Em programas de transferência de embriões, as perdas embrionárias após a inovulação têm sido relacionadas com uma capacidade reduzida do corpo lúteo (CL) em secretar progesterona (P4), uma vez que este hormônio prepara o endométrio para a implantação e a manutenção da prenhez. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar a eficácia da utilização de dispositivo intravaginal contendo progesterona (CIDR®) por 14 dias em receptoras de embrião, para a indução de folículos persistentes e formação de CLs maiores do que aqueles formados com a utilização de CIDR® por 8 dias. Duzentas e setenta e oito novilhas Bos taurus x Bos indicus foram divididas em 4 grupos. As receptoras do Grupo 1 (G1, n = 70) receberam 2,0 mg de BE + 50 mg de P4 por via intramuscular (IM) no dia da colocação do CIDR® (D0), oito dias depois (D8), o dispositivo foi retirado e foi aplicado um análogo da prostaglandina F2 alfa (PGF2 alfa - 0,53 mg de Cloprostenol Sódico) IM pela manhã. No D9, foi aplicado 0,5 mg de BE IM e o D17 foi o dia da inovulação. Os animais do Grupo 2 (G2, n = 71) receberam 2,0 mg de BE + 50 mg de P4 no dia da colocação do CIDR® (D0), todavia, esses animais receberam 2 aplicações de PGF2 alfa, uma no início do tratamento e outra 5 dias depois. Nestes animais, o CIDR® foi mantido por 14 dias; assim, no D15 foi aplicado 0,5 mg de BE e o dia da inovulação, foi o D23. No Grupo 3 (G3, n = 67), o tratamento foi semelhante ao do G2, no entanto a PGF2 alfa foi aplicada uma única vez, 5 dias após o início do tratamento. No Grupo 4 (G4, n = 70), o tratamento foi semelhante ao do G2, tendo os animais recebido 2 aplicações de PGF2 alfa, uma no dia da colocação do CIDR® e outra no dia da retirada. A avaliação ultrassonográfica dos ovários foi realizada um dia após a retirada do CIDR® e no dia da inovulação, quando foram colhidas amostras de sangue para dosagem de P4. O diâmetro médio do folículo dominante (FD) foi maior nos grupos G2, G3 e G4 quando comparado com o grupo G1. A área do CL, a concentração plasmática de P4 e a taxa de aproveitamento foram maiores nos grupos G2 e G3 que no grupo G1, enquanto o grupo G4 não diferiu estatisticamente dos demais. A taxa de concepção nos grupos G2 e G3 foi inferior àquela do grupo G1, mas não diferiu entre o grupo G4 e os demais. A taxa de prenhez não apresentou diferença estatística entre os grupos. Esses resultados sugerem que a utilização de CIDR® por tempo prolongado, quando associada à aplicação de PGF2 alfa no início do tratamento, é eficaz na formação de folículos persistentes, que resultam em CLs aumentados e com maior capacidade de secretar P4 . No entanto, ao contrário do esperado, a taxa de concepção foi reduzida nos grupos em que o tratamento visava a formação de folículos persistentes. / Embryo losses in cattle embryo transfer programs have been related to a corpus luteum (CL) inability to secrete progesterone (P4), necessary to endometrial preparation for embryo implantation and pregnancy maintenance. Thus the objective of this experiment was to evaluate the efficacy of a treatment with progesterone-releasing intravaginal devices (CIDR®) for a period of 14 days in order to induce the formation of a persistent follicle and a CL of larger diameter than the ones produced during the conventional 8 days CIDR® treatment. Two hundred seventy-eight cross-bred Bos taurus x Bos indicus heifers were randomly allocated in four groups. Heifers in Group 1 (G1, n = 70) received 2.0 mg estradiol benzoate (EB) + 50 mg of P4 at the moment of CIDR® insertion (D0), a 0.53 mg injection of cloprostenol (PGF2 alfa analogous) at the time of CIDR® removal (D8) and 0.5 mg EB on D9. On D17 animals received a frozen/thawed embryo by direct transfer. Heifers in Group 2 (G2, n = 71) received a CIDR® device combined with 2.0 mg of EB + 50 mg of P4 (D0). Animals of this group received 2 injections of PGF2 alfa, one on D0 and the other on D5. The CIDR® was removed on D14. A 0.5 mg injection of EB was administered on D15. The treatment in Group 3 (G3, n = 67) was similar to G2, except by the fact that a single injection of PGF2 alfa was administered on D5. Treatment performed on animals of Group 4 was similar to the one performed on G2. However, animals of this group received two injections of PGF2 alfa, one at the time of CIDR® insertion and the other at the moment of it?s removal. Ovarian ultrasonography was performed on the day after CIDR® removal and at the day of embryo transfer. Blood samples for P4 analysis were also collected on the day of embryo transfer. Mean diameter of the dominant follicle was larger in heifers in G2, G3 and G4 when compared to G1. The CL area, plasma progesterone concentrations and recipient selection rate was greater in G2 and G3 than in G1, but G4 was not different of the other groups. Conception rates were lower in G2 and G3 when compared to G1. No differences between groups were found regarding to the pregnancy rates. These results suggest that a CIDR® long-term treatment, when associated with PGF2 alfa in the beggining of the treatment is efficient to stimulate the formation of a persistent follicle, resulting in a larger CL which provides higher P4 concentration. However, the induction of a persistent follicle had a negative effect on the conception rates which was not expected.

Em programas de transferência de embriões, as perdas embrionárias após a inovulação têm sido relacionadas com uma capacidade reduzida do corpo lúteo (CL) em secretar progesterona (P4), uma vez que este hormônio prepara o endométrio para a implantação e a manutenção da prenhez. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar a eficácia da utilização de dispositivo intravaginal contendo progesterona (CIDR®) por 14 dias em receptoras de embrião, para a indução de folículos persistentes e formação de CLs maiores do que aqueles formados com a utilização de CIDR® por 8 dias. Duzentas e setenta e oito novilhas Bos taurus x Bos indicus foram divididas em 4 grupos. As receptoras do Grupo 1 (G1, n = 70) receberam 2,0 mg de BE + 50 mg de P4 por via intramuscular (IM) no dia da colocação do CIDR® (D0), oito dias depois (D8), o dispositivo foi retirado e foi aplicado um análogo da prostaglandina F2 alfa (PGF2 alfa - 0,53 mg de Cloprostenol Sódico) IM pela manhã. No D9, foi aplicado 0,5 mg de BE IM e o D17 foi o dia da inovulação. Os animais do Grupo 2 (G2, n = 71) receberam 2,0 mg de BE + 50 mg de P4 no dia da colocação do CIDR® (D0), todavia, esses animais receberam 2 aplicações de PGF2 alfa, uma no início do tratamento e outra 5 dias depois. Nestes animais, o CIDR® foi mantido por 14 dias; assim, no D15 foi aplicado 0,5 mg de BE e o dia da inovulação, foi o D23. No Grupo 3 (G3, n = 67), o tratamento foi semelhante ao do G2, no entanto a PGF2 alfa foi aplicada uma única vez, 5 dias após o início do tratamento. No Grupo 4 (G4, n = 70), o tratamento foi semelhante ao do G2, tendo os animais recebido 2 aplicações de PGF2 alfa, uma no dia da colocação do CIDR® e outra no dia da retirada. A avaliação ultrassonográfica dos ovários foi realizada um dia após a retirada do CIDR® e no dia da inovulação, quando foram colhidas amostras de sangue para dosagem de P4. O diâmetro médio do folículo dominante (FD) foi maior nos grupos G2, G3 e G4 quando comparado com o grupo G1. A área do CL, a concentração plasmática de P4 e a taxa de aproveitamento foram maiores nos grupos G2 e G3 que no grupo G1, enquanto o grupo G4 não diferiu estatisticamente dos demais. A taxa de concepção nos grupos G2 e G3 foi inferior àquela do grupo G1, mas não diferiu entre o grupo G4 e os demais. A taxa de prenhez não apresentou diferença estatística entre os grupos. Esses resultados sugerem que a utilização de CIDR® por tempo prolongado, quando associada à aplicação de PGF2 alfa no início do tratamento, é eficaz na formação de folículos persistentes, que resultam em CLs aumentados e com maior capacidade de secretar P4 . No entanto, ao contrário do esperado, a taxa de concepção foi reduzida nos grupos em que o tratamento visava a formação de folículos persistentes. / Embryo losses in cattle embryo transfer programs have been related to a corpus luteum (CL) inability to secrete progesterone (P4), necessary to endometrial preparation for embryo implantation and pregnancy maintenance. Thus the objective of this experiment was to evaluate the efficacy of a treatment with progesterone-releasing intravaginal devices (CIDR®) for a period of 14 days in order to induce the formation of a persistent follicle and a CL of larger diameter than the ones produced during the conventional 8 days CIDR® treatment. Two hundred seventy-eight cross-bred Bos taurus x Bos indicus heifers were randomly allocated in four groups. Heifers in Group 1 (G1, n = 70) received 2.0 mg estradiol benzoate (EB) + 50 mg of P4 at the moment of CIDR® insertion (D0), a 0.53 mg injection of cloprostenol (PGF2 alfa analogous) at the time of CIDR® removal (D8) and 0.5 mg EB on D9. On D17 animals received a frozen/thawed embryo by direct transfer. Heifers in Group 2 (G2, n = 71) received a CIDR® device combined with 2.0 mg of EB + 50 mg of P4 (D0). Animals of this group received 2 injections of PGF2 alfa, one on D0 and the other on D5. The CIDR® was removed on D14. A 0.5 mg injection of EB was administered on D15. The treatment in Group 3 (G3, n = 67) was similar to G2, except by the fact that a single injection of PGF2 alfa was administered on D5. Treatment performed on animals of Group 4 was similar to the one performed on G2. However, animals of this group received two injections of PGF2 alfa, one at the time of CIDR® insertion and the other at the moment of it?s removal. Ovarian ultrasonography was performed on the day after CIDR® removal and at the day of embryo transfer. Blood samples for P4 analysis were also collected on the day of embryo transfer. Mean diameter of the dominant follicle was larger in heifers in G2, G3 and G4 when compared to G1. The CL area, plasma progesterone concentrations and recipient selection rate was greater in G2 and G3 than in G1, but G4 was not different of the other groups. Conception rates were lower in G2 and G3 when compared to G1. No differences between groups were found regarding to the pregnancy rates. These results suggest that a CIDR® long-term treatment, when associated with PGF2 alfa in the beggining of the treatment is efficient to stimulate the formation of a persistent follicle, resulting in a larger CL which provides higher P4 concentration. However, the induction of a persistent follicle had a negative effect on the conception rates which was not expected.

Ovarian steroids assist in the development of the follicle and its enclosed oocyte as well as prepare the maternal environment for pregnancy. The objective of experiment 1 was to elucidate the differences between dominant follicles of each follicular wave in terms of intraollicular concentration of steroids after 4 d of dominance. Differences in blood perfusion between the dominant follicle of the first and second non-ovulatory wave were also examined. Follicular waves were monitored daily via ultrasonography from emergence to aspiration of the dominant follicle. It was determined that although the dominant follicles aspirated from ovulatory waves possessed a greater concentration of estradiol and a greater ratio of estradiol to progesterone, there was no difference in concentrations of steroid hormones or the ratio of estradiol to progesterone between dominant follicles collected from non-ovulatory waves and ovulatory waves. In a subset of cows, blood perfusion tended to be greater in dominant follicles that developed during the second non-ovulatory wave. The objective of experiment 2 was to determine whether or not the follicular wave had an effect on diameter of the ovulatory follicle, thickness of the endometrium, or subsequent pregnancy rates. Estrus was synchronized in females in such a way that females would ovulate the dominant follicle of the first or second follicular wave at timed artificial insemination. Diameter of the ovulatory follicle and endometrial thickness were not different between treatments; however, increased pregnancy rates were observed in heifers that ovulated the dominant follicle of the second follicular wave. There was no effect of follicular wave on pregnancy rates in cows. In conclusion, the role of follicular wave on the dominant follicle, maternal environment, and subsequent pregnancy rates is not fully understood. Additional experiments need to be conducted to further elucidate the differences in developmental potential of the oocyte and maternal environment when the dominant follicle of the first and second wave are destined to become the ovulatory follicle at timed insemination.

Assisted reproductive technologies such as estrus synchronization and embryo transfer can aid producers in meeting their goals of improving genetics, calve one calf per cow per year, and wean heavy calves. Most estrus synchronization protocols follow a GnRH-PGF-GnRH sequence. Ovulation prompted by exogenous gonadotropin releasing hormone (GnRH) may cause the release of sub-mature oocytes and lead to decreased pregnancy rates. Inclusion of estradiol benzoate (EB) improved pregnancy rates in some studies. The objective of this study was to determine if EB affects blood perfusion of follicles, corpus luteum (CL), or uterus, concentrations of estradiol and progesterone, or incidence of standing estrus.

Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-06-26T17:18:17Z No. of bitstreams: 1 HellydaPereira.pdf: 924393 bytes, checksum: d85908be39f7a02e10afd3d2dd03ad43 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-26T17:18:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 HellydaPereira.pdf: 924393 bytes, checksum: d85908be39f7a02e10afd3d2dd03ad43 (MD5) Previous issue date: 2016-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão (FAPEMA) / The aim of this study was to evaluate the effect of inhibition of the Angiotensin Converting Enzyme (ECA) with enalapril maleate, on blood pressure, follicular growth, ovulation rate, utero-ovarian hemodynamics, P4/E2 concentrations and gene expression of follicular cells. Were used 31 Nelore (Bos indicus) cows. The females were synchronized with progesterone/estradiol-based protocol and then treated with enalapril maleate (0.5 mg/kg/day) or placebo (NaCl 0.9%) throughout the protocol (10 days). A half of the synchronized cows (n=17) were ultrasonographically evaluated for monitoring the follicular dynamics and utero-ovarian dopplerflowmetry. A half of animals (n=14) were submitted to follicular aspiration guided by ultrasound Ovum pick up (OPU) for measurement of the follicular hormonal synthesis and gene expression. There was no effect of enalapril on arterial pressure, in utero-ovarian hemodynamics and follicular and luteal growth. The ovulation rate (%) was significantly higher in the enalapril treated cows. The plasma and intrafollicular concentrations of progesterone and estradiol not differed significantly between treatments. The enalapril altered significantly the gene expression of enzymes P450aromatase, ECA2 and MAS receptor in the granulosa cells of dominant follicles. / O objetivo com este estudo foi avaliar o efeito da inibição da Enzima Conversora de Angiotensina (ECA), utilizando Maleato de Enalapril, na pressão arterial, crescimento folicular, taxa de ovulação, hemodinâmica útero-ovariana, concentrações de P4 e E2 e expressão gênica de células foliculares. Utilizou-se 31 fêmeas bovinas da raça Nelore (Bos indicus), que foram sincronizadas com protocolo à base de progesterona/ estradiol e, em seguida, tratadas com maleato de enalapril (0,5 mg/kg/dia) ou placebo (NaCl 0,9%) durante todo o protocolo (10 dias). Metade das fêmeas sincronizadas (n=17) foram submetidas a avaliações ultrassonográficas para acompanhamento da dinâmica folicular e dopplerfluxometria útero-ovariana. A outra metade (n=14) foi submetida à aspiração folicular guiada por ultrassom (Ovum pick up; OPU) para aferição da síntese hormonal e expressão gênica pelas células foliculares ovarianas. Não houve efeito do enalapril na pressão arterial média, na hemodinâmica útero-ovariana e no crescimento folicular e luteínico, porém a taxa de ovulação (%) foi significativamente maior no grupo Enalapril. As concentrações plasmáticas e intrafoliculares de Progesterona e Estradiol não diferiram significativamente entre tratamentos. O Enalapril alterou significativamente expressão gênica das enzimas P450aromatase, ECA2 e do receptor MAS nas células da granulosa dos folículos dominantes.

Com o objetivo de semi-quantificar a expressão gênica para receptores de gonadotrofinas nas células de folículos dominantes em animais pré-púberes (bezerras) das raças Nelore e Marchigiana e novilhas púberes da raça Nelore, buscando diferenças que possibilitem a procura de respostas para a deficiência da competência de desenvolvimento dos oócitos de animais pré-púberes que permitam a utilização destes em programas de melhoramento genético animal, foram utilizados 8 animais, sendo três bezerras Nelore, três bezerras Marchigiana, com 7 meses de idade, e duas novilhas Nelore, com 25 meses de idade. Foi realizado acompanhamento da onda folicular através de ultra-sonografia por dois meses, e os animais foram abatidos no momento que o folículo dominante apresentava diâmetro máximo (8, 10 e 14 mm, respectivamente). Folículos dominantes foram dissecados e isolados, e foi feita extração de RNA total. Foram feitas quatro reações de síntese de cDNA a partir de cada amostra. Para análise da expressão gênica semi-quantitativa, foram realizadas reações de Duplex-PCR, utilizando-se dois oligonucleotídeos iniciadores em cada reação, um para gene controle, o gapdh, e outro para o gene alvo, receptor do hormônio folículo estimulante ou receptor do hormônio luteinizante. Estas reações foram realizadas em triplicata a partir de cada fonte de cDNA de cada amostra, e os produtos foram aplicados em gel de poliacrilamida, e fotografados. Os resultados foram obtidos a partir da razão entre a intensidade da banda do gene alvo e a intensidade da banda do gene controle, e os valores médios foram analisados estatisticamente. Foi encontrada menor expressão relativa do gene do receptor de LH em bezerras da raça Nelore quando comparadas com as novilhas da raça Nelore e as bezerras da raça Marchigiana. Foi detectada a presença de um splicing alternativo para o gene do LHr, que apresentou comportamento semelhante ao gene padrão. Não foi encontrada diferença significativa na expressão do gene do FSHr entre os grupos estudados. Os resultados sugerem uma maior importância do LH nos estágios finais de desenvolvimento folicular, demonstrado aqui pela menor expressão relativa de lhr nos folículos dominantes de bezerras Nelore em relação às novilhas púberes, que pode ser um dos motivos para o baixo potencial de desenvolvimento dos oócitos destes animais após a fertilização in vitro / With the objective to semiquantify the gene expression for gonadotrophins receptors in dominant follicles in Nelore and Marchigiana prepubertal heifers and Nelore adult cows, being searched differences that make possible the search of answers for the low developmental potential of oocytes from prepubertal heifers that allow the use of these in programs of animal genetic improvement, had been used 8 animals, being three Nelore heifers, three Marchigiana heifers, with 7 months of age, and two Nelore heifers, with 25 months of age. Accompaniment of the follicular wave was carried through daily ultrasonografic exams for two months, and the animals had been slaughtered at the moment that dominant follicle presented maximum diameter (8, 10 and 14 mm, respectively). Dominant follicles had been dissected and isolated, and extraction of total RNA was performed. Four reactions of synthesis of cDNA from each sample had been made. For analysis of the semi-quantitative gene expression, reactions of Duplex-PCR had been carried through, using themselves two initiating oligonucleotídeos in each reaction, one for housekeeping gene, gapdh, and another one for the target gene, fshr and lhr. These reactions had been carried through in third copy from each source of cDNA of each sample, and the products had been applied in poliacrilamida gel electrophoresis, and photographed. The results had been gotten from the reason enter the intensity of the band of the target gene and the intensity of the band of the housekeeping gene, and the average values had been analyzed in a statistical software. Lower relative expression of lhr in Nelore heifers was found when compared with the Nelore adult cows and the Marchigiana heifers. An alternative splicing for lhr was detected, that presented similar behavior to the gene standard. Significant difference in the expression of the gene of the FSHr between the studied groups was not found. The results suggest a importance of the LH in the final periods of follicular development, demonstrated for the lower relative expression of lhr in the dominant follicles of Nelore heifers in relation to the adult cows in this study, that can after be the one of the reasons for the low developmental capacity of oocytes of these animals after in vitro fertilization

Com o objetivo de semi-quantificar a expressão gênica para receptores de gonadotrofinas nas células de folículos dominantes em animais pré-púberes (bezerras) das raças Nelore e Marchigiana e novilhas púberes da raça Nelore, buscando diferenças que possibilitem a procura de respostas para a deficiência da competência de desenvolvimento dos oócitos de animais pré-púberes que permitam a utilização destes em programas de melhoramento genético animal, foram utilizados 8 animais, sendo três bezerras Nelore, três bezerras Marchigiana, com 7 meses de idade, e duas novilhas Nelore, com 25 meses de idade. Foi realizado acompanhamento da onda folicular através de ultra-sonografia por dois meses, e os animais foram abatidos no momento que o folículo dominante apresentava diâmetro máximo (8, 10 e 14 mm, respectivamente). Folículos dominantes foram dissecados e isolados, e foi feita extração de RNA total. Foram feitas quatro reações de síntese de cDNA a partir de cada amostra. Para análise da expressão gênica semi-quantitativa, foram realizadas reações de Duplex-PCR, utilizando-se dois oligonucleotídeos iniciadores em cada reação, um para gene controle, o gapdh, e outro para o gene alvo, receptor do hormônio folículo estimulante ou receptor do hormônio luteinizante. Estas reações foram realizadas em triplicata a partir de cada fonte de cDNA de cada amostra, e os produtos foram aplicados em gel de poliacrilamida, e fotografados. Os resultados foram obtidos a partir da razão entre a intensidade da banda do gene alvo e a intensidade da banda do gene controle, e os valores médios foram analisados estatisticamente. Foi encontrada menor expressão relativa do gene do receptor de LH em bezerras da raça Nelore quando comparadas com as novilhas da raça Nelore e as bezerras da raça Marchigiana. Foi detectada a presença de um splicing alternativo para o gene do LHr, que apresentou comportamento semelhante ao gene padrão. Não foi encontrada diferença significativa na expressão do gene do FSHr entre os grupos estudados. Os resultados sugerem uma maior importância do LH nos estágios finais de desenvolvimento folicular, demonstrado aqui pela menor expressão relativa de lhr nos folículos dominantes de bezerras Nelore em relação às novilhas púberes, que pode ser um dos motivos para o baixo potencial de desenvolvimento dos oócitos destes animais após a fertilização in vitro / With the objective to semiquantify the gene expression for gonadotrophins receptors in dominant follicles in Nelore and Marchigiana prepubertal heifers and Nelore adult cows, being searched differences that make possible the search of answers for the low developmental potential of oocytes from prepubertal heifers that allow the use of these in programs of animal genetic improvement, had been used 8 animals, being three Nelore heifers, three Marchigiana heifers, with 7 months of age, and two Nelore heifers, with 25 months of age. Accompaniment of the follicular wave was carried through daily ultrasonografic exams for two months, and the animals had been slaughtered at the moment that dominant follicle presented maximum diameter (8, 10 and 14 mm, respectively). Dominant follicles had been dissected and isolated, and extraction of total RNA was performed. Four reactions of synthesis of cDNA from each sample had been made. For analysis of the semi-quantitative gene expression, reactions of Duplex-PCR had been carried through, using themselves two initiating oligonucleotídeos in each reaction, one for housekeeping gene, gapdh, and another one for the target gene, fshr and lhr. These reactions had been carried through in third copy from each source of cDNA of each sample, and the products had been applied in poliacrilamida gel electrophoresis, and photographed. The results had been gotten from the reason enter the intensity of the band of the target gene and the intensity of the band of the housekeeping gene, and the average values had been analyzed in a statistical software. Lower relative expression of lhr in Nelore heifers was found when compared with the Nelore adult cows and the Marchigiana heifers. An alternative splicing for lhr was detected, that presented similar behavior to the gene standard. Significant difference in the expression of the gene of the FSHr between the studied groups was not found. The results suggest a importance of the LH in the final periods of follicular development, demonstrated for the lower relative expression of lhr in the dominant follicles of Nelore heifers in relation to the adult cows in this study, that can after be the one of the reasons for the low developmental capacity of oocytes of these animals after in vitro fertilization

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Follicular development occurs in wave like patterns in monovulatory species and is regulated by a complex interaction of gonadotropins with local intrafollicular regulatory molecules. In the first study, induction of co-dominant follicles in vivo with FSH treatment was used to study morphological mechanisms of selection of the dominant follicle in cattle. We determined the functional status of the STAT3, AKT and MAPK signaling pathways in granulosa cells of dominant (DF), subordinate (SF) and co-dominant (co-DF) follicles. We observed that the relative mRNA abundance of MAPK1/3 and AKT1/2/3 was significantly higher in granulosa cells of SFs than in DFs. However, there was a tendency for lower abundance of phosphorylated MAPK3/1 and AKT proteins in SFs granulosa cells. Relative abundance of mRNA and phosphorylated isoform of STAT3 was higher in granulosa cells of SFs than DFs and co-DFs. In line with this, SF granulosa cells had higher mRNA levels of LIFR and IL6ST, the two receptors involved in STAT3 activation. In summary, in the first study, we showed that atresia of SFs is associated with increased expression of LIFR and IL6ST, and activation of STAT3 in granulosa cells. These molecular features were absent in co-DF2, suggesting that FSH rescues co-DF2s through activation of MAPK and AKT, and inhibition of STAT3 pathways. In the second study, we investigated the regulation of AMH and its receptor (AMHR2) during follicular deviation and the effect of FSH-induced codominant follicles on AMH production in two in vivo models. In this study, we observed that AMH mRNA expression was similar in F1 and F2 before deviation (Day 2). On the other hand, the AMH mRNA levels were higher in DFs than SFs at the expected time (Day 3) and after (Day 4) deviation. There was no statistical difference at AMHR2 mRNA expression during the deviation process. However, AMHR2 tended to be more expressed in DFs than SFs after deviation (day 4). In the co-dominant model, AMH mRNA levels in granulosa cells were similar among the follicles within the groups. However, FSH supplemented follicles had more AMH abundance than control follicles. These data were complemented by AMH protein which was higher in FSH-supplemented follicles (co-DFs) and DFs than SFs. On the other hand, AMHR2 mRNA was higher in DFs than in SFs and similar between co-DFs. Our results from the second study suggest that AMH expression is regulated during follicular deviation, being stimulated by FSH, whereas AMHR2 is downregulated during advanced atresia. / O desenvolvimento folicular inicial em espécies monovulatórias ocorre no padrão de ondas foliculares e é regulado por uma complexa interação entre gonadotrofinas e moléculas regulatórias intrafoliculares. No primeiro estudo, a indução de folículos codominantes in vivo através do tratamento com FSH foi utilizada para o estudo dos mecanismos de seleção do folículo dominante em bovinos. Foi determinado o status funcional dos padrões de sinalização STAT3, AKT e MAPK nas células da granulosa de folículos dominantes (DF), subordinados (SF) e codominantes (co-DF). Os resultados deste estudo demonstraram que comparados com células da granulosa de DFs, a expressão relativa de RNAm para MAPK1/3 e AKT1/2/3 foram significativamente maiores em células da granulosa de SFs. Contudo, houve uma tendência para menor abundância de proteína fosforilada de MAPK3/1 e AKT em células da granulosa de SFs. A abundância relativa de RNAm e a proteína fosforilada de STAT3 foram significativamente maiores em células da granulosa de SFs em comparação com DFs e co-DFs. Em linha com esses resultados, células da granulosa de SFs tiveram maiores níveis de RNAm para LIFR e IL6ST, dois receptores envolvidos na ativação do STAT3. Neste primeiro estudo concluímos que a atresia de SFs está associada ao aumento das expressões de LIFR e IL6ST e consequente ativação da STAT3 nas células da granulosa. Essas características moleculares estavam ausentes nos co-DF2s sugerindo que o FSH resgata co-DF2s através da ativação do MAPK e AKT, e inibição do padrão STAT3. No segundo estudo, investigamos em dois modelos bovinos in vivo a regulação do AMH e seu receptor (AMHR2) durante a divergência folicular e o efeito da indução de folículos codominantes com FSH na produção de AMH. Este estudo demonstrou que as expressões de RNAm para AMH foram similares em F1s e F2s antes da divergência folicular (Dia 2). Por outro lado, foram maiores em células da granulosa de DFs em relação a SFs no momento esperado (Dia 3) e após (Dia 4) a divergência folicular. Não houve diferença nos níveis de RNAm para AMHR2 durante o processo de divergência folicular. Contudo, após a divergência (Dia 4) houve uma tendência de aumento nos níveis de RNAm para AMHR2 em DFs em relação a SFs. No modelo de codominância, as expressões de RNAm para AMH foram similares entre os folículos dentro dos grupos. No entanto, folículos suplementados por FSH apresentaram maiores níveis de RNAm para AMH. Esses dados foram complementados pela abundância da proteína AMH nas células da granulosa, a qual foi maior em co-DFs e DFs em comparação a SFs. Por outro lado, os níveis de RNAm para AMHR2 foram maiores em DFs em relação a SFs e similares entre co-DFs. Neste segundo estudo, os resultados sugerem que o AMH é regulado na divergência folicular, sendo estimulado por FSH, enquanto que o AMHR2 é regulado na atresia folicular.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao Bianca.pdf: 325135 bytes, checksum: 8bbf94808bc25e72a05aba3d84bca76a (MD5) Previous issue date: 2008-11-14 / The aim of the study was to evaluate the effect of bovine somatotropin in follicular deviation of sixteen Tabapuã cows. The animals received an ear implant of progesterone and 1 mg of estradiol benzoate, IM (day 0). On day 5, the females were divided into 2 groups: GI (control, n=8) and GII (treated with 500 mg bST, n=8). On day 10, the implants were removed and injected 500 µg of PGF2α in all cows. Only cows with follicles bigger 9 mm received 300 µg of GnRH. Ultrasound examinations were performed each 12 hours. There was no statistical difference between the follicular deviation in GI (2.4 days) and GII (2,1 days). At the divergence moment, FD and FS of GI were 6.28±0.42 and 6.26±0.41 mm, respectively, and FD and FS of GII were 6.08±0.72 and 6.12±0.39 mm. The mean maximum diameter of FD after ovulation was at 110.0±8.43 hours in GI and 115.2±8.98 hours in GII. FS reached the maximum diameter at 55.0±20.0 hours in GI and 76.8±10.46 hours in GII. The mean maximum diameter reached by FD and FS in GI was 8.85±0.41 and 6.5±0.42 mm, respectively, and GII 9.83±0.63 and 6.87±0.35 mm. There was no significant difference (p> 0.05) in diameter of FD and FS, neither in growth rates (mm/12 hours) of the FD before and after the deviation, neither in the moment of follicle deviation / O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da somatotrofina bovina na divergência folicular em vacas da raça Tabapuã. Foram utilizadas 16 vacas da raça Tabapuã, inicialmente receberam implante de progestágeno auricular concomitante à aplicação IM de 1mg de benzoato de estradiol (dia 0). No dia 5, dividiram-se as fêmeas em 2 grupos: G-I (controle, n=8) e as vacas do G-II foram tratadas com 500 mg bST (n=8). No dia 10 foi feita a retirada do crestar concomitante a aplicação de 500 g de PGF2 e apenas nas vacas com folículos> 9 mm aplicação de 300 g de GnRH. Foram realizados exames ultrassonográficos a cada 12 horas por 5 dias. Não houve diferença estatística entre os momentos de divergência folicular, no G-I foi de 2,4 dias e no G-II 2,1 dias. Nesse momento o FD e FS mediram 6,28  0,42 e 6,26  0,41 mm no G-I e 6,08  0,72 e 6,12  0,39 mm no G-II. O FD atingiu diâmetro máximo após a ovulação em média 110,00 ± 8,43 horas no GI e 115,20 ± 8,98 horas no GII. Já o FS atingiu o diâmetro máximo às 55,00 ± 20,00 e 76,80 ± 10,46 horas, respectivamente. A média do diâmetro máximo atingido pelo FD e FS no GI foi respectivamente 8,85 ± 0,41 e 6,50 ± 0,42 mm e no GII foi 9,83 ± 0,63 e 6,87 ± 0,35 mm. Não houve diferença significativa (p>0,05) no diâmetro do FD e FS e nem nas taxas de crescimento (mm/12h) do FD antes e após a divergência folicular. Concluímos que a aplicação de bST não afetou o diâmetro folicular, a taxa de crescimento do FD e FS antes e após a divergência, nem tampouco, o momento da divergência folicular

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao Bianca.pdf: 325135 bytes, checksum: 8bbf94808bc25e72a05aba3d84bca76a (MD5) Previous issue date: 2008-11-14 / The aim of the study was to evaluate the effect of bovine somatotropin in follicular deviation of sixteen Tabapuã cows. The animals received an ear implant of progesterone and 1 mg of estradiol benzoate, IM (day 0). On day 5, the females were divided into 2 groups: GI (control, n=8) and GII (treated with 500 mg bST, n=8). On day 10, the implants were removed and injected 500 µg of PGF2α in all cows. Only cows with follicles bigger 9 mm received 300 µg of GnRH. Ultrasound examinations were performed each 12 hours. There was no statistical difference between the follicular deviation in GI (2.4 days) and GII (2,1 days). At the divergence moment, FD and FS of GI were 6.28±0.42 and 6.26±0.41 mm, respectively, and FD and FS of GII were 6.08±0.72 and 6.12±0.39 mm. The mean maximum diameter of FD after ovulation was at 110.0±8.43 hours in GI and 115.2±8.98 hours in GII. FS reached the maximum diameter at 55.0±20.0 hours in GI and 76.8±10.46 hours in GII. The mean maximum diameter reached by FD and FS in GI was 8.85±0.41 and 6.5±0.42 mm, respectively, and GII 9.83±0.63 and 6.87±0.35 mm. There was no significant difference (p> 0.05) in diameter of FD and FS, neither in growth rates (mm/12 hours) of the FD before and after the deviation, neither in the moment of follicle deviation / O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da somatotrofina bovina na divergência folicular em vacas da raça Tabapuã. Foram utilizadas 16 vacas da raça Tabapuã, inicialmente receberam implante de progestágeno auricular concomitante à aplicação IM de 1mg de benzoato de estradiol (dia 0). No dia 5, dividiram-se as fêmeas em 2 grupos: G-I (controle, n=8) e as vacas do G-II foram tratadas com 500 mg bST (n=8). No dia 10 foi feita a retirada do crestar concomitante a aplicação de 500 g de PGF2 e apenas nas vacas com folículos> 9 mm aplicação de 300 g de GnRH. Foram realizados exames ultrassonográficos a cada 12 horas por 5 dias. Não houve diferença estatística entre os momentos de divergência folicular, no G-I foi de 2,4 dias e no G-II 2,1 dias. Nesse momento o FD e FS mediram 6,28  0,42 e 6,26  0,41 mm no G-I e 6,08  0,72 e 6,12  0,39 mm no G-II. O FD atingiu diâmetro máximo após a ovulação em média 110,00 ± 8,43 horas no GI e 115,20 ± 8,98 horas no GII. Já o FS atingiu o diâmetro máximo às 55,00 ± 20,00 e 76,80 ± 10,46 horas, respectivamente. A média do diâmetro máximo atingido pelo FD e FS no GI foi respectivamente 8,85 ± 0,41 e 6,50 ± 0,42 mm e no GII foi 9,83 ± 0,63 e 6,87 ± 0,35 mm. Não houve diferença significativa (p>0,05) no diâmetro do FD e FS e nem nas taxas de crescimento (mm/12h) do FD antes e após a divergência folicular. Concluímos que a aplicação de bST não afetou o diâmetro folicular, a taxa de crescimento do FD e FS antes e após a divergência, nem tampouco, o momento da divergência folicular