O presente estudo está apresentado em Capítulo 1 (Divergência folicular; DF) e 2 (Capacidade ovulatória), e em cada estão incluídos dois experimentos [1 - em bubalinos (Bubalus bubalis); 2 - em zebuínos (Bos indicus)]. Os objetivos do Capítulo 1 foram determinar o momento e diâmetro na DF e avaliar o perfil das concentrações plasmáticas de FSH e LH próximo à seleção folicular. No Experimento 1, a ovulação foi considerada o dia zero (D0), a partir do qual 10 novilhas Murrah foram examinadas por ultra-sonografia (US) a cada oito horas (h) até o D4 e, posteriormente, a cada 24h até o D6. A avaliação da DF foi realizada por análise visual do gráfico de cada novilha (Ginther et al., 1996) e regressão linear segmentada (Bergfelt et al. 2003). As amostras de sangue, para dosagem de FSH e LH, foram colhidas com intervalos de 8h nas primeiras 24h pós-ovulação. A partir deste momento foram feitas colheitas a cada 4h até o D4 e após, a cada 12h até o D6. No método visual, o intervalo ovulação-DF, e o diâmetro dos folículos dominante (FD) e subordinado (FS) foram de, respectivamente, 63,2±5,7h; 7,2±0,3mm e 6,4±0,3mm (média±EPM). No método matemático estes mesmos parâmetros foram de, respectivamente, 61,9±4,9h; 7,3±0,3mm e 6,3±0,3mm. Não houve diferença entre os dois métodos de avaliação da DF (P>0,05). As concentrações plasmáticas de FSH e LH não variaram ao longo do tempo (P>0,05). No Experimento 2, 12 novilhas Nelore foram submetidas à US a cada 12h até o D5 e estes mesmos intervalos foram adotados para as colheitas de sangue (dosagem de FSH e LH). No método visual, o intervalo ovulação-DF, e os diâmetros do FD e FS foram de, respectivamente, 61,0±5,8h; 6,2±0,2mm e 5,8±0,2mm. No método matemático estes mesmos parâmetros foram de, respectivamente, 57,2±6,0h; 6,2±0,3mm e 5,9±0,3mm. Não houve diferença entre os métodos (P>0,05). As concentrações plasmáticas de FSH e LH não variaram ao longo do tempo (P>0,05). No Capítulo 2, o objetivo foi avaliar o diâmetro no qual o FD adquire capacidade ovulatória após administração de 25mg de LH. Os grupos foram formados de acordo com o diâmetro do FD no momento do tratamento com LH (7,0-8,4mm; 8,5-10,0mm e >10,0mm, em ambos os experimentos). No Experimento 1, foram utilizadas 29 novilhas bubalinas Murrah x Mediterrâneo. A partir do D3 (pós-ovulação), os exames US foram realizados a cada 12h até 48h do tratamento com LH. Nos grupos 7,0-8,4; 8,5-10,0 e >10,0mm, os diâmetros foliculares no momento da aplicação do LH foram de 7,8c±0,1; 9,3b±0,2 e 11,0a±0,3mm e as taxas de ovulação de 0,0%b (0/10); 50,0%a (5/10) e 55,6%a (5/9), respectivamente. No Experimento 2, 29 novilhas Bos indicus foram monitoradas por US a cada 24h a partir da ovulação até o tratamento com LH, e então a cada 12h durante 48h. Nos grupos 7,0-8,4; 8,5-10,0 e >10,0mm, os diâmetros foliculares no momento da aplicação do LH foram de 7,6c±0,1; 9,6b±0,1 e 10,9a±0,2mm e as taxas de ovulação de 33,3%b (3/9); 80,0%a (8/10) e 90,0%a (9/10), respectivamente. / Present study is presented in Chapter 1 (Follicle deviation; FD) and 2 (Ovulatory capacity). Each chapter includes two experiments [1 - in buffaloes (Bubalus bubalis); 2 - in zebu cattle (Bos indicus)]. In Chapter 1, aims were to determine moment and diameter deviation and to evaluate FSH and LH plasmatic profiles encompassing follicle selection. In Experiment 1, ovulation was considered day 0 (D0). From D0, 10 Murrah heifers were examined by ultrasound (US) each eight hours (h) until D4 and then, every 24h until D6. FD evaluation was performed by visual analysis (Ginther et al., 1996) and by segmented linear regression (Bergfelt et al., 2003). Blood samples were harvested each 8h in the first 24h post ovulation. From this moment blood collections were performed every 4h until D4 and after that, each 12h until D6. Interval ovulation-FD, dominant (DF) and subordinate follicle (SF) diameters, by visual method, were, respectively, 63.2±5.7h; 7.2±0.3mm and 6.4±0.3mm (mean±SEM). These same end points, by mathematical method, were, respectively, 61.9±4.9h; 7.3±0.3mm and 6.3±0.3mm. No differences between both methods of FD evaluation (P>0.05) were found. No changes in plasmatic FSH and LH levels along the time (P>0.05) were found. In Experiment 2, 12 Nelore heifers were submmited to US each 12h until D5, and these same intervals were used to blood harvests (FSH and LH profiles). Interval ovulation-FD, dominant (DF) and subordinate follicle (SF) diameters, by visual method, were, respectively, 61.0±5.8h; 6.2±0.2mm and 5.8±0.2mm. These same end points, by mathematical method, were, respectively, 57.2±6.0h; 6.2±0.3mm and 5.9±0.3mm. No differences between both methods of FD evaluation (P>0.05) were found. No changes in plasmatic FSH and LH levels along the time (P>0.05) were found. In Chapter 2, aim was to evaluate diameter in which DF acquires ovulatory capacity after administration of 25mg of LH. The animals were assigned in groups according to DF diameter at LH treatment (7.0-8.4mm; 8.5-10.0mm and >10.0mm, in both experiments). In Experiment 1, 29 Murrah x Mediterrâneo heifers were used. From D3 (post ovulation), US examinations were performed each 12h until 48h after LH treatment. Follicle diameters at LH chalenge in groups 7.0-8.4mm, 8.5-10.0mm and >10.0mm, were 7.8c±0.1, 9.3b±0.2 and 11.0a±0.3mm, and ovulation rates were 0.0%b (0/10), 50.0%SUP>a (5/10) and 55.6%a (5/9), respectively. In Experiment 2, 29 Bos indicus heifers were monitored by US every 24h from ovulation until LH chalenge, and then each 12h during 48h. Follicle diameters at LH treatment in groups 7.0-8.4mm, 8.5-10.0mm and >10.0mm, were 7.6c±0.1, 9.6b±0.1 and 10.9a±0.2mm, and ovulation rates were 33.3%b (3/9), 80.0%a (8/10) and 90.0%a (9/10), respectively

O presente estudo está apresentado em Capítulo 1 (Divergência folicular; DF) e 2 (Capacidade ovulatória), e em cada estão incluídos dois experimentos [1 - em bubalinos (Bubalus bubalis); 2 - em zebuínos (Bos indicus)]. Os objetivos do Capítulo 1 foram determinar o momento e diâmetro na DF e avaliar o perfil das concentrações plasmáticas de FSH e LH próximo à seleção folicular. No Experimento 1, a ovulação foi considerada o dia zero (D0), a partir do qual 10 novilhas Murrah foram examinadas por ultra-sonografia (US) a cada oito horas (h) até o D4 e, posteriormente, a cada 24h até o D6. A avaliação da DF foi realizada por análise visual do gráfico de cada novilha (Ginther et al., 1996) e regressão linear segmentada (Bergfelt et al. 2003). As amostras de sangue, para dosagem de FSH e LH, foram colhidas com intervalos de 8h nas primeiras 24h pós-ovulação. A partir deste momento foram feitas colheitas a cada 4h até o D4 e após, a cada 12h até o D6. No método visual, o intervalo ovulação-DF, e o diâmetro dos folículos dominante (FD) e subordinado (FS) foram de, respectivamente, 63,2±5,7h; 7,2±0,3mm e 6,4±0,3mm (média±EPM). No método matemático estes mesmos parâmetros foram de, respectivamente, 61,9±4,9h; 7,3±0,3mm e 6,3±0,3mm. Não houve diferença entre os dois métodos de avaliação da DF (P>0,05). As concentrações plasmáticas de FSH e LH não variaram ao longo do tempo (P>0,05). No Experimento 2, 12 novilhas Nelore foram submetidas à US a cada 12h até o D5 e estes mesmos intervalos foram adotados para as colheitas de sangue (dosagem de FSH e LH). No método visual, o intervalo ovulação-DF, e os diâmetros do FD e FS foram de, respectivamente, 61,0±5,8h; 6,2±0,2mm e 5,8±0,2mm. No método matemático estes mesmos parâmetros foram de, respectivamente, 57,2±6,0h; 6,2±0,3mm e 5,9±0,3mm. Não houve diferença entre os métodos (P>0,05). As concentrações plasmáticas de FSH e LH não variaram ao longo do tempo (P>0,05). No Capítulo 2, o objetivo foi avaliar o diâmetro no qual o FD adquire capacidade ovulatória após administração de 25mg de LH. Os grupos foram formados de acordo com o diâmetro do FD no momento do tratamento com LH (7,0-8,4mm; 8,5-10,0mm e >10,0mm, em ambos os experimentos). No Experimento 1, foram utilizadas 29 novilhas bubalinas Murrah x Mediterrâneo. A partir do D3 (pós-ovulação), os exames US foram realizados a cada 12h até 48h do tratamento com LH. Nos grupos 7,0-8,4; 8,5-10,0 e >10,0mm, os diâmetros foliculares no momento da aplicação do LH foram de 7,8c±0,1; 9,3b±0,2 e 11,0a±0,3mm e as taxas de ovulação de 0,0%b (0/10); 50,0%a (5/10) e 55,6%a (5/9), respectivamente. No Experimento 2, 29 novilhas Bos indicus foram monitoradas por US a cada 24h a partir da ovulação até o tratamento com LH, e então a cada 12h durante 48h. Nos grupos 7,0-8,4; 8,5-10,0 e >10,0mm, os diâmetros foliculares no momento da aplicação do LH foram de 7,6c±0,1; 9,6b±0,1 e 10,9a±0,2mm e as taxas de ovulação de 33,3%b (3/9); 80,0%a (8/10) e 90,0%a (9/10), respectivamente. / Present study is presented in Chapter 1 (Follicle deviation; FD) and 2 (Ovulatory capacity). Each chapter includes two experiments [1 - in buffaloes (Bubalus bubalis); 2 - in zebu cattle (Bos indicus)]. In Chapter 1, aims were to determine moment and diameter deviation and to evaluate FSH and LH plasmatic profiles encompassing follicle selection. In Experiment 1, ovulation was considered day 0 (D0). From D0, 10 Murrah heifers were examined by ultrasound (US) each eight hours (h) until D4 and then, every 24h until D6. FD evaluation was performed by visual analysis (Ginther et al., 1996) and by segmented linear regression (Bergfelt et al., 2003). Blood samples were harvested each 8h in the first 24h post ovulation. From this moment blood collections were performed every 4h until D4 and after that, each 12h until D6. Interval ovulation-FD, dominant (DF) and subordinate follicle (SF) diameters, by visual method, were, respectively, 63.2±5.7h; 7.2±0.3mm and 6.4±0.3mm (mean±SEM). These same end points, by mathematical method, were, respectively, 61.9±4.9h; 7.3±0.3mm and 6.3±0.3mm. No differences between both methods of FD evaluation (P>0.05) were found. No changes in plasmatic FSH and LH levels along the time (P>0.05) were found. In Experiment 2, 12 Nelore heifers were submmited to US each 12h until D5, and these same intervals were used to blood harvests (FSH and LH profiles). Interval ovulation-FD, dominant (DF) and subordinate follicle (SF) diameters, by visual method, were, respectively, 61.0±5.8h; 6.2±0.2mm and 5.8±0.2mm. These same end points, by mathematical method, were, respectively, 57.2±6.0h; 6.2±0.3mm and 5.9±0.3mm. No differences between both methods of FD evaluation (P>0.05) were found. No changes in plasmatic FSH and LH levels along the time (P>0.05) were found. In Chapter 2, aim was to evaluate diameter in which DF acquires ovulatory capacity after administration of 25mg of LH. The animals were assigned in groups according to DF diameter at LH treatment (7.0-8.4mm; 8.5-10.0mm and >10.0mm, in both experiments). In Experiment 1, 29 Murrah x Mediterrâneo heifers were used. From D3 (post ovulation), US examinations were performed each 12h until 48h after LH treatment. Follicle diameters at LH chalenge in groups 7.0-8.4mm, 8.5-10.0mm and >10.0mm, were 7.8c±0.1, 9.3b±0.2 and 11.0a±0.3mm, and ovulation rates were 0.0%b (0/10), 50.0%SUP>a (5/10) and 55.6%a (5/9), respectively. In Experiment 2, 29 Bos indicus heifers were monitored by US every 24h from ovulation until LH chalenge, and then each 12h during 48h. Follicle diameters at LH treatment in groups 7.0-8.4mm, 8.5-10.0mm and >10.0mm, were 7.6c±0.1, 9.6b±0.1 and 10.9a±0.2mm, and ovulation rates were 33.3%b (3/9), 80.0%a (8/10) and 90.0%a (9/10), respectively

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objectives of the present study was to determine the concentration of angiotensin II (AngII) in follicular fluid, to characterize the expression of renin-angiotensin system (RAS) genes in follicular cells and to verify the role of AngII in the follicular wave, using an in vivo model with intrafollicular injection and in vitro model with granulosa cells culture. AngII concentration in follicular fluid increased on dominant follicle during and after deviation. Saralasin inhibited follicular growth in all treated cows (4/4), suggesting that AngII is essential for follicular growth in 7-8mm follicles. However, intrafollicular injection of AngII affected neither follicular growth nor the pattern of follicular dynamics, which were similar to control cows. These results imply that bovine ovarian follicles contain sufficient AngII for follicle development. In another experiment, saralasin inhibitory effect was overcome by systemic FSH supplementation, suggesting that AngII is essential to follicular growth during FSH-low dependence stages. The injection of AngII or angiotensin receptor type 2 (AGTR2) agonist in second largest follicle prevented the expected atresia of subordinate follicle and the treated follicle grew at the same rate as the dominant during 24h. To understand why a single intrafollicular injection of AngII antagonist induces follicular atresia, dominant follicle was injected with saralasin or saline and the cows were ovariectomized 24h later. The inhibition of AngII action decreased estradiol concentration in follicular fluid and abundance of mRNA encoding aromatase (CYP19), 3!-hydroxysteroid dehydrogenase (3!HSD), LH receptor, SerpinE2 and cyclinD2 in granulosa cells. On granulosa cell culture, AngII increased CYP19 expression just in the presence of FSH. Taken together, these results show that AngII is essential for follicular growth, and plays important role in regulating genes involved in granulosa cell proliferation (cyclinD2) and differentiation (LHr, aromatase, 3!HSD), which are necessary for development of the dominant follicle. In conclusion, these data suggest that AngII signaling is involved in follicle growth and dominance in cattle. / Os objetivos do presente trabalho foram determinar a concentração de angiotensina II (AngII) no fluido folicular, caracterizar a expressão dos genes do sistema renina-angiotensina (RAS) nas células foliculares e verificar o papel da AngII na onda folicular, utilizando um modelo in vivo de injeção intrafolicular e in vitro de cultivo de células da granulosa. A concentração de AngII no fluido folicular aumentou no folículo de maior diâmetro, durante e após a divergência folicular. A administração intrafolicular de saralasina, um bloqueador competitivo dos receptores de AngII, inibiu o crescimento folicular em todas as vacas injetadas (4/4), demonstrando que a AngII é essencial para o crescimento de folículos de 7-8mm de diâmetro. Contudo, a injeção de AngII não afetou o crescimento folicular, sugerindo que os folículos contém AngII suficiente para o seu desenvolvimento. Em um outro experimento, a administração sistêmica de FSH reverteu o efeito inibitório da saralasina, sugerindo que a AngII é indispensável para o desenvolvimento folicular após o período de dependência ao FSH. A injeção, no segundo maior folículo, de AngII ou CGP42122 (agonista AGTR2) preveniu a regressão esperada do folículo subordinado, demonstrando que a AngII desempenha um papel fundamental na seleção do folículo dominante. Para determinar o mecanismo de atresia induzido por saralasina, o folículo dominante de cada vaca foi injetado com saralasina ou solução salina e os animais foram ovariectomizados após 24 horas. A inibição de AngII diminuiu a concentração de estradiol no fluido folicular e a abundância de mRNA que codifica para os genes aromatase (CYP19), 3! HSD, LHr, Serpin E2 e ciclina D2 nas células da granulosa. Além disso, em cultivo primário de células da granulosa, a AngII, somente na presença do FSH, induziu um aumento na expressão de aromatase. Em resumo, os resultados demonstram que a sinalização da AngII é essencial para o crescimento folicular, regulando genes envolvidos com a proliferação (ciclina D2) e diferenciação (LHr, aromatase, 3!HSD) das células da granulosa os quais são necessários para o desenvolvimento do folículo dominante. Em conclusão, os resultados sugerem que a AngII está envolvida no desenvolvimento e dominância folicular em bovinos.

This thesis aims to contribute to the knowledge of the regulation and function of the natriuretic peptide (NP) system during follicular dominance, ovulation, oocyte meiosis resumption and cumulus cells expansion in cattle. In the first study, the NP system was characterized in bovine COC. Moreover, NPPA and NPPC increased cGMP levels in cumulus cells and oocyte after 3 hours of culture, preventing the increase of cAMP in oocyte in the presence of forskolin. In the second study, using in vivo experimental models, none of the three NPs were detected in the granulosa cells during follicular deviation in cattle. However, NPR-3 is highly expressed at the expected time of follicular deviation, and all three NP receptors are expressed in granulosa cells of the dominant follicle. FSH injection maintained the expression of the three NP receptors after follicular deviation in the largest and second largest follicles. However, only NPR-1 mRNA decreased after inhibition of estradiol receptors by intrafollicular injection of fulvestrant. In the granulosa cells of pre ovulatory follicles, only NPPB mRNA was not detected. Nevertheless, after the administration of a GnRH analog, NPPC mRNA expression increased within 3 and 6 hours and NPR-3 mRNA gradually decreased after 3 hours. NPPA and NPR-2 mRNA was not regulated by GnRH, but NPR-1 mRNA increased at 24 hours after GnRH. In the third study, abundance of mRNA for NPR-1, NPR-2 and NPR-3 was not altered by LH and/or AG1478 (EGFr inhibitor) after 6 hours of culture in vitro. Also, LH stimulated NPPC mRNA expression and AG1478 prevented this increase in granulosa cultured in vitro. To confirm the in vitro results, was used an in vivo model and observed that the NPPC mRNA expression increased and NPR-3 mRNA decreased in granulosa cells after 6 hours of GnRH challenge. However, intrafollicular injection of AG1478 prevented the effect of GnRH on NPPC and NPR-3 mRNA expression. In addition, it we obseved that ANP in association with LH stimulated COX2 expression in comparison with LH alone or absence of this gonadotropin. It was observed that the EGFr blockade in vivo did not prevent ovulation in cattle. In the fourth study, it was observed that NPR-3 mRNA expression decreases in bovine cumulus cells after treatment of COCs with FSH or FSH+LH via EGFr. Forskolin, an adenylate cyclase stimulator, also decreased NPR-3 mRNA expression in cumulus cells. Expression of NPR-1 mRNA was very low in bovine cumulus cells and NPR-2 mRNA was not regulated in the proposed treatments. In addition, it was observed that the activation of NPR-3 by a specific agonist (cANP4-23) did not interfere in bovine oocyte nuclear maturation, but it inhibited the complete expansion of cumulus cells FSH+LH-stimulated. Additionally, the association of cANP4-23 with CNP further decreased cumulus cell expansion. / Esta tese tem como objetivo contribuir para o conhecimento da regulação e função do sistema dos peptídeos natriuréticos (NP) durante a dominância folicular, ovulação, retomada da meiose oocitária e expansão das células do cumulus em bovinos. No primeiro estudo, caracterizou-se o sistema NP no CCO de bovino e foi demonstrado que o NPPA e o NPPC aumentam os níveis de cGMP no cumulus e no oócito após 3 horas de cultivo, impedindo o aumento de cAMP no oócito na presença de forskolin. No segundo estudo, utilizando modelos experimentais in vivo, os três NPs não foram detectados nas células da granulosa durante a divergência folicular em bovinos. Contudo, demonstrou-se que o NPR-3 apresenta maior expressão no momento esperado da divergência folicular, sendo que após este momento os três receptores NPs apresentavam alta expressão nas células da granulosa do folículo dominante. A administração de FSH manteve a expressão dos três receptores NPs após a divergência folicular no maior e segundo maior folículo. Porém, somente a expressão do NPR-1 diminui após a inibição dos receptores de estradiol pela injeção intrafolicular de fulvestrant. Nas células da granulosa de folículos pré ovulatórios, somente o NPPB não foi detectado. De modo que, após a administração de um análogo de GnRH, a expressão de NPPC aumentou em 3 e 6 horas e a de NPR-3 gradualmente diminuiu após 3 horas. NPPA e NPR-2 não foram regulados pelo GnRH, e o NPR-1 teve a expressão aumentada somente 24 horas após o GnRH. No terceiro estudo, a abundância de mRNA para NPR-1, NPR-2 e NPR- 3 nas células da granulosa não foi alterada por LH e/ou por AG1478 (inibidor do EGFr) após 6 horas de cultivo in vitro. Também em cultivo in vitro de células da granulosa, o LH estimulou a expressão de NPPC, sendo que o AG1478 impediu este aumento. Como forma de comprovar esses resultados in vitro, utilizamos um modelo in vivo e observamos que a expressão do NPPC aumentou e a do NPR-3 diminuiu após 6 horas do desafio com GnRH, nas células da granulosa. De maneira que, a injeção intrafolicular de AG1478 preveniu o efeito do GnRH sobre a expressão do NPPC e NPR-3. Além disso, foi demonstrado que o ANP em associação com o LH estimulou a expressão de COX2 em comparação com LH isoladamente ou ausência desta gonadotrofina. Também foi demonstrado que o bloqueio do EGFr in vivo não foi suficiente para bloquear a ovulação em bovinos. No quarto estudo, foi observado que a expressão do NPR-3 diminui nas células do cumulus pelo tratamento dos CCOs com FSH ou FSH+LH via EGFr em bovinos. Forskolin (estimulador adenilato ciclase) também induziu a diminuição da expressão do NPR-3. A expressão do NPR-1 foi muito baixa no cumulus de bovino e o NPR-2 não apresentou regulação nos tratamentos propostos. Além disso, foi observado que a ativação do NPR-3 por um agonista específico (cANP4-23) não interferiu na maturação nuclear oocitária em bovinos, porém, inibiu a completa expansão das células do cumulus estimulada por FSH+LH. De maneira que, a associação do cANP4-23 com CNP potencializou a inibição da expansão das células do cumulus.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Endocrine and locally produced factors are involved in the selection of the dominant ovarian follicle in the cow. Studies have been conducted to elucidate the precise mechanism by which, in most cases, only one follicle becomes dominant in monovulatory species. A better understanding of the factors involved in this period can serve as a basis to better exploit the reproductive potential in cattle. A complete knowledge of these factors remains unknown. The receptor peroxisome proliferator activated gamma (PPARγ, also called NR1C3) is a member of the PPAR nuclear receptors family. This family of receptors has been shown to be expressed in reproductive tissues of different species and their role in steroidigenesis and regulation of apoptosis. However, involvement of this receptor in folliculogenesis in cattle remains unknown. This study aimed to evaluate the role of PPARγ during the period of follicle deviation in cattle. At first, the PPARγ mRNA expression was evaluated in granulosa cells of the two largest growing follicles, before (day 2 of the follicular wave), during (day 3) and after (day 4) the follicle deviation period. The mRNA abundance was unchanged during follicular growth in both granulosa and theca cells. In a second experiment, the PPARγ agonist (TZD) was injected intrafollicularly in the dominant follicle in vivo in cows. The agonist caused follicular atresia, demonstrating that the activation of PPARγ in the dominant follicle prevent follicle growth. To determine the mechanism underlying the effects of PPARγ in granulosa cells in vivo, the dominant follicle of each cow was injected with PBS or TZD and the animals were ovariectomized 24 hours post injection. The stimulation of the PPARγ in the dominant follicle reduces the abundance of mRNA encoding the aromatase (CYP19A1) gene, the enzyme responsible for converting androgens to estradiol in granulosa cells and important for follicular development. In conclusion, the increased signaling of PPARγ downregulates aromatase and induces follicular atresia in cattle. / Fatores endócrinos e fatores produzidos localmente estão envolvidos na seleção do folículo dominante. Estudos têm sido realizados no intuito de elucidar o completo mecanismo pelo qual, na maioria das vezes, apenas um folículo torna-se dominante nas espécies monovulatórias. O melhor entendimento dos fatores envolvidos neste período pode servir como base para melhor explorar o potencial reprodutivo dos bovinos. No entanto, o completo entendimento desses fatores permanece desconhecido. O receptor ativado por proliferador de peroxissomo gama (PPARγ, também conhecido como NR1C3) pertence à família de receptores nucleares PPAR e tem sido demonstrado a expressão dessa família de receptores no tecido reprodutivo de diferentes espécies, bem como sua atuação na esteroidogênese e regulação da apoptose. No entanto, pouco se sabe sobre o envolvimento deste receptor na foliculogênese em bovinos. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo investigar o papel e a regulação do PPARγ durante o período da divergência folicular na espécie bovina. Em um primeiro momento, foi avaliada a expressão de RNAm do PPARγ nas células da granulosa dos dois maiores folículos em crescimento, antes (dia 2 da onda folicular), durante (dia 3) e após (dia 4) o período da divergência folicular. Observou-se que a expressão deste receptor permanece inalterada durante o crescimento folicular nas células da teca e granulosa. Em um segundo experimento, a injeção intrafolicular com o agonista do receptor em estudo (TZD) no folículo dominante ocasionou a atresia dos folículos injetados. Assim, a ativação do PPARγ no folículo dominante impede o crescimento folicular. Para determinar o efeito da ativação do PPARγ, o folículo dominante de cada vaca foi injetado com TZD ou PBS e os animais foram ovariectomizados após 24 horas. A estimulação do PPARγ no folículo dominante diminui a abundância de RNAm que codifica para o gene aromatase (CYP19A1), enzima responsável pela conversão de andrógenos em estradiol nas células da granulosa e importante para o desenvolvimento folicular. Em conclusão, o aumento da sinalização do PPARγ diminui a expressão da enzima aromatase e induz atresia folicular em bovinos.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao Bianca.pdf: 325135 bytes, checksum: 8bbf94808bc25e72a05aba3d84bca76a (MD5) Previous issue date: 2008-11-14 / The aim of the study was to evaluate the effect of bovine somatotropin in follicular deviation of sixteen Tabapuã cows. The animals received an ear implant of progesterone and 1 mg of estradiol benzoate, IM (day 0). On day 5, the females were divided into 2 groups: GI (control, n=8) and GII (treated with 500 mg bST, n=8). On day 10, the implants were removed and injected 500 µg of PGF2α in all cows. Only cows with follicles bigger 9 mm received 300 µg of GnRH. Ultrasound examinations were performed each 12 hours. There was no statistical difference between the follicular deviation in GI (2.4 days) and GII (2,1 days). At the divergence moment, FD and FS of GI were 6.28±0.42 and 6.26±0.41 mm, respectively, and FD and FS of GII were 6.08±0.72 and 6.12±0.39 mm. The mean maximum diameter of FD after ovulation was at 110.0±8.43 hours in GI and 115.2±8.98 hours in GII. FS reached the maximum diameter at 55.0±20.0 hours in GI and 76.8±10.46 hours in GII. The mean maximum diameter reached by FD and FS in GI was 8.85±0.41 and 6.5±0.42 mm, respectively, and GII 9.83±0.63 and 6.87±0.35 mm. There was no significant difference (p> 0.05) in diameter of FD and FS, neither in growth rates (mm/12 hours) of the FD before and after the deviation, neither in the moment of follicle deviation / O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da somatotrofina bovina na divergência folicular em vacas da raça Tabapuã. Foram utilizadas 16 vacas da raça Tabapuã, inicialmente receberam implante de progestágeno auricular concomitante à aplicação IM de 1mg de benzoato de estradiol (dia 0). No dia 5, dividiram-se as fêmeas em 2 grupos: G-I (controle, n=8) e as vacas do G-II foram tratadas com 500 mg bST (n=8). No dia 10 foi feita a retirada do crestar concomitante a aplicação de 500 g de PGF2 e apenas nas vacas com folículos> 9 mm aplicação de 300 g de GnRH. Foram realizados exames ultrassonográficos a cada 12 horas por 5 dias. Não houve diferença estatística entre os momentos de divergência folicular, no G-I foi de 2,4 dias e no G-II 2,1 dias. Nesse momento o FD e FS mediram 6,28  0,42 e 6,26  0,41 mm no G-I e 6,08  0,72 e 6,12  0,39 mm no G-II. O FD atingiu diâmetro máximo após a ovulação em média 110,00 ± 8,43 horas no GI e 115,20 ± 8,98 horas no GII. Já o FS atingiu o diâmetro máximo às 55,00 ± 20,00 e 76,80 ± 10,46 horas, respectivamente. A média do diâmetro máximo atingido pelo FD e FS no GI foi respectivamente 8,85 ± 0,41 e 6,50 ± 0,42 mm e no GII foi 9,83 ± 0,63 e 6,87 ± 0,35 mm. Não houve diferença significativa (p>0,05) no diâmetro do FD e FS e nem nas taxas de crescimento (mm/12h) do FD antes e após a divergência folicular. Concluímos que a aplicação de bST não afetou o diâmetro folicular, a taxa de crescimento do FD e FS antes e após a divergência, nem tampouco, o momento da divergência folicular

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao Bianca.pdf: 325135 bytes, checksum: 8bbf94808bc25e72a05aba3d84bca76a (MD5) Previous issue date: 2008-11-14 / The aim of the study was to evaluate the effect of bovine somatotropin in follicular deviation of sixteen Tabapuã cows. The animals received an ear implant of progesterone and 1 mg of estradiol benzoate, IM (day 0). On day 5, the females were divided into 2 groups: GI (control, n=8) and GII (treated with 500 mg bST, n=8). On day 10, the implants were removed and injected 500 µg of PGF2α in all cows. Only cows with follicles bigger 9 mm received 300 µg of GnRH. Ultrasound examinations were performed each 12 hours. There was no statistical difference between the follicular deviation in GI (2.4 days) and GII (2,1 days). At the divergence moment, FD and FS of GI were 6.28±0.42 and 6.26±0.41 mm, respectively, and FD and FS of GII were 6.08±0.72 and 6.12±0.39 mm. The mean maximum diameter of FD after ovulation was at 110.0±8.43 hours in GI and 115.2±8.98 hours in GII. FS reached the maximum diameter at 55.0±20.0 hours in GI and 76.8±10.46 hours in GII. The mean maximum diameter reached by FD and FS in GI was 8.85±0.41 and 6.5±0.42 mm, respectively, and GII 9.83±0.63 and 6.87±0.35 mm. There was no significant difference (p> 0.05) in diameter of FD and FS, neither in growth rates (mm/12 hours) of the FD before and after the deviation, neither in the moment of follicle deviation / O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da somatotrofina bovina na divergência folicular em vacas da raça Tabapuã. Foram utilizadas 16 vacas da raça Tabapuã, inicialmente receberam implante de progestágeno auricular concomitante à aplicação IM de 1mg de benzoato de estradiol (dia 0). No dia 5, dividiram-se as fêmeas em 2 grupos: G-I (controle, n=8) e as vacas do G-II foram tratadas com 500 mg bST (n=8). No dia 10 foi feita a retirada do crestar concomitante a aplicação de 500 g de PGF2 e apenas nas vacas com folículos> 9 mm aplicação de 300 g de GnRH. Foram realizados exames ultrassonográficos a cada 12 horas por 5 dias. Não houve diferença estatística entre os momentos de divergência folicular, no G-I foi de 2,4 dias e no G-II 2,1 dias. Nesse momento o FD e FS mediram 6,28  0,42 e 6,26  0,41 mm no G-I e 6,08  0,72 e 6,12  0,39 mm no G-II. O FD atingiu diâmetro máximo após a ovulação em média 110,00 ± 8,43 horas no GI e 115,20 ± 8,98 horas no GII. Já o FS atingiu o diâmetro máximo às 55,00 ± 20,00 e 76,80 ± 10,46 horas, respectivamente. A média do diâmetro máximo atingido pelo FD e FS no GI foi respectivamente 8,85 ± 0,41 e 6,50 ± 0,42 mm e no GII foi 9,83 ± 0,63 e 6,87 ± 0,35 mm. Não houve diferença significativa (p>0,05) no diâmetro do FD e FS e nem nas taxas de crescimento (mm/12h) do FD antes e após a divergência folicular. Concluímos que a aplicação de bST não afetou o diâmetro folicular, a taxa de crescimento do FD e FS antes e após a divergência, nem tampouco, o momento da divergência folicular