PAULINO, L.R.F.M. Efeito do fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e da interleucina-1 beta (IL-1β) sobre o desenvolvimento in vitro de folículos secundários bovinos isolados. 2017. 82f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) – Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2017. / Submitted by Mestrado Biotecnologia (biotecnologiasobral@gmail.com) on 2017-03-28T13:50:28Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_lrfmpaulino.pdf: 4160564 bytes, checksum: 35cbb24778d8e39c94be8695be1bad2a (MD5) / Rejected by Ana Márcia Sousa (marciasousa@ufc.br), reason: Prezada, Favor verificar os seguintes itens: Quanto a submissão: Nos campos autor, título em português e título em inglês fazer em letras maiúsculas e minusculas conforme guia. Quanto a dissertação: Solicitar ao autor que corrija os elementos introdutórios conforme normalização de trabalhos acadêmicos da UFC. Ex. de alguns erros encontrados, folha de rosto sem nome do orientador, ficha catalográfica com título todo maiúsculo e listas de ilustrações e tabelas desalinhadas. on 2017-04-11T13:37:23Z (GMT) / Submitted by Mestrado Biotecnologia (biotecnologiasobral@gmail.com) on 2017-05-18T13:36:54Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_lrfmpaulino.pdf: 4179675 bytes, checksum: 7d98eadd97e812f42d8bf4f9283b6f2a (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-05-24T15:17:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_lrfmpaulino.pdf: 4179675 bytes, checksum: 7d98eadd97e812f42d8bf4f9283b6f2a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-24T15:17:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_lrfmpaulino.pdf: 4179675 bytes, checksum: 7d98eadd97e812f42d8bf4f9283b6f2a (MD5) Previous issue date: 2017-03-07 / Ovarian follicular growth is regulated by various substances, such as hormones, growth factors and cytokines. Tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-1β (IL-1β) are proinflammatory cytokines that have several sites of synthesis in the ovary. In this context, the study of the effect of these cytokines during the in vitro growth of preantral follicles is of great importance for understanding the mechanisms that control follicular development in vitro. The objective of the present study was to determine the effect of TNF-α and IL-1β on development and survival of bovine secondary follicles after 18 days of culture in vitro. Secondary follicles (~0.2mm) were isolated from ovarian cortex of cows and individually cultured. The secondary follicles were randomly distributed in the following treatments: (I) TCM-199+ alone (culture control), or supplemented with (II) 10 ng/mL IL-1β, (III) 10 ng/mL TNF-α and (IV) both TNF- α and IL-1β. The follicles were cultured at 38.5°C, with 5% CO2 in air, for 18 days. Thereafter, the effect of these treatments on growth, follicular survival, antrum formation, viability, ultrastructure and mRNA levels for GDF9, C-MOS, H1foo and Cyclin B1 were then evaluated. At the end of 18 days of in vitro culture, TNF-α increased follicular diameter and the rate of antrum formation. On the other hand, IL-1β and both IL-1β and TNF-α did not influence follicle growth. All treatments maintained viability rates after culture between 74.32 and 92.00%. Ultrastructural analysis of showed that follicles cultured in the presence of TNF-α had oocyte citoplasm and granulosa cells well preserved. The presence of TNF-α, IL-1β or both did not influence the expression o mRNAs for GDF9, C-MOS, H1foo and Cyclin B1 after 18 days of culture. In conclusion, TNF-α promotes follicular growth and maintains the ultrastructure of isolated bovine secondary follicles cultured in vitro. / O crescimento folicular ovariano é regulado por diversas substâncias, tais como hormônios, fatores de crescimento e citocinas. O fator de necrose tumoral-α (TNF-α) e a interleucina-1β (IL-1β) são citocinas pró-inflamatórias que apresentam vários locais de síntese no ovário. Nesse contexto, o estudo do efeito destas citocinas durante o crescimento in vitro de folículos pré- antrais é de grande importância para a compreensão dos mecanismos que controlam o desenvolvimento folicular in vitro. O objetivo do presente estudo foi determinar o efeito do TNF-α e IL-1β sobre o desenvolvimento e a sobrevivência de folículos secundários bovinos após 18 dias de cultivo in vitro. Folículos secundários (~ 0,2 mm) foram isolados do córtex ovariano de vacas e cultivados individualmente. Os folículos secundários foram distribuídos aleatoriamente nos seguintes tratamentos: (I) TCM-199+ sozinho (controle) ou suplementado com (II) IL-1β (10 ng/mL), (III) TNF-α (10 ng/mL) e (IV) e ambos TNF-α e IL-1β. Os folículos foram cultivados a 38,5 °C, com 5% de CO2, durante 18 dias. A cada dois dias, 60 µL de meio de cultivo foram substituídos por meio fresco. Em seguida, avaliou-se o efeito destes tratamentos sobre crescimento, sobrevivência folicular, formação do antro, viabilidade, ultraestrutura e níveis de RNAm para GDF9, C-MOS, H1foo e Ciclina B1. No final de 18 dias de cultivo in vitro, o diâmetro folicular e taxa de formação de antro aumentaram após o cultivo em meio suplementado com apenas TNF-α. Todos os tratamentos mantiveram viabilidade após o cultivo entre 74.32 e 92.00%. A análise da ultraestrutura mostrou que os folículos cultivados na presença do TNF-α e IL-1β mantiveram a ultraestrutura do citoplasma do oócito e das células da granulosa. Os folículos cultivados expressaram RNAm para GDF9, C-MOS, H1foo e Ciclina B1, mas não houve diferença significativa entre os tratamentos. Em conclusão, o TNF-α contribui para o crescimento folicular e a manutenção da ultra-estrutura de folículos secundários bovinos cultivados in vitro.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-10-17T16:41:17Z No. of bitstreams: 1 Alane Pains Oliveira Monte.pdf: 2693567 bytes, checksum: 8422930b95e7585b038f585b353e920b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-17T16:41:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alane Pains Oliveira Monte.pdf: 2693567 bytes, checksum: 8422930b95e7585b038f585b353e920b (MD5) Previous issue date: 2018-07-30 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The objective of this work was to study the effect of the insulin like growth factor-1(IGF-1) and growth differentiation factor-9 (GDF-9) on the in vitro development of sheep preantral follicles. For this, three experimental phases were developed. The first phase evaluated the effect of IGF-I on the in vitro culture of sheep isolated secondary follicles. Sixteen ovaries were allocated for the immunolocalization of IGF-I protein. Isolated secondary follicles of other ovaries were cultured for 18 days in control medium (MEM+) or MEM+ supplemented with different concentrations of IGF-I (10, 50 and 100 ng/mL) or the same treatments with the addition of 750 ng/ml of FSH. At the end of the culture, fluorescence, in vitro maturation (IVM) or LH receptor (LHR) expression analyzes were performed. Phase 2 evaluated the influence of GDF-9 on the development of preantral follicles cultured in situ. For this, ovarian fragments were cultured for 7 days in MEM or in MEM supplemented with of GDF-9 (1, 50, 100, 200 or 400 ng/mL). In addition, a second culture in MEM or MEM + 50 ng/mL of GDF-9 was performed in the presence or absence of the PI3K pathway inhibitor. At the end of culture, follicular survival, activation and diameter, immunolocalization of PCNA, activated caspase-3 and pAKT proteins were evaluated. In the phase three, isolated secondary follicles were cultured for 12 days in MEM or MEM + GDF-9 (1, 10, 50 or 100 ng/mL). At the end of culture, oocytes were submitted to IVM, follow by mitochondrial activity and ROS analysis. The results of phase 1 showed that 50 ng/mL of IGF-I + FSH showed more fully-grown oocytes (P <0.05). ROS levels were higher in 100 ng/mL IGF-I + FSH compared to the other groups, with a concomitant decrease of GSH level and mitochondrial activity (P <0.05). In the second phase, follicular survival was higher with the concentration of 50 ng/ml of GFD-9 (P <0.05) compared to other treatments (except 1 ng/mL) concomitant with a greater proliferation and lower apoptosis compared to the control, through of PI3K/AKT pathway. In the last phase, the follicles cultured in 100 ng/ml GDF-9 showed a higher percentage of fully-grown oocytes, MI and higher mitochondrial activity compared to other groups (P <0.05). In conclusion, this study demonstrated the presence of IGF-I protein in sheep ovary. In addition, 50 ng/mL of IGF-I + FSH promotes follicular development and meiotically competent oocytes. The concentration of 50 ng/ml of GDF-9 maintains the survival of primordial follicles cultured in situ, increases cell proliferation and decreases apoptosis via the PI3K/AKT pathway. In isolated secondary follicles, GDF-9 increases the percentage of fully-grown oocytes able to resume meiosis, and enhances mitochondrial activity after IVM. / O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito do fator de crescimento semelhante à insulina-I (IGF-I) e do fator de crescimento e diferenciação-9 (GDF-9) sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais ovinos. Para isto, foram desenvolvidas três fases experimentais. A primeira fase avaliou o efeito do IGF-I sobre o cultivo in vitro de folículos secundários isolados de ovelhas. Parte dos ovários foram destinados à imunolocalização da proteína para o IGF-I. Os folículos secundários isolados dos demais ovários foram cultivados por 18 dias no meio controle (MEM+) ou no MEM+ associado de diferentes concentrações de IGF-I (10, 50 e 100 ng/mL), ou nos mesmos tratamentos adicionados de 750 ng/mL de FSH. Ao final do cultivo, foram realizadas análises de fluorescência, maturação in vitro (MIV) ou expressão do receptor de LH (LHR). A fase 2 avaliou a influência do GDF-9 no desenvolvimento de folículos pré-antrais cultivados in situ. Para isso, fragmentos ovarianos foram cultivados por 7 dias em MEM ou em MEM adicionado de GDF-9 (1, 50, 100, 200 ou 400 ng/mL). Além disso, foi realizado um segundo cultivo em MEM ou em MEM + 50 ng/mL de GDF-9, na presença ou ausência do inbidor da via PI3K. Ao final, os fragmentos foram avaliados quanto à sobrevivência, ativação, diâmetro e imunolocalização das proteínas PCNA, caspase-3 ativada e pAKT. Na fase três, folículos secundários isolados foram cultivados por 12 dias em MEM ou MEM + GDF-9 (1, 10, 50 ou 100 ng/mL). Ao final do cultivo, os oócitos foram submetidos à MIV e, posteriormente, à análise de atividade mitocondrial e ERO. Os resultados da fase 1 mostraram que 50 ng/mL de IGF-I + FSH apresentou mais oócitos totalmente crescidos (P<0,05). Os níveis de ERO foram maiores em 100 ng/mL de IGF-I + FSH comparado aos outros grupos, com concomitante diminuição do nível de GSH e atividade mitocondrial (P<0,05). Na fase 2, a sobrevivência folicular foi maior no tratamento 50 ng/mL de GFD-9 (P<0,05) comparado aos demais tratamentos (exceto 1 ng/mL), promoveu maior proliferação celular e reduziu a apoptose quando comparado ao controle, o que ocorreu através da via PI3K/AKT. Na fase 3, os folículos cultivados em 100 ng/mL de GDF-9 apresentaram maior percentagem de oócitos totalmente crescidos, MI e maior atividade mitocondrial comparado aos demais grupos (P<0,05). Em conclusão, este estudo demonstrou a presença da proteína para o IGF-I em ovários ovinos. Além disso, 50 ng/mL de IGF-I + FSH promove o desenvolvimento de folículos e de oócitos meioticamente competentes. A concentração de 50 ng/mL de GDF-9 mantém a sobrevivência de folículos primordiais cultivados in situ, aumenta a proliferação celular e diminui a apoptose através da via PI3K/AKT. Em folículos secundários isolados, o GDF-9 aumenta a percentagem de oócitos totalmente crescidos, aptos a retomar a meiose, e aumenta a atividade mitocondrial após a MIV.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-02-22T12:05:37Z No. of bitstreams: 1 Sandra Silva Duarte.pdf: 1876881 bytes, checksum: 7055daf131a06799121ea33382178b98 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-22T12:05:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sandra Silva Duarte.pdf: 1876881 bytes, checksum: 7055daf131a06799121ea33382178b98 (MD5) Previous issue date: 2017-03-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The manipulation and culture of oocytes included in ovarian preantral follicles is one of the main tools currently used for studies of the initial folliculogenesis and rescue of primary oocytes, to cultivate them in vitro until maturation. The objective of this research was to study an efficient culture system for this stage of follicles, using IGF-1, EGF and FSH. Ovarian cortex fragments from sheep, were cultured in situ for eight days in αMEM+ added with IGF-1, FSH and EGF, isolated and/or associated. Samples were analyzed by classical histology and immunohistochemistry (TUNEL), in order to measare follicular diameters and classify follicles as primordial and developing (primary and secondary), normal / abnormal and with or without apoptosis. The relative mRNA expressions of the apoptosis-related genes, Bcl2, Bax and Caspases 3 and 9 in the ovarian fragments were evaluated by the real-time PCR technique. The culture with different concentrations of IGF-1, demonstrated that 50 ng/mL provided greater activation of follicle growth, compared to the other concentrations (P <0.05). FSH-associated IGF-1 improved follicular activation, normality, and reduced apoptosis (P <0.05). The relative expression of Caspase 9 was reduced (P <0.05) in cultures containing IGF-1, associated or not to FSH, but no difference was observed for the other genes (P> 0.05). Likewise, the association of IGF-1 to EGF with or without FSH addition was efficient for improving the in vitro culture of ovarian sheep fragments for 8 days, either in morphological quality or in the reduction of apoptosis (P <0.05 ). It is concluded that 50 ng/ml of IGF-1 is the most effective concentration for the development of cultured preantral follicles included in ovary ovarian tissue, for 8 days. The association of IGF-1 to EGF or FSH is efficient to improve the development of follicles and reduce the levels of apoptosis in these culture conditions, favoring the balance between the studied apoptotic factors. / A manipulação e cultivo de oócitos inclusos em folículos ovarianos pré-antrais é uma das principais ferramentas utilizadas atualmente para estudos da foliculogênese inicial e resgate de oócitos primários, para cultivá-los in vitro até a maturação. O objetivo deste trabalho foi estudar um sistema de cultivo eficiente para a etapa do desenvolvimento folicular pré-antral, utilizando IGF-1, EGF e FSH. Foi realizado o cultivo in situ de fragmentos de córtex ovariano de ovinos, cultivados por oito dias em αMEM+ adicionado de IGF-1, FSH e EGF, isolados e/ou associados. Amostras foram analisadas por histologia clássica e imuno-histoquímica (TUNEL), foram mensurados os diâmetros foliculares e os folículos classificados em primordiais e em desenvolvimento (primários e secundários), em normais/anormais e com ou sem apoptose. As expressões relativas de RNAm dos genes relacionados à apoptose, Bcl2, Bax e Caspases 3 e 9, nos fragmentos ovarianos, foram avaliadas pela técnica de PCR em tempo real. O cultivo com diferentes concentrações de IGF-1, demonstrou que 50 ng/mL proporcionou maior ativação do crescimento dos folículos, comparados às outras concentrações (P < 0,05). O IGF-1 associado ao FSH melhorou a ativação folicular, a normalidade dos folículos e reduziu a apoptose folicular (P < 0,05). A expressão relativa da Caspase 9 foi reduzida (P < 0,05) nos cultivos contendo IGF-1, associado ou não ao FSH, porém não foi observada diferença para os outros genes (P > 0,05). Da mesma forma a associação de IGF-1 ao EGF com ou sem adição de FSH foi eficiente para melhoria do cultivo in vitro de fragmentos ovarianos de ovelhas por 8 dias, seja na qualidade morfológica, quanto na redução da apoptose (P < 0,05). Conclui-se que 50 ng/mL de IGF-1 é a concentração mais eficaz para o desenvolvimento de folículos pré-antrais cultivados inclusos no tecido ovariano ovino, pelo período de 8 dias. A associação de IGF-1 ao EGF ou ao FSH são eficientes para melhorar o desenvolvimento dos folículos e reduzir os níveis de apoptose nestas condições de cultivo, favorecendo o equilíbrio entre os fatores apoptóticos estudados.

Submitted by Michele Mologni (mologni@unoeste.br) on 2018-11-30T12:45:47Z No. of bitstreams: 1 Marina Platzeck Chaves.pdf: 891914 bytes, checksum: 43d527b64ad46e92f25496042406c5e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-30T12:45:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marina Platzeck Chaves.pdf: 891914 bytes, checksum: 43d527b64ad46e92f25496042406c5e9 (MD5) Previous issue date: 2018-05-30 / Steroids and gonadotrophins are essential for the regulation of antral follicular development and the late stages of preantral development. Although the luteinizing hormone receptor (LHR) has been detected in the preantral follicles of rats, rabbits, and pigs, the expression of this receptor in bovine fetal ovary has not been demonstrated. The present study aimed to quantify the expression of the LHR and the mRNA abundance of the genes LHR binding protein (LRBP), STAR, HSD3B1, CYP17A1, and CYP19A1 during the development of bovine fetal ovary. In addition, we aimed to identify and quantify the expression of bta-miR-222 (a regulatory microRNA of the LHCGR gene). In summary, LHR expression was observed in the preantral follicle in bovine fetal ovary, from oogonias to primordial, primary and secondary stages, and the mRNA abundance was lower on day 150 than day 60. However, the mRNA abundance of LRBP followed the opposite pattern. The LHR protein was detected in oogonia, primordial, primary, and secondary follicles. Moreover, both oocytes and granulosa cells showed positive immunostaining for LHR. Similar to LRBP, the abundance of bta-miR-222 was higher on day 150 than day 60 or 90 of gestation. With regard to the gene expression of steroidogenic enzymes; only the mRNA abundance of STAR was higher on day 150 than on day 60. In conclusion, these results suggested the involvement of LHCGR/LRBP regulation with mechanisms related to the development of preantral follicles, especially during the establishment of secondary follicles. Furthermore, the present data reinforced that the reduced expression of LHR mRNA in bovine fetal ovaries on day 150 was related to the higher expression of LRBP and bta-miR-222. / Esteroides e gonadotrofinas são essenciais para a regulação do desenvolvimento folicular antral e os estágios finais do desenvolvimento pré-antral. Embora o receptor do hormônio luteinizante (LHR) tenha sido detectado nos folículos pré-antrais de ratos, coelhos e porcos, a expressão deste receptor no ovário fetal bovino não foi demonstrada. O presente estudo teve como objetivo quantificar a expressão do LHR e a abundância de mRNA da proteína de ligação LHR (LRBP), STAR, HSD3B1, CYP17A1 e CYP19A1 durante o desenvolvimento do ovário fetal bovino. Além disso, objetivamos identificar e quantificar a expressão de bta-miR-222 (microRNA regulador do gene LHCGR). Em resumo, a expressão de LHR foi observada no folículo pré-antral no ovário fetal de bovino e a abundância de mRNA foi menor no dia 150 do que no dia 60. No entanto, a abundância de mRNA da LRBP seguiu o padrão oposto. Semelhante a LRBP, a abundância de bta-miR-222 foi maior no dia 150 do que no dia 60 ou 90. Com relação à expressão gênica de enzimas esteroidogênicas; apenas a abundância de mRNA de STAR foi maior no dia 150 do que no dia 60. A proteína LHR foi detectada em oogônia, folículos primordiais, primários e secundários. Além disso, ambos os oócitos e células da granulosa apresentaram imunolocalização positiva para LHR. Em conclusão, estes resultados sugeriram o envolvimento da regulação do LHCGR / LBPB com mecanismos relacionados ao desenvolvimento de folículos pré-antrais, especialmente durante o estabelecimento de folículos secundários. Além disso, os presentes dados reforçaram que a expressão reduzida de mRNA de LHR em ovários fetais bovinos no dia 150 estava relacionada à maior expressão de LRBP e bta-miR-222.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The manipulation of oocytes enclosed in follicles Ovarian Pre-Antral, allows increasing the reproductive potential of females from the isolation and cultivation. The follicular viability can be affected negatively correlated with age, malnutrition, exposure to radio or chemotherapy and health conditions. The alternatives are to use these research for development of culture media which provides the maintenance of viability allows the activation and follicular development in vitro, for subsequent fertilization. Physiologically various growth factors are involved in the process of folliculogenesis, many of which have so far not been tested in goats. Among them the Sphingosine 1-phosphate (S1P) and Leukemia Inhibitory Factor (LIF), since, follicular development were obtained with these factors in other species, allowing follicular growth and ant apoptotic effect on ovarian tissue. The aim of this study was to evaluate the addition of different concentrations of S1P and the LIF to culture media separately, evaluating the maintenance of viability, activation and follicular development. Thus, the preantral follicle cultured with S1P in situ LIF for 7 days and follicular development as possible to maintain viability, activation and growth of preantral follicle in vitro. Concluding that the S1P 1 ng/ml LIF and 10ng/ml, were the concentration that the maintenance of viability and follicular activation of in situ and grown in vitro for 7 days improved the viability, activation and preantral follicular growth. / A Manipulação de Oócito Incluso em Folículos Ovariano Pré-Antral (MOIFOPA) possibilita o aumento do potencial reprodutivo das fêmeas a partir do isolamento e cultivo de FOPA. A viabilidade folicular pode sofrer influências negativas com a idade, desnutrição, exposição a rádio ou quimioterápicos e condições sanitárias adversas. As alternativas para aproveitamento desses FOPA são pesquisas voltadas para elaboração de meios de cultivos que proporcione o manutenção da viabilidade a possibilite a ativação e o desenvolvimento folicular in vitro, para posterior fertilização. Fisiologicamente vários fatores de crescimento estão envolvidos durante o processo da foliculogênese, muitos dos quais até o momento não foram testados em cabras. Dentre eles, a Esfingosina 1-fosfato (S1P) e o Fator Inibidor da Leucemia (LIF), uma vez que, o desenvolvimento folicular foram obtido com esses fatores em outras espécies, possibilitando crescimento folicular e efeito anti-apoptótico no tecido ovariano. O objetivo desse trabalho foi avaliar a adição de diferentes concentrações de S1P e o do LIF separadamente aos meios de cultivo, avaliando a manutenção da viabilidade, ativação e desenvolvimento folicular. Dessa forma, os FOPA cultivados in situ com S1P e LIF por 7 dias possibilitaram desenvolvimento folicular conforme a manutenção da viabilidade, ativação e crescimento dos FOPA in vitro. Concluindo que a S1P 1ng/ml e o LIF 10ng/ml, foram as concentração que condicionaram a manutenção da viabilidade e a ativação dos FOPA in situ cultivados in vitro por 7 em dias melhor mantiveram a viabilidade, ativação e crescimento folicular.

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Resumo: O hormônio Anti-Mülleriano (AMH) tem sido proposto como marcador fidedigno da reserva ovariana, estimando a expectativa de vida reprodutiva remanescente da fêmea. Atualmente, em reprodução assistida humana, tem sido utilizado para determinar o tratamento a ser seguido e conduzir a expectativa da paciente. Em equinos, pouco se sabe sobre a produção de AMH e sua importância clínica. Sendo assim, o objetivo principal deste estudo foi descrever a concentração de AMH ao longo da vida das éguas e avaliar sua concentração após ovariectomia, em busca de relacionar AMH com reserva folicular ovariana. Foram realizados 2 experimentos. Experimento 1: Foi realizada a colheita de sangue de 1058 éguas Quarto de Milha, de 1 dia a 33 anos de idade, com o objetivo de relacionar AMH com a idade da égua. Experimento 2: 13 éguas (6 jovens e 7 idosas) foram submetidas a duas cirurgias de ovariectomia com intervalo médio de 111 dias. Amostras de sangue para dosagem de AMH foram retiradas imediatamente antes da primeira cirurgia e diariamente durante 15 dias. Na segunda cirurgia, amostras de sangue foram coletadas imediatamente antes da cirurgia e 15 dias após a mesma. AMH foi dosado por técnica de ELISA (Equine AMH ELISA; Ansh Labs, Webster, TX, USA). Testes não paramétricos foram utilizados para confrontar as medianas dos níveis de AMH entre diferentes categorias de idade e médias dos períodos pré e pós operatórios. A idade foi responsável por somente 5% da variabilidade dos níveis de AMH. A conc... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor