A endometriose atinge 10-15% das mulheres. Portadoras dessa patologia têm 20 vezes mais chances de serem inférteis e 30-60% das pacientes com endometriose apresentam infertilidade associada. Nosso grupo de pesquisa demonstrou que mulheres com endometriose e infertilidade apresentam diversas anormalidades hormonais tais como hiperprolactinemia, insuficiência lútea, diminuição de fatores de crescimento intra-folicular e, mais recentemente, a coorte folicular ovariana heterogênea com uma redução da reserva folicular. Portanto, estudaremos a prevalência do polimorfismo do gene do receptor do hormônio folículo estimulante (FSH) em pacientes com endometriose e infertilidade. Acreditamos que polimorfismos no gene que sintetiza o receptor do FSH são mais prevalentes nesse grupo de pacientes. Tal polimorfismo, que altera a transdução do sinal do receptor, pode ser o responsável por uma resposta ovariana inadequada ao FSH. Conduzimos, ao longo dessa dissertação, um estudo caso-controle. Os casos compreendem 50 pacientes com infertilidade e endometriose. Os controles, 51 pacientes férteis sem endometriose. Determinaremos a prevalência alélica da substituição da asparagina (N) pela serina (S) no códon 680 (N680S) e da treonina (T) pela alanina (A) no códon 307 (T307A), localizados no éxon 10, em ambos os alelos do gene que sintetiza o receptor do FSH. Para tal, utilizaremos técnicas de reação em cadeia da polimerase em ambos os alelos. Os dois grupos não diferiram em sua avaliação demográfica. No grupo de pacientes com endometriose e infertilidade foram encontradas 10 pacientes homozigotas S/S e 10 pacientes A/A, 23 pacientes heterozigotas N/S e 17 T/A. Além de 17 pacientes genotipicamente N/N e 23 T/T. No grupo controle, houve 9 pacientes com homozigose S/S e 15 A/A, 25 heterozigotas N/S e 22 T/A. Finalmente, 17 pacientes com genótipo N/N e 14 T/T . Não obtivemos diferença significativa entre os grupos (P>0,05). Esse estudo pioneiro rejeita a hipotética associação entre endometriose e os polimorfismos N680S e T307A no gene que sintetiza o receptor do FSH.

A individualização do tratamento é o desafio atual no campo da reprodução assistida. Fatores prognósticos clássicos como idade ou testes de avaliação da reserva ovariana não são suficientes para predizer completamente a resposta das pacientes à indução da ovulação. Essa tese investiga se polimorfismos do receptor do Hormônio Folículo Estimulante ou do receptor do Hormônio Anti-Mulleriano influenciam na resposta ovariana à administração de uma dose padrão de gonadotrofinas para Fertilização In Vitro numa população caucasiana francesa altamente selecionada. Para avaliação correta da resposta à indução da ovulação, usamos parâmetros clássicos como número de oócitos recuperados ou embriões obtidos e também a relação entre o número de folículos que atingem a maturidade ao final do ciclo de indução e o número basal de folículos antrais – taxa de maturação folicular. Como resultados, apresentamos que a presença do alelo G para o receptor do Hormônio Anti Müllleriano está associado com um número menor de oócitos recuperados na punção ovariana. Já o polimorfismo do receptor do FSH Ser 680, apesar de associado com um nível de FSH basal mais elevado, não altera a taxa de maturação folicular. Esses dados podem ajudar, no futuro, a escolha correta do melhor protocolo de indução da ovulação assim como a dose de gonadotrofina a ser utilizada. / Tailoring for a single patient the use of controlled ovarian stimulation is the next challenge in the field of reproductive technology. Classic prognostic factors such as age or ovarian reserve tests have shown to be limited to predict patient’s response towards ovulation induction. This thesis searches to investigate if whether FSH or AMH receptor polymorphisms influence ovarian response to standard gonadotropins administration in a high selected French Caucasian population. In order to correctly evaluate the real ovarian response of each patient, we make use of classical parameters like the number of oocytes retrieved or number of embryos obtained at the end of an IVF cycle, and also the relationship between the number of follicles that reach maturity criteria and the total number of pre antral follicles – follicular output rate. Our results show that the presence of the G allele in the AMH receptor is associated with a lower number of oocytes retrieved. In addition, although FSHR Ser680 genotype is associated with higher basal FSH levels, this polymorphism as well as the Ala307 does not influence the follicular output rate. Our data can help to choose the best protocol and initial dose of gonadotrophin for ovulation induction in the future.

A manipulação no período neonatal tem sido utilizada há algumas décadas como modelo experimental para analisar os mecanismos pelos quais variações precoces no ambiente do animal afetam o desenvolvimento de sistemas neurais, dando origem a alterações comportamentais e neuroendócrinas estáveis na vida adulta. Em ratos, a manipulação neonatal consiste do manuseio suave dos filhotes por alguns minutos, em geral durante as duas primeiras semanas de vida. Trabalhos prévios demonstram que a manipulação neonatal altera o eixo hipotálamo-hipófise-gônada, reduzindo a capacidade reprodutiva de fêmeas através da diminuição do comportamento sexual, do bloqueio da ovulação e promove um atraso na instalação da puberdade. Com isso, o objetivo desse trabalho foi estudar os efeitos da manipulação neonatal sobre a função ovariana de ratas. Animais foram submetidos à manipulação neonatal durante 1 minuto, nos dez primeiros dias de vida pós-natal, e após três ciclos estrais regulares os ovários foram retirados, na fase do proestro, para análise histológica dos mesmos. A análise estrutural dos ovários das ratas manipuladas mostrou que não houve diferença estatisticamente significativa no peso ovariano, no número total de folículos antrais por ovário e nos diferentes diâmetros da espessura da camada das células da teca de folículos antrais normais e atrésicos. A manipulação neonatal induziu aumento do número de folículos antrais normais por ovário, redução no número de folículos antrais atrésicos por ovário, aumento do númerode folículos antrais normais com diâmetros inferiores a 300 mm e uma diminuição do número de folículos antrais atrésicos com diâmetros entre 401-500 mm. Em conjunto, nossos resultados demonstraram que a manipulação neonatal não induz alterações no desenvolvimento morfológico folicular e que, os mecanismos que levam a redução da capacidade reprodutiva de fêmeas provocada pela manipulação neonatal, como o bloqueio da ovulação, já visto em trabalhos do nosso laboratório, não estão associados a alterações de estrutura ovariana.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Ciências Animais, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-02-25T20:02:50Z No. of bitstreams: 1 2014_DemisCarlosRibeiroMenezes.pdf: 819592 bytes, checksum: f0061e94c0ca41843fe15bcaf6a45109 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-03-02T17:29:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_DemisCarlosRibeiroMenezes.pdf: 819592 bytes, checksum: f0061e94c0ca41843fe15bcaf6a45109 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-02T17:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_DemisCarlosRibeiroMenezes.pdf: 819592 bytes, checksum: f0061e94c0ca41843fe15bcaf6a45109 (MD5) / Realizaram-se três experimentos com objetivo de avaliar os efeitos da utilização de doses reduzidas e diminuição do número de administrações de FSH, além da utilização exógena de progesterona na resposta superovulatoria e produção de embriões em ovelhas. Nos experimentos 1 e 2 fez-se uma pré-sincronização do estro e 84 h após iniciou-se a estimulação ovariana utilizando FSH em 8 aplicações. No experimento 1 os tratamentos diferiram quanto a dose de FSH, sendo T1: 200 mg, T2: 133 mg e T3: 80 mg. Para o experimento 2 no T1 sem P4 e no T2 com P4 inserido 12h antes do início da SOV. No experimento 3 para o protocolo de SOV a sincronização do estro foi obtida com CIDR por 14 dias. Para a estimulação ovariana utilizou-se 133mg de FSH, no T1 em 8 aplicações a cada 12 horas e no T2 em 4 aplicações a cada 24 horas. As IA foram realizadas com sêmen congelado por via laparoscópica e a coleta de embriões por hemilaparoscopia. No experimento 1 o percentual de doadoras que responderam a SOV foi menor (p < 0,01) quando utilizada a dose de 80 mg de FSH do que quando utilizadas as doses de 133 e 200 mg, que foram semelhantes entre si. Observou-se que a média de estruturas coletadas (T1 = 3,92; T2 = 4,29; T3 = 2,23), de embriões viáveis (T1 = 1,54; T2 = 3,86; T3 = 0,33), embriões congeláveis (T1 = 1,38; T2 = 3,29; T3 = 0,33) e a média de CL das ovelhas que responderam a SOV (T1 = 8,46; T2 = 8,14; T3 = 5,67) foram similares entre os tratamentos (p > 0,05). No experimento 2 observou-se que a média de estruturas coletadas (T1 = 3,43; T2 = 4,0), de embriões viáveis (T1 = 1,43; T2 = 1,83), embriões congeláveis (T1 = 1,29; T2 = 1,33), a taxa de resposta das doadoras à SOV (T1 = 48,28%; T2 = 41,38%) e a média de CL (T1 = 6,29; T2 = 7,0) foram semelhante (p > 0,05). No experimento 3 observou-se que a média de estruturas coletadas (T1 = 3,47; T2 = 2,55) e a taxa de resposta das doadoras à SOV (T1 = 88,24%; T2 = 64,70%) foram similares entre os tratamentos (p > 0,05). No que se refere a embriões viáveis (T1 = 2,40; T2 = 0,82), embriões congeláveis (T1 = 2,07; T2 = 0,82) e média de CL (T1 = 7,47; T2 = 5,73) o grupo oito doses foi melhor que o grupo quatro doses (p < 0,05). As doses de 200, 133 e 80 mg de FSH para realização da SOV em ovelhas Santa Inês apresentaram resultados semelhantes na produção de embriões, sendo 80 mg pior na resposta superovulatória. A utilização de progesterona exógena durante a SOV não melhora a resposta superovulatória e produção de embriões. O protocolo oito doses de FSH a intervalos de 12 horas se mostra como a melhor opção para SOV em ovelhas Santa Inês. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / There were three experiments to evaluate the effects of using low doses and reducing the number of FSH administration, in addition to the exogenous use of progesterone in superovulatory response and embryo production in sheep. In Experiments 1 and 2 was made a pre-synchronization of estrus and 84 h after started ovarian stimulation using FSH in 8 applications. In experiment 1 the treatments differ in the FSH dose: T1: 200 mg, T2: T3 133 mg and 80 mg. For experiment no 2 at T1 and T2 P4 P4 inserted 12h before the SOV. Experiment 3 SOV protocol for synchronization of oestrus was obtained with CIDR for 14 days. For ovarian stimulation is used 133mg of FSH in 8 T1 applications every 12 hours in 4 and T2 applications every 24 hours. The inseminations were performed with frozen semen by laparoscopy and embryo collection by hemilaparoscopia. In experiment 1 the percentage of donors who responded to SOV was lower (p <0.01) when used at a dose of 80 mg of FSH when used at doses of 133 and 200 mg were similar. It was observed that the mean collected structures (T1 = 3.92, T2 = 4.29, T3 = 2.23), of viable embryos (T1 = 1.54, T2 = 3.86, T3 = 0.33 ), freezable embryos (T1 = 1.38; T2 = 3.29; T3 = 0.33) and the average CL of the sheep who responded to SOV (T1 = 8.46; T2 = 8.14; T3 = 5 67) were similar between treatments (p> 0.05). In Experiment 2, we observed that the mean collected structures (T1 = 3.43, T2 = 4.0), viable embryos (T1 = 1.43, T2 = 1.83), freezable embryo (T1 = 1.29; T2 = 1.33), the donor response rate to the SOV (T1 = 48.28%; T2 = 41.38%) and CL medium (T1 = 6.29, T2 = 7.0) were similar (p> 0.05). Experiment 3 showed that the average collected structures (T1 = 3.47; T2 = 2.55) and the response rate of donors to SOV (T1 = 88.24%; T2 = 64.70%) were among treatments (p> 0.05). With regard to viable embryos (T1 = 2.40, T2 = 0.82), freezable embryo (T1 = 2.07, T2 = 0.82) and mean CL (T1 = 7.47, T2 = 5 73) the eight-dose group was better than the four-dose group (p <0.05). Doses of 200, 133 and 80 mg of FSH to perform the SOV in Santa Ines ewes showed similar results in the production of embryos, 80 mg worst in superovulatory response. The use of exogenous progesterone during SOV does not improve superovulatory response and embryo production. The protocol eight FSH doses to 12 hours intervals shown as the best option for SOV in Santa Ines sheep.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Diogo Trindade Fóis (diogo_fois@hotmail.com) on 2009-10-13T15:56:58Z No. of bitstreams: 1 2008_RosangelaBatistaVasconcelos.pdf: 3213459 bytes, checksum: b9cfce3ea8f8eb38c4fed7e8a078f0a6 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-10-15T15:10:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_RosangelaBatistaVasconcelos.pdf: 3213459 bytes, checksum: b9cfce3ea8f8eb38c4fed7e8a078f0a6 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-10-15T15:10:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_RosangelaBatistaVasconcelos.pdf: 3213459 bytes, checksum: b9cfce3ea8f8eb38c4fed7e8a078f0a6 (MD5) Previous issue date: 2008-06 / Os efeitos dos hormônios gonadotrópicos sobre o desenvolvimento folicular já são bem caracterizados, no entanto, interações entre gonadotrofinas, esteróides e fatores de crescimento sobre os mecanismos intraovarianos envolvidos na regulação da foliculogênese e steroidogenesis ainda são pouco compreendidos. Neste sentido, o presente trabalho padroniza sistemas de cultivo com as células somáticas da parede do folículo, representado pela hemissecção da parede folicular, utilizando dois meios distintos: Um meio definido, aqui denominado ?-MEM e um meio indefinido, aqui denominado TCM. Os sistemas de cultura foram avaliados com relação à manutenção da atividade esteroidogênica, por dosagem dos hormônios estradiol e progesterona, expressão do RNAm da proteína StAR, enzimas da steroidogenesis, e receptor de FSH, aspectos morfológicos e imunomarcação para Cx43 nas hemissecções antes e após cultivo por 24 e 48 horas. Foram utilizados ovários de vacas abatidas em frigoríficos e transportados até o laboratório em solução salina à 37 ºC, dos quais foram dissecados folículos aparentemente saudáveis com 4 e 5 mm diâmetro. Os folículos foram seccionados ao meio para obter as hemissecções da parede do folículo, ou em três para obtenção das partes utilizadas na análise de RT-PCR. As secções do folículo foram cultivadas em meio 100ul do meio e incubadas em estufa a 37,5°C com 5% CO2 e 95% umidade por 24 ou 48 horas. Os Resultados mostram que os meios possuem capacidades de regulação distintas sobre a steroidogenesis folicular, características morfológicas e imunomarcação para Cx43. Os Sistemas de cultura com meio TCM apresentaram elevada concentração de P4 com 24 horas, e aumento progressivo da secreção deste hormônio no cultivo com 48 horas, redução da luminosidade das bandas das enzimas da steroidogenesis ( P450scc, arom, 17bHSD, 3bHSD) e do receptor do FSH após cultivo de 48 horas, além de alteração da morfologia celular a qual adquire forma semelhante a fibroblastos e perda da comunicação célula-célula evidenciada pela ausência da imunomarcação para Cx43 nas células foliculares; resultados que indicam luteinização celular, que podem ser decorrentes do uso do soro fetal bovino e elevadas concentração de FSH utilizado neste meio. Já os resultados obtidos para os sistemas de cultura que utilizaram o meio definido a-MEM puro ou acrescido de FSH em concentração fisiológica, mostra habilidade deste meio em manter atividade esteroidogênica ao longo do tempo de cultura, com menor secreção de P4 do que a obtida no meio indefinido, que não se altera ao longo da cultura, manutenção da expressão das enzimas da steroidogenesis após 48 horas de cultivo, além de conservar a característica morfológica das células semelhantes às obtidas in vivo e elevada expressão da proteína Cx43, resultados semelhantes àqueles obtidos com outros sistemas de cultivo livre de soro, e deixa evidente a capacidade do meio em manter as células foliculares in vitro com comportamento semelhante àquele de células de folículos saudáveis e em desenvolvimento. No meio a-MEM acrescido com FSH foi evidente o efeito estimulante sobre atividade esteroidogênica das células somáticas quando utilizado em dose fisiológica, por estimular a P450 aromatase e prevenir morte celular.

A individualização do tratamento é o desafio atual no campo da reprodução assistida. Fatores prognósticos clássicos como idade ou testes de avaliação da reserva ovariana não são suficientes para predizer completamente a resposta das pacientes à indução da ovulação. Essa tese investiga se polimorfismos do receptor do Hormônio Folículo Estimulante ou do receptor do Hormônio Anti-Mulleriano influenciam na resposta ovariana à administração de uma dose padrão de gonadotrofinas para Fertilização In Vitro numa população caucasiana francesa altamente selecionada. Para avaliação correta da resposta à indução da ovulação, usamos parâmetros clássicos como número de oócitos recuperados ou embriões obtidos e também a relação entre o número de folículos que atingem a maturidade ao final do ciclo de indução e o número basal de folículos antrais – taxa de maturação folicular. Como resultados, apresentamos que a presença do alelo G para o receptor do Hormônio Anti Müllleriano está associado com um número menor de oócitos recuperados na punção ovariana. Já o polimorfismo do receptor do FSH Ser 680, apesar de associado com um nível de FSH basal mais elevado, não altera a taxa de maturação folicular. Esses dados podem ajudar, no futuro, a escolha correta do melhor protocolo de indução da ovulação assim como a dose de gonadotrofina a ser utilizada. / Tailoring for a single patient the use of controlled ovarian stimulation is the next challenge in the field of reproductive technology. Classic prognostic factors such as age or ovarian reserve tests have shown to be limited to predict patient’s response towards ovulation induction. This thesis searches to investigate if whether FSH or AMH receptor polymorphisms influence ovarian response to standard gonadotropins administration in a high selected French Caucasian population. In order to correctly evaluate the real ovarian response of each patient, we make use of classical parameters like the number of oocytes retrieved or number of embryos obtained at the end of an IVF cycle, and also the relationship between the number of follicles that reach maturity criteria and the total number of pre antral follicles – follicular output rate. Our results show that the presence of the G allele in the AMH receptor is associated with a lower number of oocytes retrieved. In addition, although FSHR Ser680 genotype is associated with higher basal FSH levels, this polymorphism as well as the Ala307 does not influence the follicular output rate. Our data can help to choose the best protocol and initial dose of gonadotrophin for ovulation induction in the future.

Resumo não disponível

A manipulação no período neonatal tem sido utilizada há algumas décadas como modelo experimental para analisar os mecanismos pelos quais variações precoces no ambiente do animal afetam o desenvolvimento de sistemas neurais, dando origem a alterações comportamentais e neuroendócrinas estáveis na vida adulta. Em ratos, a manipulação neonatal consiste do manuseio suave dos filhotes por alguns minutos, em geral durante as duas primeiras semanas de vida. Trabalhos prévios demonstram que a manipulação neonatal altera o eixo hipotálamo-hipófise-gônada, reduzindo a capacidade reprodutiva de fêmeas através da diminuição do comportamento sexual, do bloqueio da ovulação e promove um atraso na instalação da puberdade. Com isso, o objetivo desse trabalho foi estudar os efeitos da manipulação neonatal sobre a função ovariana de ratas. Animais foram submetidos à manipulação neonatal durante 1 minuto, nos dez primeiros dias de vida pós-natal, e após três ciclos estrais regulares os ovários foram retirados, na fase do proestro, para análise histológica dos mesmos. A análise estrutural dos ovários das ratas manipuladas mostrou que não houve diferença estatisticamente significativa no peso ovariano, no número total de folículos antrais por ovário e nos diferentes diâmetros da espessura da camada das células da teca de folículos antrais normais e atrésicos. A manipulação neonatal induziu aumento do número de folículos antrais normais por ovário, redução no número de folículos antrais atrésicos por ovário, aumento do númerode folículos antrais normais com diâmetros inferiores a 300 mm e uma diminuição do número de folículos antrais atrésicos com diâmetros entre 401-500 mm. Em conjunto, nossos resultados demonstraram que a manipulação neonatal não induz alterações no desenvolvimento morfológico folicular e que, os mecanismos que levam a redução da capacidade reprodutiva de fêmeas provocada pela manipulação neonatal, como o bloqueio da ovulação, já visto em trabalhos do nosso laboratório, não estão associados a alterações de estrutura ovariana.

A endometriose atinge 10-15% das mulheres. Portadoras dessa patologia têm 20 vezes mais chances de serem inférteis e 30-60% das pacientes com endometriose apresentam infertilidade associada. Nosso grupo de pesquisa demonstrou que mulheres com endometriose e infertilidade apresentam diversas anormalidades hormonais tais como hiperprolactinemia, insuficiência lútea, diminuição de fatores de crescimento intra-folicular e, mais recentemente, a coorte folicular ovariana heterogênea com uma redução da reserva folicular. Portanto, estudaremos a prevalência do polimorfismo do gene do receptor do hormônio folículo estimulante (FSH) em pacientes com endometriose e infertilidade. Acreditamos que polimorfismos no gene que sintetiza o receptor do FSH são mais prevalentes nesse grupo de pacientes. Tal polimorfismo, que altera a transdução do sinal do receptor, pode ser o responsável por uma resposta ovariana inadequada ao FSH. Conduzimos, ao longo dessa dissertação, um estudo caso-controle. Os casos compreendem 50 pacientes com infertilidade e endometriose. Os controles, 51 pacientes férteis sem endometriose. Determinaremos a prevalência alélica da substituição da asparagina (N) pela serina (S) no códon 680 (N680S) e da treonina (T) pela alanina (A) no códon 307 (T307A), localizados no éxon 10, em ambos os alelos do gene que sintetiza o receptor do FSH. Para tal, utilizaremos técnicas de reação em cadeia da polimerase em ambos os alelos. Os dois grupos não diferiram em sua avaliação demográfica. No grupo de pacientes com endometriose e infertilidade foram encontradas 10 pacientes homozigotas S/S e 10 pacientes A/A, 23 pacientes heterozigotas N/S e 17 T/A. Além de 17 pacientes genotipicamente N/N e 23 T/T. No grupo controle, houve 9 pacientes com homozigose S/S e 15 A/A, 25 heterozigotas N/S e 22 T/A. Finalmente, 17 pacientes com genótipo N/N e 14 T/T . Não obtivemos diferença significativa entre os grupos (P>0,05). Esse estudo pioneiro rejeita a hipotética associação entre endometriose e os polimorfismos N680S e T307A no gene que sintetiza o receptor do FSH.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-02-22T12:05:37Z No. of bitstreams: 1 Sandra Silva Duarte.pdf: 1876881 bytes, checksum: 7055daf131a06799121ea33382178b98 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-22T12:05:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sandra Silva Duarte.pdf: 1876881 bytes, checksum: 7055daf131a06799121ea33382178b98 (MD5) Previous issue date: 2017-03-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The manipulation and culture of oocytes included in ovarian preantral follicles is one of the main tools currently used for studies of the initial folliculogenesis and rescue of primary oocytes, to cultivate them in vitro until maturation. The objective of this research was to study an efficient culture system for this stage of follicles, using IGF-1, EGF and FSH. Ovarian cortex fragments from sheep, were cultured in situ for eight days in αMEM+ added with IGF-1, FSH and EGF, isolated and/or associated. Samples were analyzed by classical histology and immunohistochemistry (TUNEL), in order to measare follicular diameters and classify follicles as primordial and developing (primary and secondary), normal / abnormal and with or without apoptosis. The relative mRNA expressions of the apoptosis-related genes, Bcl2, Bax and Caspases 3 and 9 in the ovarian fragments were evaluated by the real-time PCR technique. The culture with different concentrations of IGF-1, demonstrated that 50 ng/mL provided greater activation of follicle growth, compared to the other concentrations (P <0.05). FSH-associated IGF-1 improved follicular activation, normality, and reduced apoptosis (P <0.05). The relative expression of Caspase 9 was reduced (P <0.05) in cultures containing IGF-1, associated or not to FSH, but no difference was observed for the other genes (P> 0.05). Likewise, the association of IGF-1 to EGF with or without FSH addition was efficient for improving the in vitro culture of ovarian sheep fragments for 8 days, either in morphological quality or in the reduction of apoptosis (P <0.05 ). It is concluded that 50 ng/ml of IGF-1 is the most effective concentration for the development of cultured preantral follicles included in ovary ovarian tissue, for 8 days. The association of IGF-1 to EGF or FSH is efficient to improve the development of follicles and reduce the levels of apoptosis in these culture conditions, favoring the balance between the studied apoptotic factors. / A manipulação e cultivo de oócitos inclusos em folículos ovarianos pré-antrais é uma das principais ferramentas utilizadas atualmente para estudos da foliculogênese inicial e resgate de oócitos primários, para cultivá-los in vitro até a maturação. O objetivo deste trabalho foi estudar um sistema de cultivo eficiente para a etapa do desenvolvimento folicular pré-antral, utilizando IGF-1, EGF e FSH. Foi realizado o cultivo in situ de fragmentos de córtex ovariano de ovinos, cultivados por oito dias em αMEM+ adicionado de IGF-1, FSH e EGF, isolados e/ou associados. Amostras foram analisadas por histologia clássica e imuno-histoquímica (TUNEL), foram mensurados os diâmetros foliculares e os folículos classificados em primordiais e em desenvolvimento (primários e secundários), em normais/anormais e com ou sem apoptose. As expressões relativas de RNAm dos genes relacionados à apoptose, Bcl2, Bax e Caspases 3 e 9, nos fragmentos ovarianos, foram avaliadas pela técnica de PCR em tempo real. O cultivo com diferentes concentrações de IGF-1, demonstrou que 50 ng/mL proporcionou maior ativação do crescimento dos folículos, comparados às outras concentrações (P < 0,05). O IGF-1 associado ao FSH melhorou a ativação folicular, a normalidade dos folículos e reduziu a apoptose folicular (P < 0,05). A expressão relativa da Caspase 9 foi reduzida (P < 0,05) nos cultivos contendo IGF-1, associado ou não ao FSH, porém não foi observada diferença para os outros genes (P > 0,05). Da mesma forma a associação de IGF-1 ao EGF com ou sem adição de FSH foi eficiente para melhoria do cultivo in vitro de fragmentos ovarianos de ovelhas por 8 dias, seja na qualidade morfológica, quanto na redução da apoptose (P < 0,05). Conclui-se que 50 ng/mL de IGF-1 é a concentração mais eficaz para o desenvolvimento de folículos pré-antrais cultivados inclusos no tecido ovariano ovino, pelo período de 8 dias. A associação de IGF-1 ao EGF ou ao FSH são eficientes para melhorar o desenvolvimento dos folículos e reduzir os níveis de apoptose nestas condições de cultivo, favorecendo o equilíbrio entre os fatores apoptóticos estudados.