Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-10-17T16:41:17Z No. of bitstreams: 1 Alane Pains Oliveira Monte.pdf: 2693567 bytes, checksum: 8422930b95e7585b038f585b353e920b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-17T16:41:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alane Pains Oliveira Monte.pdf: 2693567 bytes, checksum: 8422930b95e7585b038f585b353e920b (MD5) Previous issue date: 2018-07-30 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The objective of this work was to study the effect of the insulin like growth factor-1(IGF-1) and growth differentiation factor-9 (GDF-9) on the in vitro development of sheep preantral follicles. For this, three experimental phases were developed. The first phase evaluated the effect of IGF-I on the in vitro culture of sheep isolated secondary follicles. Sixteen ovaries were allocated for the immunolocalization of IGF-I protein. Isolated secondary follicles of other ovaries were cultured for 18 days in control medium (MEM+) or MEM+ supplemented with different concentrations of IGF-I (10, 50 and 100 ng/mL) or the same treatments with the addition of 750 ng/ml of FSH. At the end of the culture, fluorescence, in vitro maturation (IVM) or LH receptor (LHR) expression analyzes were performed. Phase 2 evaluated the influence of GDF-9 on the development of preantral follicles cultured in situ. For this, ovarian fragments were cultured for 7 days in MEM or in MEM supplemented with of GDF-9 (1, 50, 100, 200 or 400 ng/mL). In addition, a second culture in MEM or MEM + 50 ng/mL of GDF-9 was performed in the presence or absence of the PI3K pathway inhibitor. At the end of culture, follicular survival, activation and diameter, immunolocalization of PCNA, activated caspase-3 and pAKT proteins were evaluated. In the phase three, isolated secondary follicles were cultured for 12 days in MEM or MEM + GDF-9 (1, 10, 50 or 100 ng/mL). At the end of culture, oocytes were submitted to IVM, follow by mitochondrial activity and ROS analysis. The results of phase 1 showed that 50 ng/mL of IGF-I + FSH showed more fully-grown oocytes (P <0.05). ROS levels were higher in 100 ng/mL IGF-I + FSH compared to the other groups, with a concomitant decrease of GSH level and mitochondrial activity (P <0.05). In the second phase, follicular survival was higher with the concentration of 50 ng/ml of GFD-9 (P <0.05) compared to other treatments (except 1 ng/mL) concomitant with a greater proliferation and lower apoptosis compared to the control, through of PI3K/AKT pathway. In the last phase, the follicles cultured in 100 ng/ml GDF-9 showed a higher percentage of fully-grown oocytes, MI and higher mitochondrial activity compared to other groups (P <0.05). In conclusion, this study demonstrated the presence of IGF-I protein in sheep ovary. In addition, 50 ng/mL of IGF-I + FSH promotes follicular development and meiotically competent oocytes. The concentration of 50 ng/ml of GDF-9 maintains the survival of primordial follicles cultured in situ, increases cell proliferation and decreases apoptosis via the PI3K/AKT pathway. In isolated secondary follicles, GDF-9 increases the percentage of fully-grown oocytes able to resume meiosis, and enhances mitochondrial activity after IVM. / O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito do fator de crescimento semelhante à insulina-I (IGF-I) e do fator de crescimento e diferenciação-9 (GDF-9) sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais ovinos. Para isto, foram desenvolvidas três fases experimentais. A primeira fase avaliou o efeito do IGF-I sobre o cultivo in vitro de folículos secundários isolados de ovelhas. Parte dos ovários foram destinados à imunolocalização da proteína para o IGF-I. Os folículos secundários isolados dos demais ovários foram cultivados por 18 dias no meio controle (MEM+) ou no MEM+ associado de diferentes concentrações de IGF-I (10, 50 e 100 ng/mL), ou nos mesmos tratamentos adicionados de 750 ng/mL de FSH. Ao final do cultivo, foram realizadas análises de fluorescência, maturação in vitro (MIV) ou expressão do receptor de LH (LHR). A fase 2 avaliou a influência do GDF-9 no desenvolvimento de folículos pré-antrais cultivados in situ. Para isso, fragmentos ovarianos foram cultivados por 7 dias em MEM ou em MEM adicionado de GDF-9 (1, 50, 100, 200 ou 400 ng/mL). Além disso, foi realizado um segundo cultivo em MEM ou em MEM + 50 ng/mL de GDF-9, na presença ou ausência do inbidor da via PI3K. Ao final, os fragmentos foram avaliados quanto à sobrevivência, ativação, diâmetro e imunolocalização das proteínas PCNA, caspase-3 ativada e pAKT. Na fase três, folículos secundários isolados foram cultivados por 12 dias em MEM ou MEM + GDF-9 (1, 10, 50 ou 100 ng/mL). Ao final do cultivo, os oócitos foram submetidos à MIV e, posteriormente, à análise de atividade mitocondrial e ERO. Os resultados da fase 1 mostraram que 50 ng/mL de IGF-I + FSH apresentou mais oócitos totalmente crescidos (P<0,05). Os níveis de ERO foram maiores em 100 ng/mL de IGF-I + FSH comparado aos outros grupos, com concomitante diminuição do nível de GSH e atividade mitocondrial (P<0,05). Na fase 2, a sobrevivência folicular foi maior no tratamento 50 ng/mL de GFD-9 (P<0,05) comparado aos demais tratamentos (exceto 1 ng/mL), promoveu maior proliferação celular e reduziu a apoptose quando comparado ao controle, o que ocorreu através da via PI3K/AKT. Na fase 3, os folículos cultivados em 100 ng/mL de GDF-9 apresentaram maior percentagem de oócitos totalmente crescidos, MI e maior atividade mitocondrial comparado aos demais grupos (P<0,05). Em conclusão, este estudo demonstrou a presença da proteína para o IGF-I em ovários ovinos. Além disso, 50 ng/mL de IGF-I + FSH promove o desenvolvimento de folículos e de oócitos meioticamente competentes. A concentração de 50 ng/mL de GDF-9 mantém a sobrevivência de folículos primordiais cultivados in situ, aumenta a proliferação celular e diminui a apoptose através da via PI3K/AKT. Em folículos secundários isolados, o GDF-9 aumenta a percentagem de oócitos totalmente crescidos, aptos a retomar a meiose, e aumenta a atividade mitocondrial após a MIV.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-06-01T11:44:36Z No. of bitstreams: 1 ralphmaturanopinheiro.pdf: 530518 bytes, checksum: c7705e2c22719ac685677b3a3ed3fe26 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-07-02T12:54:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ralphmaturanopinheiro.pdf: 530518 bytes, checksum: c7705e2c22719ac685677b3a3ed3fe26 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-02T12:54:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ralphmaturanopinheiro.pdf: 530518 bytes, checksum: c7705e2c22719ac685677b3a3ed3fe26 (MD5) Previous issue date: 2012-02-03 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A bionomia de Chelopistes meleagridis fora do hospedeiro foi observada com o objetivo de compreender aspectos relacionados ao ciclo de vida desta espécie. Para isto, adultos de C. meleagridis foram coletados e colocados em condições controladas para se reproduzir, oferecendo-se pena como alimento. Da prole destes adultos, foi observado o desenvolvimento de 150 indivíduos desde o ovo até a fase adulta. Para 75 destes, foi oferecida a dieta composta de pena, enquanto para os outros 75 a dieta foi composta de pena e pele do hospedeiro (peru, Meleagris gallopavo). Ao verificar que a dieta “pena + pele” foi a que resultou no maior número de adultos, foram observadas a fertilidade, fecundidade e a longevidade de piolhos criados in vitro desde o primeiro ínstar alimentados com esta dieta. Valores altos relacionados à reprodução desta espécie foram encontrados em relação a outros piolhos da subordem Ischnocera, destacando-se: número de ovos produzidos por dia e número de ovos produzidos por fêmeas durante a vida (médias de 2,54 e 26,61 ovos, respectivamente, para fêmeas selvagens e 2,11 e 29,33 ovos, respectivamente, para fêmeas criadas in vitro.). A inclusão de pele na dieta foi determinante para o desenvolvimento até o estágio adulto, uma vez que 48% dos piolhos alimentados com essa dieta atingiram a fase adulta. Quando foi oferecido apenas pena, 1,3% dos piolhos atingiram a maturidade. O tempo de desenvolvimento de machos e fêmeas foi semelhante (média de 29,38 dias) sem haver diferença na proporção sexual dos adultos. / Bionomics of the large louse turkey Chelopistes meleagridis off host was evaluated to comprehend aspects related to life cycle. To this, adults was collected and put in controlled conditions for reproduce, offered feathers as food. From offspring of these adults were observed the development of 150 lice from eggs to adults. To 75 of them was given only feathers as resource of food while to others 75 lice the diet was composed by feathers and skin debris from the natural host, Meleagris gallopavo. When verified that diet composed by feather + skin resulted in more adults, was evaluated fertility, fecundity and longevity of this specie reared in vitro from first nymphs to adults feed with this diet. High values related to reproduction of this specie were found in comparison with others avian Ischnocera, like: number of eggs produced by day and number of egg produced during the lifespan of females (means of 2.54 and 26.61, respectively to wild females and 2.11 and 29.33 respectively to females reared in vitro). The addition of skin in diet was determinant to development to adult stage, once time 48% fed with this diet reared to adults while the lice feed with feathers only 1.3 % of then became adult stage. The time of development of males and females was the same (29 days). The sex rate of adults reared in vitro was 1:1.