárias de AMPD para diagnóstico de pós-menopausa precisa ser reconsiderada / Abstract: Background: There is a controversy about the possible clinical utility of FSH levels in users of the injectable contraceptive depot medroxyprogesterone acetate (AMPD) who are in amenorrhoea and in the menopausal transition. The objective of this study was to evaluate serum FSH polymorphism and inhibin B levels in long-term users of AMPD who were over 45 years old and in amenorrhoea. Materials and Methods: Eleven users of AMPD that were in amenorrhoea, matched with a group of 11 non-users by age (± 1 year) and weight (± 2kg). All women were 45 years old or older. Blood samples were collected at the day in which a new ampoule was administered (90 ± 5 days from the last ampoule) in the group of users and on day 9th (± 1 day) of the menstrual cycle in the group of non-users. Oestradiol, FSH, Inhibin B, pro-aC levels and the serum profile of FSH isoforms were determined. Results: AMPD users showed significantly higher level of FSH and lower levels of estradiol, inhibin B and Pro-aC than non-users (p<0.01). When the proportion of FSH isolated below pH 4.1 was analysed there were no differences between the two studied groups. The distribution of FSH isoforms showed similar proportion of unbound, weakly bound, and firmly bound FSH isoforms in women of both groups. A significant inverse (r= -0.48, p<0.05) and direct (r= 0.52, p< 0.05) correlation were observed between age and unbound and firmly bound FSH isoforms respectively. Conclusion: Women who were in the menopausal transition users and non-users of AMPD have a similar profile of FSH polymorphism even with the marked hypoestrogenism presented by users. The hormonal milieu probably is unable to regulate FSH polymorphism and hence hormonal activity in the menopausal transition. The determination of FSH by RIA in users of AMPD to determine if a women was or not in the post menopause should be reconsidered. / Mestrado / Tocoginecologia / Mestre em Tocoginecologia

Em programas de transferência de embriões, as perdas embrionárias após a inovulação têm sido relacionadas com uma capacidade reduzida do corpo lúteo (CL) em secretar progesterona (P4), uma vez que este hormônio prepara o endométrio para a implantação e a manutenção da prenhez. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar a eficácia da utilização de dispositivo intravaginal contendo progesterona (CIDR®) por 14 dias em receptoras de embrião, para a indução de folículos persistentes e formação de CLs maiores do que aqueles formados com a utilização de CIDR® por 8 dias. Duzentas e setenta e oito novilhas Bos taurus x Bos indicus foram divididas em 4 grupos. As receptoras do Grupo 1 (G1, n = 70) receberam 2,0 mg de BE + 50 mg de P4 por via intramuscular (IM) no dia da colocação do CIDR® (D0), oito dias depois (D8), o dispositivo foi retirado e foi aplicado um análogo da prostaglandina F2 alfa (PGF2 alfa - 0,53 mg de Cloprostenol Sódico) IM pela manhã. No D9, foi aplicado 0,5 mg de BE IM e o D17 foi o dia da inovulação. Os animais do Grupo 2 (G2, n = 71) receberam 2,0 mg de BE + 50 mg de P4 no dia da colocação do CIDR® (D0), todavia, esses animais receberam 2 aplicações de PGF2 alfa, uma no início do tratamento e outra 5 dias depois. Nestes animais, o CIDR® foi mantido por 14 dias; assim, no D15 foi aplicado 0,5 mg de BE e o dia da inovulação, foi o D23. No Grupo 3 (G3, n = 67), o tratamento foi semelhante ao do G2, no entanto a PGF2 alfa foi aplicada uma única vez, 5 dias após o início do tratamento. No Grupo 4 (G4, n = 70), o tratamento foi semelhante ao do G2, tendo os animais recebido 2 aplicações de PGF2 alfa, uma no dia da colocação do CIDR® e outra no dia da retirada. A avaliação ultrassonográfica dos ovários foi realizada um dia após a retirada do CIDR® e no dia da inovulação, quando foram colhidas amostras de sangue para dosagem de P4. O diâmetro médio do folículo dominante (FD) foi maior nos grupos G2, G3 e G4 quando comparado com o grupo G1. A área do CL, a concentração plasmática de P4 e a taxa de aproveitamento foram maiores nos grupos G2 e G3 que no grupo G1, enquanto o grupo G4 não diferiu estatisticamente dos demais. A taxa de concepção nos grupos G2 e G3 foi inferior àquela do grupo G1, mas não diferiu entre o grupo G4 e os demais. A taxa de prenhez não apresentou diferença estatística entre os grupos. Esses resultados sugerem que a utilização de CIDR® por tempo prolongado, quando associada à aplicação de PGF2 alfa no início do tratamento, é eficaz na formação de folículos persistentes, que resultam em CLs aumentados e com maior capacidade de secretar P4 . No entanto, ao contrário do esperado, a taxa de concepção foi reduzida nos grupos em que o tratamento visava a formação de folículos persistentes. / Embryo losses in cattle embryo transfer programs have been related to a corpus luteum (CL) inability to secrete progesterone (P4), necessary to endometrial preparation for embryo implantation and pregnancy maintenance. Thus the objective of this experiment was to evaluate the efficacy of a treatment with progesterone-releasing intravaginal devices (CIDR®) for a period of 14 days in order to induce the formation of a persistent follicle and a CL of larger diameter than the ones produced during the conventional 8 days CIDR® treatment. Two hundred seventy-eight cross-bred Bos taurus x Bos indicus heifers were randomly allocated in four groups. Heifers in Group 1 (G1, n = 70) received 2.0 mg estradiol benzoate (EB) + 50 mg of P4 at the moment of CIDR® insertion (D0), a 0.53 mg injection of cloprostenol (PGF2 alfa analogous) at the time of CIDR® removal (D8) and 0.5 mg EB on D9. On D17 animals received a frozen/thawed embryo by direct transfer. Heifers in Group 2 (G2, n = 71) received a CIDR® device combined with 2.0 mg of EB + 50 mg of P4 (D0). Animals of this group received 2 injections of PGF2 alfa, one on D0 and the other on D5. The CIDR® was removed on D14. A 0.5 mg injection of EB was administered on D15. The treatment in Group 3 (G3, n = 67) was similar to G2, except by the fact that a single injection of PGF2 alfa was administered on D5. Treatment performed on animals of Group 4 was similar to the one performed on G2. However, animals of this group received two injections of PGF2 alfa, one at the time of CIDR® insertion and the other at the moment of it?s removal. Ovarian ultrasonography was performed on the day after CIDR® removal and at the day of embryo transfer. Blood samples for P4 analysis were also collected on the day of embryo transfer. Mean diameter of the dominant follicle was larger in heifers in G2, G3 and G4 when compared to G1. The CL area, plasma progesterone concentrations and recipient selection rate was greater in G2 and G3 than in G1, but G4 was not different of the other groups. Conception rates were lower in G2 and G3 when compared to G1. No differences between groups were found regarding to the pregnancy rates. These results suggest that a CIDR® long-term treatment, when associated with PGF2 alfa in the beggining of the treatment is efficient to stimulate the formation of a persistent follicle, resulting in a larger CL which provides higher P4 concentration. However, the induction of a persistent follicle had a negative effect on the conception rates which was not expected.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da administração de hCG na indução de ovulação e estudo da dinâmica folicular no protocolo de nove dias de sincronização de estros em ovelhas cíclicas da raça Santa Inês. O experimento foi dividido em duas etapas consecutivas. Na primeira etapa, em dia aleatório do ciclo estral (D0), 9 ovelhas receberam um novo dispositivo intravaginal de progesterona (Primer-PR®, Tecnopec, Brasil). Nove dias após (D9) o dispositivo foi retirado, administraram-se 30 µg de d-cloprostenol (Prolise®, Syntex, Argentina) e 250 UI de eCG (Folligon®, Intervet, Holanda). A partir deste momento, as ovelhas foram alocadas, aleatoriamente, a um de dois tratamentos: Grupo controle (GC) e Grupo hCG (GhCG). No GC, as ovelhas não receberam nenhum tipo de indutor de ovulação. No GhCG, 24 horas após a retirada do dispositivo, foram administrados, via i.m.,. 500 UI de hCG (Vetecor®,HertapeCalier, Espanha). Após um intervalo de 30 dias foi realizada uma réplica alternada do experimento (etapa 2), ou seja, as ovelhas que na primeira etapa estavam no grupo controle foram alocadas no grupo hCG e vice-versa. O delineamento estatístico utilizado foi o inteiramente casualizado com medidas repetidas no tempo. Houve regressão de todos os folículos presentes no início do tratamento e emergência da onda ovulatória, em média, 3,54±1,5 e 7.88±1.05 dias da colocação do dispositivo, respectivamente. Não houve diferença entre os grupos quanto ao diâmetro do primeiro folículo pré-ovulatório (GC: 5,78±0,30 mm vs. GhCG: 5,36±0,69 mm; P=0,09) e segundo folículo pré-ovulatório (GC: 5,41±0,85 vs. GhCG: 4,71±0,50; P=0,08) em ovelhas com ovulações duplas. Observou-se maior proporção (P=0.009) de comportamento de estro nos animais do GC (9/9) quando comparado ao GhCG (3/8). Não houve diferença significativa entre os grupos no intervalo médio entre retirada do dispositivo e início (47.4±15.0 no GC e 32.0±0.0 no GhCG, P=0.11) ou na duração do estro (36.22±18.57 h no GC e 38.6±30.6 h no GhCG, P=0.72). A concentração de progesterona sérica entre os dias D0 e D8 não diferiu estatisticamente (P=0.49) entre os grupos (CG:11.06±4.82 ng/ml vs GhCG: 9.74±4.37 ng/ml). As ovelhas do grupo hCG apresentaram menor intervalo entre retirada do dispositivo e ovulação (GC: 79,9±15,4 h vs. GhCG: 54,7±4,9 h; P=0,001). Além disso, os animais que receberam hCG tiveram as ovulações mais sincronizadas. Conclui-se que a administração de hCG antecipa e promove ovulações mais sincronizadas, o que pode ser importante para aumentar a eficiência da inseminação em tempo fixo. / The aim of this study was to evaluate the effect of hCG administration for ovulation induction and assessment of follicular dynamics on a nine day estrus synchronization protocol in Santa Ines cycling ewes. The experiment was conducted in two consecutive steps. In a random oestrus cycle day (D0), 9 ewes received a new intravaginal progesterone device (Primer-PR®, Tecnopec, Brasil). Nine days after (D9), 30 µg of d-cloprostenol (Prolise®, Syntex, Argentina ) and 250 IU of eCG (Folligon®, Intervet, Holanda) were administered and the progesterone device was removed. After this procedure, the ewes were randomly assigned to one of two treatments: Control Group (CG) and hCG Group (hCGG). In CG, ewes did not receive any ovulation inductor. In hCGG, 500 IU were administered (Vetecor®,HertapeCalier-Spain), intramuscular, 24 hours after device removal. After a 30 day interval, a replicate of the experiment was performed (phase 2), in which control group animals were allocated into hCG group and vice versa. In this study a randomized experimental design was used with repeated measures over time. In the present study it was observed regression of all follicles present on the day of device insertion and follicular wave emergence occurred averagely 3,54±1,5 and 7.88±1.05 days after device insertion, respectively. There was no difference between groups regarding the first preovulatory follicle diameter (CG: 5.78±0.30 mm vs. hCGG: 5.36±0.69 mm; p=0.09) and the second preovulatory follicle (CG: 5.41±0.85 vs. hCGG: 4.71±0>0.50; P=0.08) for ewes with double ovulations. CG animals showed a higher proportion of estrus behavior (P=0.009) than hCGG. There was no difference between groups regarding average interval from device removal and estrus onset (CG:47.4±15.0 and hCGG: 32.0±0.0, P=0.11) or on estrus duration (36.22±18.57 h on CG and 38.6±30.6 h on hCGG, P=0.72). Serum progesterone concentration between D0 and D8 did not differ (P=0.49) between groups (CG: 11.06±4.82 ng/ml and hCGG: 9.74±4.37 ng/ml). hCG group ewes had smaller interval between device removal and ovulation (CG: 79.9±15.4 h vs. hCGG: 54.7±4.9 h; P=0.001). Animals given hCG had more synchronized ovulations. It can be concluded that hCG administration hastens and improves ovulatory synchronization, which could be important to increase fixed time insemination efficiency.

O hormônio folículo-estimulante (FSH) produz um efeito dual sobre o potencial de membrana das células de Sertoli, com uma fase inicial rápida, que compreende uma hiperpolarização, por um período de segundos e uma fase de despolarização, que ocorre mais lentamente, por um período de minutos. A fase de despolarização envolve um mecanismo relacionado à entrada de cálcio estimulada pelo FSH. O Isoproterenol, um agonista de receptores β-adrenérgicos, induz uma hiperpolarização imediata e prolongada na membrana de células de Sertoli de ratos imaturos. Este efeito é provavelmente resultante da queda de [ATP]i a qual libera a inibição exercida pelo nucleotídeo sobre o canal de K+ATP. Dessa forma, objetivou-se estudar a ação do Isoproterenol sobre o potencial de membrana das células de Sertoli para melhor avaliar o componente hiperpolarizante produzido por FSH nas células de Sertoli, além de estudar a captação de Ca2+ estimulada pelo FSH e pelo isoproterenol. O potencial de membrana foi registrado utilizando túbulos seminíferos isolados de testículos de ratos Wistar machos de 15 dias de idade. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares preenchidos com KCl 3mmol/L acoplados a um eletrômetro. Foi realizada a aplicação tópica isolada de FSH (4mU/mL) e Isoproterenol (2μM). Depois, em experimentos individuais, foram aplicados topicamente, FSH e isoproterenol, 5 minutos após a aplicação tópica da Tolbutamida (10μM) e Glibenclamida (10μM), sulfonilureias de ação hipoglicemiante, que exercem efeito de fechamento dos canais de K+ATP. A Tolbutamida (10μM), ainda, foi perfundida 15 minutos antes da aplicação do Isoproterenol, a fim de testar se esta sulfoniluréia impediria de forma mais significativa a ação deste. Na técnica de captação de Ca2+, utilizou-se FSH e isoproterenol com toxina pertussis (PTX), bloqueador da subunidade Gi da proteína G para avaliar o seu envolvimento na captação de Ca2+ nas células de Sertoli de ratos imaturos. Utilizou-se a toxina colérica, estimulador da proteína Gs, para avaliar o envolvimento do AMPc na captação de Ca2+ nas células de Sertoli de ratos imaturos. Fez-se uso de SQ22536, inibidor da enzima adenilato ciclase, para avaliar o envolvimento dessa enzima na ação estimulante do FSH nas células de Sertoli de ratos imaturos. Os resultados foram dados como média ± SEM. Os dados da variação do potencial de membrana foram analisados pelo teste ANOVA para medidas repetidas com o pós-teste de Bonferroni. O FSH teve sua hiperpolarização inibida quando foi aplicado tolbutamida (10μM) anteriormente. O SQ22536 também aboliu a hiperpolarização causada pelo FSH. O Isoproterenol, quando aplicado isoladamente produziu uma resposta hiperpolarizante sobre o potencial de membrana, alterando de – 32,4mV ± 1,32 mV para -40,0 ± 0,78 mv, aos 60 segundos após a sua aplicação (*p<0,001) (n=6 células de Sertoli). A aplicação tópica de Tolbutamida (10 μM) bloqueou a ação do Isoproterenol (2μM), causando uma despolarização de –41,0± 0,47mV variou até -39,0 ± 2,02mV, aos 120 segundos após a aplicação do Isoproterenol (p>0,05) (n=6 células de Sertoli). A perfusão com Tolbutamida foi mais eficaz no bloqueio da resposta beta-adrenérgica, causando uma despolarização de -41,6 ±1,21 mV para -35,4 ± 0,98 mV, aos 120 segundos após a aplicação tópica do Isoproterenol (p>0,05) (n=9 células de Sertoli). A aplicação tópica de Glibenclamida (10μM), a qual é um inibidor do canal de k +ATP, bloqueou a ação do Isoproterenol (2μM), causando despolarização, demonstrando que a hiperpolarização do isoproterenol está relacionada com a abertura desses canais. A tolbutamida (10μM), quando aplicada topicamente, impediu a fase de hiperpolarização característica causada pelo FSH (4mU/mL), causando despolarização do potencial de membrana das células de Sertoli de ratos imaturos. O Isoproterenol apresentou uma resposta hiperpolarizante rápida sobre o potencial de membrana, causada, provavelmente, por uma abertura dos canais de K+ATP na membrana das células de Sertoli de testículos de ratos imaturos. PTX quando aplicada topicamente e anteriormente à aplicação de isoproterenol não impediu a hiperpolarização característica causada por isoproterenol. A ação hiperpolarizante de isoproterenol independe de proteína Gi. PTX não impede a captação de 45Ca2+ estimulada pelo isoproterenol. A toxina colérica, que estimula proteína Gs, não estimula a captação de 45Ca2+ nas células de Sertoli de ratos imaturos. / Follicle-stimulating hormone (FSH) produces a dual effect on the membrane potential of Sertoli cells, with an initial rapid phase, which comprises a hyperpolarization for a period of seconds and a depolarization phase, wich occurs more slowly, within minutes. The depolarization phase involves calcium entry stimulated by FSH. Isoproterenol, an agonist of β-adrenergic receptors, induces an immediate and prolonged hyperpolarization on the membrane of Sertoli cells from immature rats. The aim of this work is to study the involvement of K+ATP channels in the hiperpolarization effect of isoproterenol on the membrane of Sertoli cells. This work also aimed to study the action of Isoproterenol on the membrane potential of Sertoli cells to better understanding the hyperpolarizing component produced by FSH in Sertoli cells, in addition to study the Ca2+ uptake stimulated by FSH and by isoproterenol. Membrane potential was recorded using isolated seminiferous tubules of testes of 15 days-old rats. The record of intracellular Sertoli cell was performed using microcapillary filled with KCl3 mmol/L coupled to an electrometer. We performed a single topical application of FSH(4mU/mL) and Isoproterenol (2μM). Then, inindividual experiments were applied topically, FSH and isoproterenol, 5 minutes after topical application of Tolbutamide (10μM) and glibenclamide(10μM), sulfonylurea a hypoglycemicaction, exercising effect closing of K+ channels ATP. The Tolbutamide (10μM) also was infused 15 minutes before application of Isoproterenol in order totest whether this would prevents ulfonylurea most significantly to the action of isoproterenol. In the technique of 45Ca2+ uptake, we used FSH and isoproterenol with pertussis toxin (PTX), blocking the G protein subunit Gi to evaluate its involvementon Ca2+ uptake in Sertoli cells from immature rats. We used the cholera toxin, a stimulator of Gs protein, to evaluate the involvement of AMPc on Ca2+ uptake in Sertoli cells from immature rats. SQ22536, an inhibitor of the enzyme adenylate cyclase, was used to evaluate the involvement this enzyme in the stimulatory action of FSH in Sertoli cells from immature rats. The results were given as mean ± SEM. The data of the change in membrane potential were analyzed by ANOVA for repeated measures with Bonferroni post-test. The hyperpolarization produced by FSH was inhibited when tolbutamide was applied (10μM). The SQ22536 also abolished the hyperpolarization caused by FSH. The Isoproterenol when used alone produced a hyperpolarizing response on the membrane potential , changing from -32.4mV±1.32 mV to -40.0±0.78 mV at 60 seconds after its application (*p<0.001) (n=6Sertoli cells). Topical application of Tolbutamide (10μM) blocked the action of Isoproterenol (2μM), causing a depolarization of -41.0±0.47 mV ranged up to-39.0± 2.02 mV at 120 seconds after application of Isoproterenol (p>0.05) (n=6Sertoli cells). The Tolbutamide infusion was more effective inblocking beta-adrenergic response, causing a depolarization of -41,6 ±1,21 mV to -35,4 ± 0,98 mV at 120seconds after the topical application of Isoproterenol (p>0.05) (n=9Sertoli cells). Isoproterenol produces a rapid hyperpolarization on membrane potential of Sertoli cells. This effect was blocked by tolbutamide, indicating that the activation of beta-adrenergic receptors involves opening of K+ATP channels in the membrane of Sertoli cells from immature rat testes. PTX,when applied topically prior to application of isoproterenol did not prevent the characteristic hyperpolarization caused by isoproterenol. The hyperpolarizing action of isoproterenol is independent of Gi protein. PTX does not prevent the uptake of 45Ca2+ stimulated by isoproterenol. The cholera toxin, which stimulates Gs protein, does not stimulate 45Ca2+ uptake in Sertoli cells from immature rats.

Em programas de transferência de embriões, as perdas embrionárias após a inovulação têm sido relacionadas com uma capacidade reduzida do corpo lúteo (CL) em secretar progesterona (P4), uma vez que este hormônio prepara o endométrio para a implantação e a manutenção da prenhez. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar a eficácia da utilização de dispositivo intravaginal contendo progesterona (CIDR®) por 14 dias em receptoras de embrião, para a indução de folículos persistentes e formação de CLs maiores do que aqueles formados com a utilização de CIDR® por 8 dias. Duzentas e setenta e oito novilhas Bos taurus x Bos indicus foram divididas em 4 grupos. As receptoras do Grupo 1 (G1, n = 70) receberam 2,0 mg de BE + 50 mg de P4 por via intramuscular (IM) no dia da colocação do CIDR® (D0), oito dias depois (D8), o dispositivo foi retirado e foi aplicado um análogo da prostaglandina F2 alfa (PGF2 alfa - 0,53 mg de Cloprostenol Sódico) IM pela manhã. No D9, foi aplicado 0,5 mg de BE IM e o D17 foi o dia da inovulação. Os animais do Grupo 2 (G2, n = 71) receberam 2,0 mg de BE + 50 mg de P4 no dia da colocação do CIDR® (D0), todavia, esses animais receberam 2 aplicações de PGF2 alfa, uma no início do tratamento e outra 5 dias depois. Nestes animais, o CIDR® foi mantido por 14 dias; assim, no D15 foi aplicado 0,5 mg de BE e o dia da inovulação, foi o D23. No Grupo 3 (G3, n = 67), o tratamento foi semelhante ao do G2, no entanto a PGF2 alfa foi aplicada uma única vez, 5 dias após o início do tratamento. No Grupo 4 (G4, n = 70), o tratamento foi semelhante ao do G2, tendo os animais recebido 2 aplicações de PGF2 alfa, uma no dia da colocação do CIDR® e outra no dia da retirada. A avaliação ultrassonográfica dos ovários foi realizada um dia após a retirada do CIDR® e no dia da inovulação, quando foram colhidas amostras de sangue para dosagem de P4. O diâmetro médio do folículo dominante (FD) foi maior nos grupos G2, G3 e G4 quando comparado com o grupo G1. A área do CL, a concentração plasmática de P4 e a taxa de aproveitamento foram maiores nos grupos G2 e G3 que no grupo G1, enquanto o grupo G4 não diferiu estatisticamente dos demais. A taxa de concepção nos grupos G2 e G3 foi inferior àquela do grupo G1, mas não diferiu entre o grupo G4 e os demais. A taxa de prenhez não apresentou diferença estatística entre os grupos. Esses resultados sugerem que a utilização de CIDR® por tempo prolongado, quando associada à aplicação de PGF2 alfa no início do tratamento, é eficaz na formação de folículos persistentes, que resultam em CLs aumentados e com maior capacidade de secretar P4 . No entanto, ao contrário do esperado, a taxa de concepção foi reduzida nos grupos em que o tratamento visava a formação de folículos persistentes. / Embryo losses in cattle embryo transfer programs have been related to a corpus luteum (CL) inability to secrete progesterone (P4), necessary to endometrial preparation for embryo implantation and pregnancy maintenance. Thus the objective of this experiment was to evaluate the efficacy of a treatment with progesterone-releasing intravaginal devices (CIDR®) for a period of 14 days in order to induce the formation of a persistent follicle and a CL of larger diameter than the ones produced during the conventional 8 days CIDR® treatment. Two hundred seventy-eight cross-bred Bos taurus x Bos indicus heifers were randomly allocated in four groups. Heifers in Group 1 (G1, n = 70) received 2.0 mg estradiol benzoate (EB) + 50 mg of P4 at the moment of CIDR® insertion (D0), a 0.53 mg injection of cloprostenol (PGF2 alfa analogous) at the time of CIDR® removal (D8) and 0.5 mg EB on D9. On D17 animals received a frozen/thawed embryo by direct transfer. Heifers in Group 2 (G2, n = 71) received a CIDR® device combined with 2.0 mg of EB + 50 mg of P4 (D0). Animals of this group received 2 injections of PGF2 alfa, one on D0 and the other on D5. The CIDR® was removed on D14. A 0.5 mg injection of EB was administered on D15. The treatment in Group 3 (G3, n = 67) was similar to G2, except by the fact that a single injection of PGF2 alfa was administered on D5. Treatment performed on animals of Group 4 was similar to the one performed on G2. However, animals of this group received two injections of PGF2 alfa, one at the time of CIDR® insertion and the other at the moment of it?s removal. Ovarian ultrasonography was performed on the day after CIDR® removal and at the day of embryo transfer. Blood samples for P4 analysis were also collected on the day of embryo transfer. Mean diameter of the dominant follicle was larger in heifers in G2, G3 and G4 when compared to G1. The CL area, plasma progesterone concentrations and recipient selection rate was greater in G2 and G3 than in G1, but G4 was not different of the other groups. Conception rates were lower in G2 and G3 when compared to G1. No differences between groups were found regarding to the pregnancy rates. These results suggest that a CIDR® long-term treatment, when associated with PGF2 alfa in the beggining of the treatment is efficient to stimulate the formation of a persistent follicle, resulting in a larger CL which provides higher P4 concentration. However, the induction of a persistent follicle had a negative effect on the conception rates which was not expected.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da administração de hCG na indução de ovulação e estudo da dinâmica folicular no protocolo de nove dias de sincronização de estros em ovelhas cíclicas da raça Santa Inês. O experimento foi dividido em duas etapas consecutivas. Na primeira etapa, em dia aleatório do ciclo estral (D0), 9 ovelhas receberam um novo dispositivo intravaginal de progesterona (Primer-PR®, Tecnopec, Brasil). Nove dias após (D9) o dispositivo foi retirado, administraram-se 30 µg de d-cloprostenol (Prolise®, Syntex, Argentina) e 250 UI de eCG (Folligon®, Intervet, Holanda). A partir deste momento, as ovelhas foram alocadas, aleatoriamente, a um de dois tratamentos: Grupo controle (GC) e Grupo hCG (GhCG). No GC, as ovelhas não receberam nenhum tipo de indutor de ovulação. No GhCG, 24 horas após a retirada do dispositivo, foram administrados, via i.m.,. 500 UI de hCG (Vetecor®,HertapeCalier, Espanha). Após um intervalo de 30 dias foi realizada uma réplica alternada do experimento (etapa 2), ou seja, as ovelhas que na primeira etapa estavam no grupo controle foram alocadas no grupo hCG e vice-versa. O delineamento estatístico utilizado foi o inteiramente casualizado com medidas repetidas no tempo. Houve regressão de todos os folículos presentes no início do tratamento e emergência da onda ovulatória, em média, 3,54±1,5 e 7.88±1.05 dias da colocação do dispositivo, respectivamente. Não houve diferença entre os grupos quanto ao diâmetro do primeiro folículo pré-ovulatório (GC: 5,78±0,30 mm vs. GhCG: 5,36±0,69 mm; P=0,09) e segundo folículo pré-ovulatório (GC: 5,41±0,85 vs. GhCG: 4,71±0,50; P=0,08) em ovelhas com ovulações duplas. Observou-se maior proporção (P=0.009) de comportamento de estro nos animais do GC (9/9) quando comparado ao GhCG (3/8). Não houve diferença significativa entre os grupos no intervalo médio entre retirada do dispositivo e início (47.4±15.0 no GC e 32.0±0.0 no GhCG, P=0.11) ou na duração do estro (36.22±18.57 h no GC e 38.6±30.6 h no GhCG, P=0.72). A concentração de progesterona sérica entre os dias D0 e D8 não diferiu estatisticamente (P=0.49) entre os grupos (CG:11.06±4.82 ng/ml vs GhCG: 9.74±4.37 ng/ml). As ovelhas do grupo hCG apresentaram menor intervalo entre retirada do dispositivo e ovulação (GC: 79,9±15,4 h vs. GhCG: 54,7±4,9 h; P=0,001). Além disso, os animais que receberam hCG tiveram as ovulações mais sincronizadas. Conclui-se que a administração de hCG antecipa e promove ovulações mais sincronizadas, o que pode ser importante para aumentar a eficiência da inseminação em tempo fixo. / The aim of this study was to evaluate the effect of hCG administration for ovulation induction and assessment of follicular dynamics on a nine day estrus synchronization protocol in Santa Ines cycling ewes. The experiment was conducted in two consecutive steps. In a random oestrus cycle day (D0), 9 ewes received a new intravaginal progesterone device (Primer-PR®, Tecnopec, Brasil). Nine days after (D9), 30 µg of d-cloprostenol (Prolise®, Syntex, Argentina ) and 250 IU of eCG (Folligon®, Intervet, Holanda) were administered and the progesterone device was removed. After this procedure, the ewes were randomly assigned to one of two treatments: Control Group (CG) and hCG Group (hCGG). In CG, ewes did not receive any ovulation inductor. In hCGG, 500 IU were administered (Vetecor®,HertapeCalier-Spain), intramuscular, 24 hours after device removal. After a 30 day interval, a replicate of the experiment was performed (phase 2), in which control group animals were allocated into hCG group and vice versa. In this study a randomized experimental design was used with repeated measures over time. In the present study it was observed regression of all follicles present on the day of device insertion and follicular wave emergence occurred averagely 3,54±1,5 and 7.88±1.05 days after device insertion, respectively. There was no difference between groups regarding the first preovulatory follicle diameter (CG: 5.78±0.30 mm vs. hCGG: 5.36±0.69 mm; p=0.09) and the second preovulatory follicle (CG: 5.41±0.85 vs. hCGG: 4.71±0>0.50; P=0.08) for ewes with double ovulations. CG animals showed a higher proportion of estrus behavior (P=0.009) than hCGG. There was no difference between groups regarding average interval from device removal and estrus onset (CG:47.4±15.0 and hCGG: 32.0±0.0, P=0.11) or on estrus duration (36.22±18.57 h on CG and 38.6±30.6 h on hCGG, P=0.72). Serum progesterone concentration between D0 and D8 did not differ (P=0.49) between groups (CG: 11.06±4.82 ng/ml and hCGG: 9.74±4.37 ng/ml). hCG group ewes had smaller interval between device removal and ovulation (CG: 79.9±15.4 h vs. hCGG: 54.7±4.9 h; P=0.001). Animals given hCG had more synchronized ovulations. It can be concluded that hCG administration hastens and improves ovulatory synchronization, which could be important to increase fixed time insemination efficiency.

Objetivo: avaliar o efeito da supressão do FSH na fase lútea tardia do ciclo menstrual com anticoncepcional oral (ACO) sobre os níveis do hormônio anti-mülleriano (HAM) e sobre a coorte folicular ovariana (principalmente seu número, diâmetros e homogeneidade) Delineamento: estudo clínico prospectivo. Metodologia: foram incluídas no estudo 20 mulheres normoovulatórias, selecionadas no Ambulatório do Serviço de Ginecologia e Obstetrícia do Hospital de Clínicas de Porto Alegre, que tinham como causa de infertilidade obstrução tubária bilateral ou infertilidade de causa masculina. No terceiro dia de um ciclo menstrual espontâneo foram realizadas ecografia transvaginal e coleta de sangue para as dosagens hormonais. A partir do vigésimo dia desde ciclo menstrual as pacientes ingeriram diariamente um ACO contendo 0.03 mg de etinil estradiol e 0,15 mg de desogestrel. No terceiro dia do ciclo seguinte, as medidas foram repetidas.Resultados: a média de idade das pacientes foi de 29 anos (23-35). Após o uso do ACO os níveis de FSH e estradiol foram significativamente reduzidos (P<0,001). O número de folículos antrais medidos nos dois momentos não diferiu (15,8 + 4,7 antes e 16,6 + 3,6 após o uso do ACO), embora após o uso do ACO os folículos apresentaram diâmetros significativamente menores (médias de 4,4 + 1,7 antes e de 3,5 + 1,2 após, P<0,001). Os níveis do HAM foram significativamente reduzidos após o bloqueio hipofisário, com respectivas medianas (intervalo interquartil) de 3,02 ng/mL (1,21 – 6,39) antes do uso do ACO e 2,22 ng/mL (0,9 – 3,11) após, P=0,04. Não encontramos correlação entre os níveis de HAM e de FSH. Conclusão: o uso de ACO na fase lútea tardia foi eficaz em inibir a secreção hipofisária de FSH, o que levou a uma coorte folicular mais homogênea, com folículos de menordiâmetro. A diminuição dos níveis do HAM verificados após o uso do ACO não tiveram correlação com a inibição do FSH. / Objective: evaluate the effect of FSH suppression in the late luteal phase of menstrual cycle with oral contraceptives pills (OCP) on anti-mullerian factor (AMH) levels and on the follicular cohort (number, diameter and homogeneity of measurable antral follicles). Design: a prospective trial Materials and methods: We included in our trial 20 normovulatory infertile women from the ambulatory of the Obstetrics and Gynecology Department of the Hospital de Clínicas de Porto Alegre, with tubal obstruction or male infertility. On the third day of a spontaneous menstrual cycle, they were submitted to a transvaginal ultrasound examination and blood sample collect. All antral follicles greater than 2 mm were noticed. From the 20th day of this menstrual cycle, the patients took daily OCP, containing 0.03 mg of ethinil-estradiol plus 0,15 mg of desogestrel. On the third day of the following cycle, the measurements were repeated. Results: The patients’ mean age was 29 years (23 to 35). After OCP use the levels of FSH and estradiol were significantly reduced (P<0.001). The number of antral follicles measured at both moments did not differ (15.8 + 4.7 before and 16.6 + 3.6 after, P=0.44), although after OCP the follicles presented significant lower diameters (means of 4.4 + 1.7 mm before versus 3.5 + 1.2 mm after, P<0.001). The levels of AMH were significantly reduced after pituitary down-regulation, with medians (interquartille range) of 3.02 ng/mL (1.21 – 6.39) before OCP use and 2.22 ng/mL (0.9 – 3.11) after it, P=0.04. We found no correlation between AMH and FSH levels. Conclusions: The short administration of OCP in late luteal phase was able to inhibit pituitary secretion of FSH during the inter-cycle transition, leading to a more homogeneous follicular cohort. The decrease in AMH levels verified after OCP administration had no correlation with the FSH decrease.

O hormônio folículo-estimulante (FSH) produz um efeito dual sobre o potencial de membrana das células de Sertoli, com uma fase inicial rápida, que compreende uma hiperpolarização, por um período de segundos e uma fase de despolarização, que ocorre mais lentamente, por um período de minutos. A fase de despolarização envolve um mecanismo relacionado à entrada de cálcio estimulada pelo FSH. O Isoproterenol, um agonista de receptores β-adrenérgicos, induz uma hiperpolarização imediata e prolongada na membrana de células de Sertoli de ratos imaturos. Este efeito é provavelmente resultante da queda de [ATP]i a qual libera a inibição exercida pelo nucleotídeo sobre o canal de K+ATP. Dessa forma, objetivou-se estudar a ação do Isoproterenol sobre o potencial de membrana das células de Sertoli para melhor avaliar o componente hiperpolarizante produzido por FSH nas células de Sertoli, além de estudar a captação de Ca2+ estimulada pelo FSH e pelo isoproterenol. O potencial de membrana foi registrado utilizando túbulos seminíferos isolados de testículos de ratos Wistar machos de 15 dias de idade. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares preenchidos com KCl 3mmol/L acoplados a um eletrômetro. Foi realizada a aplicação tópica isolada de FSH (4mU/mL) e Isoproterenol (2μM). Depois, em experimentos individuais, foram aplicados topicamente, FSH e isoproterenol, 5 minutos após a aplicação tópica da Tolbutamida (10μM) e Glibenclamida (10μM), sulfonilureias de ação hipoglicemiante, que exercem efeito de fechamento dos canais de K+ATP. A Tolbutamida (10μM), ainda, foi perfundida 15 minutos antes da aplicação do Isoproterenol, a fim de testar se esta sulfoniluréia impediria de forma mais significativa a ação deste. Na técnica de captação de Ca2+, utilizou-se FSH e isoproterenol com toxina pertussis (PTX), bloqueador da subunidade Gi da proteína G para avaliar o seu envolvimento na captação de Ca2+ nas células de Sertoli de ratos imaturos. Utilizou-se a toxina colérica, estimulador da proteína Gs, para avaliar o envolvimento do AMPc na captação de Ca2+ nas células de Sertoli de ratos imaturos. Fez-se uso de SQ22536, inibidor da enzima adenilato ciclase, para avaliar o envolvimento dessa enzima na ação estimulante do FSH nas células de Sertoli de ratos imaturos. Os resultados foram dados como média ± SEM. Os dados da variação do potencial de membrana foram analisados pelo teste ANOVA para medidas repetidas com o pós-teste de Bonferroni. O FSH teve sua hiperpolarização inibida quando foi aplicado tolbutamida (10μM) anteriormente. O SQ22536 também aboliu a hiperpolarização causada pelo FSH. O Isoproterenol, quando aplicado isoladamente produziu uma resposta hiperpolarizante sobre o potencial de membrana, alterando de – 32,4mV ± 1,32 mV para -40,0 ± 0,78 mv, aos 60 segundos após a sua aplicação (*p<0,001) (n=6 células de Sertoli). A aplicação tópica de Tolbutamida (10 μM) bloqueou a ação do Isoproterenol (2μM), causando uma despolarização de –41,0± 0,47mV variou até -39,0 ± 2,02mV, aos 120 segundos após a aplicação do Isoproterenol (p>0,05) (n=6 células de Sertoli). A perfusão com Tolbutamida foi mais eficaz no bloqueio da resposta beta-adrenérgica, causando uma despolarização de -41,6 ±1,21 mV para -35,4 ± 0,98 mV, aos 120 segundos após a aplicação tópica do Isoproterenol (p>0,05) (n=9 células de Sertoli). A aplicação tópica de Glibenclamida (10μM), a qual é um inibidor do canal de k +ATP, bloqueou a ação do Isoproterenol (2μM), causando despolarização, demonstrando que a hiperpolarização do isoproterenol está relacionada com a abertura desses canais. A tolbutamida (10μM), quando aplicada topicamente, impediu a fase de hiperpolarização característica causada pelo FSH (4mU/mL), causando despolarização do potencial de membrana das células de Sertoli de ratos imaturos. O Isoproterenol apresentou uma resposta hiperpolarizante rápida sobre o potencial de membrana, causada, provavelmente, por uma abertura dos canais de K+ATP na membrana das células de Sertoli de testículos de ratos imaturos. PTX quando aplicada topicamente e anteriormente à aplicação de isoproterenol não impediu a hiperpolarização característica causada por isoproterenol. A ação hiperpolarizante de isoproterenol independe de proteína Gi. PTX não impede a captação de 45Ca2+ estimulada pelo isoproterenol. A toxina colérica, que estimula proteína Gs, não estimula a captação de 45Ca2+ nas células de Sertoli de ratos imaturos. / Follicle-stimulating hormone (FSH) produces a dual effect on the membrane potential of Sertoli cells, with an initial rapid phase, which comprises a hyperpolarization for a period of seconds and a depolarization phase, wich occurs more slowly, within minutes. The depolarization phase involves calcium entry stimulated by FSH. Isoproterenol, an agonist of β-adrenergic receptors, induces an immediate and prolonged hyperpolarization on the membrane of Sertoli cells from immature rats. The aim of this work is to study the involvement of K+ATP channels in the hiperpolarization effect of isoproterenol on the membrane of Sertoli cells. This work also aimed to study the action of Isoproterenol on the membrane potential of Sertoli cells to better understanding the hyperpolarizing component produced by FSH in Sertoli cells, in addition to study the Ca2+ uptake stimulated by FSH and by isoproterenol. Membrane potential was recorded using isolated seminiferous tubules of testes of 15 days-old rats. The record of intracellular Sertoli cell was performed using microcapillary filled with KCl3 mmol/L coupled to an electrometer. We performed a single topical application of FSH(4mU/mL) and Isoproterenol (2μM). Then, inindividual experiments were applied topically, FSH and isoproterenol, 5 minutes after topical application of Tolbutamide (10μM) and glibenclamide(10μM), sulfonylurea a hypoglycemicaction, exercising effect closing of K+ channels ATP. The Tolbutamide (10μM) also was infused 15 minutes before application of Isoproterenol in order totest whether this would prevents ulfonylurea most significantly to the action of isoproterenol. In the technique of 45Ca2+ uptake, we used FSH and isoproterenol with pertussis toxin (PTX), blocking the G protein subunit Gi to evaluate its involvementon Ca2+ uptake in Sertoli cells from immature rats. We used the cholera toxin, a stimulator of Gs protein, to evaluate the involvement of AMPc on Ca2+ uptake in Sertoli cells from immature rats. SQ22536, an inhibitor of the enzyme adenylate cyclase, was used to evaluate the involvement this enzyme in the stimulatory action of FSH in Sertoli cells from immature rats. The results were given as mean ± SEM. The data of the change in membrane potential were analyzed by ANOVA for repeated measures with Bonferroni post-test. The hyperpolarization produced by FSH was inhibited when tolbutamide was applied (10μM). The SQ22536 also abolished the hyperpolarization caused by FSH. The Isoproterenol when used alone produced a hyperpolarizing response on the membrane potential , changing from -32.4mV±1.32 mV to -40.0±0.78 mV at 60 seconds after its application (*p<0.001) (n=6Sertoli cells). Topical application of Tolbutamide (10μM) blocked the action of Isoproterenol (2μM), causing a depolarization of -41.0±0.47 mV ranged up to-39.0± 2.02 mV at 120 seconds after application of Isoproterenol (p>0.05) (n=6Sertoli cells). The Tolbutamide infusion was more effective inblocking beta-adrenergic response, causing a depolarization of -41,6 ±1,21 mV to -35,4 ± 0,98 mV at 120seconds after the topical application of Isoproterenol (p>0.05) (n=9Sertoli cells). Isoproterenol produces a rapid hyperpolarization on membrane potential of Sertoli cells. This effect was blocked by tolbutamide, indicating that the activation of beta-adrenergic receptors involves opening of K+ATP channels in the membrane of Sertoli cells from immature rat testes. PTX,when applied topically prior to application of isoproterenol did not prevent the characteristic hyperpolarization caused by isoproterenol. The hyperpolarizing action of isoproterenol is independent of Gi protein. PTX does not prevent the uptake of 45Ca2+ stimulated by isoproterenol. The cholera toxin, which stimulates Gs protein, does not stimulate 45Ca2+ uptake in Sertoli cells from immature rats.