ALMEIDA, R. F. Estudo químico de rizomas de Alpinia zerumbet: inibidores da enzima de conversão da angiotensina, com potencial antioxidante e de inibição da acetilcolinesterase. 2012. 87 f. Dissertação (Mestrado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2014-11-28T19:27:31Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_rfalmeida.pdf: 3834526 bytes, checksum: 0c52b9700eac108b385e861fb1f1f7ca (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-12-21T18:33:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_rfalmeida.pdf: 3834526 bytes, checksum: 0c52b9700eac108b385e861fb1f1f7ca (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-21T18:33:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_rfalmeida.pdf: 3834526 bytes, checksum: 0c52b9700eac108b385e861fb1f1f7ca (MD5) Previous issue date: 2012 / Hypertension is one of the most common diseases in the world, is a chronic disease in which high blood pressure can affect health. The angiotensin I converting enzyme (ACE) can increase blood pressure through the conversion of angiotensin I to the potent vasoconstrictor, angiotensin II. Thus, inhibition of ACE activity is considered a useful therapeutic approach to combat hypertension. Alpinia zerumbet, a herb abundant in northeastern Brazil, is commonly used in folk medicine due to its diuretic and hypotensive properties. Moreover, several studies reported for this species antihypertensive activity. Thus, Alpinia zerumbet can be an important source of ACE inhibitors. Knowing this, we decided to investigate the extracts of the rhizomes of this species in the search for compounds ACE inhibitors. Prospecting chemical hexane extract of the rhizome allowed the isolation of five substances: A stilbene, named (E) -3,5-dimethoxystilbene, unprecedented in the species in this study, a labdane diterpene skeleton called (E) -15.16-bisnorlabda- 8,11-diene-13-one; one chalcone called 2’,4’-dihydroxy-6’-methoxy-3’-(3’’-methyl-6’’- methyl - ethyl -2’’-cyclohexenyl) chalcone; a steroid called β-sitosterol, commonly found in plants, and an aromatic hydrocarbon class kavapirone, called 5,6- dehidrokawain. In the structural determination of individual compounds, spectrometric techniques were employed dimensional analysis [nuclear magnetic resonance (NMR) 1H and 13C and two dimensional techniques (1H-1H COSY, HSQC, HMBC, NOESY). Inhibition angiotensin converting enzyme, antioxidant potential, inhibition of acetilcolinestarase and larvicidal tests of ethanol and hexane extracts of the rhizomes of Alpinia zerumbet were tested. The two extracts showed potential for inhibition of angiotensin converting enzyme and antioxidant potential. Only the hexane extract showed larvicidal activity with LC50 823.1 ppm. None of the extracts studied showed potential inhibition of the enzyme acetylcholinesterase. / A hipertensão, uma das doenças mais comuns em todo o mundo, é uma doença crônica onde a pressão sanguínea elevada pode afetar a saúde. A enzima conversora de angiotensina I (ECA) pode aumentar a pressão arterial através da conversão da angiotensina I no potente vasoconstritor angiotensina II. Sendo assim, a inibição da atividade da ECA é considerada uma abordagem terapêutica útil para combater a hipertensão. Alpinia zerumbet, uma planta aromática abundante no nordeste do Brasil, é comumente utilizada na medicina popular devido suas propiedades diuréticas e hipotensivas. Além disso, vários estudos relatam atividade antihipertensiva para esta espécie. Dessa forma, Alpinia zerumbet pode ser uma importante fonte de inibidores de ECA. Sabendo disso, resolveu-se investigar os extratos dos rizomas desta espécie na busca de compostos inibidores de ECA. A prospecção química do extrato hexânico do rizoma permitiu o isolamento de cinco substâncias: Um estilbeno denominado (E)-3,5-dimetoxiestilbeno, inédito na espécie em estudo; um diterpeno de esqueleto labdano denominado (E)-15,16-bis-norlabda-8,11-dieno-13-ona; uma chalcona denominada 2’,4’-dihidroxi-6’-metoxi-3’-(3’’-metil-6’’-metil-etil-2’’-ciclohexenil)chalcona; um esteróide denominado β-sitosterol, comumente encontrado em plantas; e um hidrocarboneto aromático da classe kavapirona denominado 5,6-dehidrokawain. Na determinação estrutural dos compostos isolados, foram empregadas técnicas espectrométricas de análise unidimensionais [ressonância magnética nuclear (RMN) de 1H e 13C, e técnicas bidimensionais (1H-1H-COSY, HSQC, HMBC, NOESY). Também foram realizados os testes de inibição da enzima conversora de angiotensina, antioxidante, de inibição da enzima acetilcolinestarase e larvicida dos extratos hexânicos e etanólicos dos rizomas de Alpinia zerumbet. Os dois extratos apresentaram potencial de inibição da enzima conversora de angiotensina e antioxidante. Somente o extrato hexânico apresentou atividade larvicida, com CL50 823,1 ppm. Nenhum dos extratos em estudo apresentou potencial de inibição da enzima acetilcolinesterase.

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / La hipertrofia cardiaca es una respuesta adaptiva a distintos estímulos que incrementan la demanda contráctil e involucran un aumento en la masa y tamaño del corazón. Se distinguen dos tipos de hipertrofia: fisiológica, de carácter reversible; y patológica, irreversible y generada por distintos estímulos, entre ellos la norepinefrina (NE). Por otro lado, la mitocondria es el organelo responsable de generar la energía necesaria para la contracción del cardiomiocito, formando una red dinámica cuya morfología y función dependen de procesos de fusión y fisión, procesos que son afectados en la hipertrofia inducida por NE, produciéndose un fenotipo mitocondrial fisionado. Angiotensina (1-9), es un péptido del sistema renina-angiotensina-aldosterona no canónico, con propiedades anti-hipertróficas frente al estimulo NE. Por lo tanto, el objetivo de este estudio consistió en determinar si Angiotensina-(1-9) modula la dinámica mitocondrial del cardiomiocito y previene la fisión mitocondrial inducida por el estimulo pro-hipertrófico de NE. Los resultados mostraron que Angiotensina (1-9) 100 μM promueve un aumento en la fusión mitocondrial a los tiempos 1, 3, 6 y 24 h, asociándose con una disminución en la migración de Drp1 hacia la mitocondria, sin modificar la masa de las proteínas relacionadas con la fusión, OPA1 y Mfn2. La preincubación por 6 h con Angiotensina (1-9) previno la fisión mitocondrial dependiente de NE (10 μM por 24 h). La preincubación con el antagonista del receptor MAS A779 no afectó la fusión mitocondrial inducida por angiotensina-(1-9). La pre-incubación con el antagonista del receptor AT2 PD 123.319 bloqueó la fusión mitocondrial inducida por angiotensina-(1-9). Por lo tanto, angiotensina (1-9) modula la dinámica mitocondrial de cardiomiocitos neonatos vía receptor AT2, fusionando y previniendo la fisión producida por el estimulo pro-hipertrófico NE / Cardiac hypertrophy is an adaptive response to several stimuli that raises contractile myocardial demand and involves increases in mass and size. Heart hypertrophy is classified in; a) physiological one (reversible) and b) pathological which is irreversible and generated by stimuli, including norepinephrine (NE). On the other hand, mitochondria are the organelle responsible for the generation of the necessary energy for cardiomyocyte contraction, forming a dynamic network whose morphology and function depend on fusion and fission processes. We have previously shown that NE induces cardiac hypertrophy with a concomitant mitochondrial fission.Angiontensin (1-9) is a novel anti-hypertrophic peptide of the non-classical renin-angiotensin system. The aim of this study was to determine whether Angiotensin (1-9) modulates mitochondrial dynamics and prevents NE-induced mitochondrial fission. The results showed that treatment or cardiomyocytes with Angiotensin (1-9) (100 M for 1 to 24 h) produced fusion associated with an decrease in Drp1 migration to mitochondria, without changes in the levels of the fusion proteins Opa1 and Mfn2. Parallel, mitochondrial fission generated by NE 10 μM 24 h was prevented by the pre-incubation (6 h) of cardiomyocytes with Angiotensin (1-9). Pre-incubation with MAS antagonist A779 did not affect the mitochondrial fusion induced by Angiotensin-(1-9). Pre-incubation with AT2 receptor antagonist PD 123.319 prevented mitochondrial fusion induced by Angiotensin-(1-9). In summary, Angiotensin-(1-9) modulates cardiomyocyte mitochondrial dynamics through AT2 receptor, fusing and preventing NE-induced mitochondrial fission / Fondecyt, Fondef, Mecesup

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-29 / Os produtos de reações e os mecanismos envolvidos na radiólise de macromoléculas de relevância fisiológica têm sido objetos de diversos estudos. Estes fatores são conhecidos por atuarem em diversos tipos de patologias no organismo humano. Como uma das fontes de geração de radicais livres em solução pode ser obtida pela ação da radiação ionizante, decidiu-se nesta tese, avaliar-se o efeito da irradiação de alguns peptídeos de importância fisiológica. A parte preponderante deste trabalho envolveu o estudo dos peptídeos vasoativos angiotensina II (DRVYIHPF, AngII) e bradicinina (RPPGFSPFR, BK). Foram realizadas irradiações com doses variando entre 1 e 15 kGy, nas quais foram observadas uma progressiva degradação de suas estruturas em função da dose de radiação. Notou-se neste processo, a formação de subprodutos que foram purificados e caracterizados por diferentes procedimentos experimentais dentre os quais: HPLC, análise de aminoácidos e espectrometria de massa, e sequenciamento de aminoácidos. Além destes, foram também realizados ensaios de dicroísmo circular (CD) e atividade biológica (contrações musculares). No estudo da AngII, foram isolados três análogos: Tyr 8 -AngII, m-Tyr 8 -AngII, e Lys 6 -AngII. Quanto ao estudo da BK, notou-se novamente a transformação do resíduo de Phe em Tyr e m-Tyr, mas apenas ocorrendo com o resíduo de Phe 8 e não Phe 5 da estrutura da BK. Este dado, de grande relevância, indica que o efeito da radição é sequência dependente. Vale a pena ressaltar que não se observou alterações simultâneas tanto na AngII quanto na BK. Os produtos isolados sempre contiveram apenas uma destas alterações mencionadas. Além destes peptídeos, foram estudados em caráter preliminar, a angiotensina I (DRVYIHPFHL, AngII, o hormônio liberador de melanócito (acetil-SYSMEHFRWGKV- amida, α-MSH), e dois análogos marcados com o spin label TOAC (ácido 2,2,6,6- tetrametilpiperidina-1-oxil-4-amino-4-carboxílico) na posição 1 (AngII) e na posição 3 (BK). Em comum, todos os peptítdeos mostraram uma degradação não linear e em função da dose de radiação. Observou-se também um acréscimo de massa de 16 Da em relação ao peptídeo nativo nos subprodutos encontrados nos peptídeos que apresetaram a formação de subprodutos. Foi também realizado um estudo com soluções equimolares de L-aminoácidos livres no qual foi observado apenas um decréscimo dose-dependente dos aminoácidos Cys e Met, nas condições estudadas. Em conclusão, este tipo de projeto de pesquisa parece ser promissor no sentido de poder-se continuar com os estudos já iniciados e que poderão levar a um esclarecimento mais aprofundado do efeito da irradiação e, por conseguinte, do mecanismo de ação dos radicais livres gerados em solução. Estes achados poderão ser, portanto, relevantes para estudos de diferentes tipos de processos fisiológicos que ocorrem no organismo animal. Além do mais, esta estratégia experimental desenvolvida no presente estudo, pode ser de grande relevância para a produção de novas drogas terapêuticas, pois como foi observado, podem se gerar derivados peptídicos não usuais e, portanto de difícil obtenção pelos métodos convencionais envolvendo a síntese de peptídeos (e por extensão, de proteínas) / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Memoria para optar al Título Profesional de Químico Farmacéutico / La hipertensión arterial es uno de los factores de riesgo cardiovascular más importante en todo el mundo industrializado. En las últimas décadas, la vía de señalización RhoA/ROCK ha mostrado tener un rol clave en la hipertensión arterial al ser responsable de la sensibilización del calcio en células musculares lisas y estimular diversos procesos celulares, entre los que se incluye al crecimiento, diferenciación, proliferación y migración celular entre otros. En este trabajo se planteó como hipótesis que “La vía RhoA/ROCK está sobreactivada en ratas hipertensas, generando una mayor fosforilación de las proteínas Smad2/3 en tejido de aorta, ventrículo izquierdo y riñón, resultado que se ve revertido por la administración de candesartán y/o fasudil”. Los objetivos de este estudio fueron: a) Investigar los efectos antihipertensivos de fasudil y/o candesartan el modelo de hipertensión arterial experimental por sobrecarga de volumen independiente de renina y b) estudiar si fasudil y/o candesartan modifican las formas totales y fosforiladas de Smad2/3 en aorta, ventrículo izquierdo y riñón de ratas hipertensas y controles. Para responder a estos objetivos, ratas Sprague Dawley se uninefrectomizaron y trataron con DOCA (100 mg/kg/semana) más dieta hipersódica (NaCl 1%; KCl 0,4%) por 6 semanas para generar hipertensión arterial por sobrecarga de volumen. Fasudil (50 mg/kg/día) y candesartán (10 mg/kg/día) se administraron por gavage desde la tercera semana de hipertensión. Al término del tratamiento, se determinó presión sistólica y peso corporal. Los animales se sacrificaron, extrayéndose la aorta toraco-abdominal, corazón y riñón. Estos tejidos se pesaron y se almacenaron a -80°C hasta su procesamiento. La fracción soluble de extractos tisulares se utilizaron para separar las proteínas por electroforesis en geles de poliacrilamina-SDS y detectar las formas fosforiladas y totales de Smad2/3 por Western blot. Los resultados mostraron que las ratas experimentaron un aumento del 42% en la presión arterial sistólica debido a la administración de DOCA-sal: 164 vs 118 mmHg. El peso disminuyó significativamente en las ratas Doca-sal mientras que las masas cardiaca y pulmonar relativa aumentaron significativamente (p<0,01). Fasudil y candesartán redujeron la presión arterial significativamente (fasudil: 111 mmHg, candesartán: 125 mmHg). Sin embargo, no se observó sinergia al asociar fasudil con candesartán. Solo candesartán pero no fasudil atenuaron el efecto de la hipertensión arterial sobre el peso corporal y las masas cardiaca y pulmonar relativas. Por otro lado, los niveles de las formas fosforiladas de Smad2/3 no cambiaron por acción de la administración DOCA/sal ni tampoco por efectos de fasudil o candesartán ni ambos lograron disminuir la fosforilación de Smad2/3 en aorta, ventrículo izquierdo y riñón. Los niveles de relativos de las formas totales de Smad2/3 tampoco se modificaron en estos grupos y tejidos, excepto en riñón (p<0,05). Se concluye de este trabajo de tesis que fasudil y candesartán redujeron el aumento de la presión arterial inducida por la administración de DOCA/sal, pero su asociación no logró un efecto sinérgico. Candesartán pero no fasudil atenuó la hipertrofia cardiaca inducida por la sobrecarga de presión. Los factores transcripcionales Smad2/3 no se activan en este modelo de hipertensión experimental ni tampoco por acción de fasudil o candesartán en los tejidos blancos estudiados / The arterial hypertension is one the most important cardiovascular risk factor in the industrialized world. In the last decades, the RhoA/ROCK signaling pathway has a key role in the arterial hypertension. This pathway is responsible for calcium sensitization in smooth muscle cells but it also regulate cell growth, differentiation, proliferation and migration in these cells. We hypothesized here that “The RhoA/ROCK pathway is upregulated in hypertensive rats, promoting and activation of Smad2/3 transcription factor in aorta, left ventricle and kidney, effect that is prevented by fasudil and/or candesartan”. The specific aims were: a) To investigate the effect of fasudil and/or candesartan on systolic blood pressure and cardiac hypertrophy in an experimental renin-independent hypertension model. b) To study if fasudil and/or candesartan modify total and phosphorylated Smad2/3 levels in aorta, left ventricle and kidney in hypertensive and control rats. To this end, Sprague Dawley rats were uninephrectomized and treated with DOCA (100 mg/kg/week) and NaCl 1%; KCl 0.4% for 6 weeks to develop hypertension induced by volume overload. Fasudil (50 mg/kg/day) and candesartan (10 mg/kg/day) were administrated by gavage since third week of hypertension. At end of treatment, systolic pressure and body weight were measured. The animals were sacrified, and toraco-abdominal aorta, heart and kidney were obtained, weighted and stored at -80°C until processing. Protein from soluble tissue fraction were resolved polyacrylamide-SDS electrophoresis and total and phosphorylated Smad2/3 levels were determined by Western blot. The results showed that the DOCA-salt administration induced a 42% increase in systolic blood pressure and a significantly decreased in body weight. Relative cardiac and pulmonary mass were significantly increased (p<0,01) in DOCA-salt treated rats. Fasudil and candesartan decreased systolic blood pressure significantly. However any synergistic effect was observed by fasudil-candesartan coadministration. Only candesartan but not fasudil prevented the increase in systolic blood pressure induced by DOCA/salt and in the relative cardiac and pulmonary mass. Both total and phosphorylated Smad2/3 levels did not change by the DOCA-salt administration or by fasudil or candesartan in the studied tissues Total Smad2/3 protein levels did not change by effect of hypertension, fasusil or candesartan , except in kidney (p<0,05). In summary, fasudil and candesartan prevented hypertension induced by DOCAsalt administration butany synergistic effect was observed between both drugs. Candesartan but not fasudil attenuated cardiac hypertrophy induced by volume overloadhypertension. The Smad2/3 transcriptional factors were not activated in the studied tissues using this experimental hypertension model and neither fasudil or candesartan

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / El sistema renina-angiotensina (RAS) forma parte de un eje de control homeostático de procesos tan importantes como el mantenimiento del tono vascular, el balance hidroeléctrico y la contractilidad cardíaca. Su sobre-activación se relaciona con el desarrollo de hipertensión arterial, la que con el paso del tiempo desencadena una serie de procesos deletéreos de remodelado que cursan con hipertrofia del cardiomiocito, lo que puede llevar finalmente a la insuficiencia cardíaca. Adicionalmente, se ha mostrado que la sola desregulación de este sistema puede desencadenar hipertrofia y remodelado cardíaco. Para la compleja regulación del RAS, el organismo hace uso de distintos efectores o agonistas dentro de los que para nuestra investigación, destacamos al péptido angiotensina 1-9 que cada vez toma más importancia por su efecto fisiológico, descrito y corroborado por distintos investigadores, de contrarrestar y prevenir la señalización hipertrófica en cardiomiocitos originada por distintos estímulos, tanto in vitro como in vivo. En el presente trabajo se investigó el mecanismo anti-hipertrófico de Angiotensina 1-9, para lo que valiéndonos de previas investigaciones de nuestro laboratorio y de otros grupos de investigación, nos centramos en la señalización mediada por calcio que tiene un papel principal en la contracción, control del metabolismo energético celular y expresión génica en el corazón, siendo además uno de los principales actores en la hipertrofia cardiaca. Los resultados mostraron que la preincubación de angiotensina 1-9 no tuvo efectos directo sobre los movimientos de calcio; ya sea citoplasmático o mitocondriales, pero sí disminuyó la respuesta de calcio citoplasmático frente a un estímulo pro-hipertrófico, como la Norepinefrina e incrementó los transitorios mitocondriales de calcio evocados tanto por norepinefrina como histamina (esta última se ha descrito como gatillante de la salida de calcio desde el retículo endoplásmico hacia la mitocondria a través de los canales sensibles a IP3. Finalmente al investigar mediante inmunohistoquímica si los aumentos de calcio en la mitocondria se debían a un acercamiento entre el retículo y la mitocondria producido por la preincubación de Ang 1-9, evidenciamos que no se produce un acercamiento entre estos organelos, pero interesantemente si se evita el alejamiento de estos inducidos por estímulos prohipertróficos. Como conclusión de nuestro estudio Ang 1-9 corrige los niveles de Ca2+ citoplasmático inducidos por estímulos prohipertróficos, posiblemente por una mejora en la eficiencia en la entrada de Ca2+ a la mitocondria, lo que no se debe a una modulación de cercanía entre el retículo y la mitocondria / The renin-angiotensin system (RAS) is part of a homeostatic control shaft of important processes such as the maintenance of vascular tone, the electrolyte balance and cardiac contractility. The over-activation of this system has been associated with the development of high blood pressure, which over time triggers a series of deleterious remodeling processes that occur through cardiomyocyte hypertrophy and that can possible end in heart failure. Additionally it has been demonstrated that dysregulation of this system, by itself, can trigger cardiac hypertrophy and remodeling. To achieve the regulation of RAS, the organism uses different effectors or agonists, among them the peptide Angiotensin 1-9 that we highlight to our investigation, who has becoming increasingly more important for its physiological effect described and corroborated by other investigators to counteract and prevent hypertrophic signaling in cardiomyocytes caused by various stimuli in vitro and in vivo. In the present work we wanted to delve into the hypertrophic mechanism of Angiotensin 1-9, and availing ourselves of previous research in our and other laboratories, we focus on calcium signaling, in order to get to understand a little more of this process, coupling to the fact that this plays a major role in contraction, control of cellular energy metabolism and gene expression in the heart. In our results we first found that the pre-incubation of Angiotensin 1-9 itself had no direct effect on cytoplasmic or mitochondrial calcium movements, but decreased the cytoplasmic calcium response of the pro-hypertrophic agent Norepinephrine, and increased the mitochondrial calcium transients evoked by both, norepinephrine and histamine (which has been described that triggers output of calcium from the endoplasmic reticulum into mitochondria trough the IP3 calcium channels). Finally, using immunohistochemistry to investigate whether increases in calcium in mitochondria were due to a closer approach between the reticulum and the mitochondria induced by the Angiotensin 1-9 pre-incubation, we saw no differences in the proximity between these organelles, but interestingly the pre-incubation avoid the estrangement induced by the Norepinephrine pro-hypertrophic stimuli. As conclusion to our study we found that Angiotensin 1-9 is able to correct the cytoplasmic Ca2+ levels induced by a pro-hypertrophic stimuli, possibly by an improvement in the efficiency of Ca2+ entry into the mitochondria, which is not due to a modulation of the closeness between reticulum and mitochondria / Fondecyt, Fondef, Mecesup

Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-06-26T17:18:17Z No. of bitstreams: 1 HellydaPereira.pdf: 924393 bytes, checksum: d85908be39f7a02e10afd3d2dd03ad43 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-26T17:18:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 HellydaPereira.pdf: 924393 bytes, checksum: d85908be39f7a02e10afd3d2dd03ad43 (MD5) Previous issue date: 2016-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão (FAPEMA) / The aim of this study was to evaluate the effect of inhibition of the Angiotensin Converting Enzyme (ECA) with enalapril maleate, on blood pressure, follicular growth, ovulation rate, utero-ovarian hemodynamics, P4/E2 concentrations and gene expression of follicular cells. Were used 31 Nelore (Bos indicus) cows. The females were synchronized with progesterone/estradiol-based protocol and then treated with enalapril maleate (0.5 mg/kg/day) or placebo (NaCl 0.9%) throughout the protocol (10 days). A half of the synchronized cows (n=17) were ultrasonographically evaluated for monitoring the follicular dynamics and utero-ovarian dopplerflowmetry. A half of animals (n=14) were submitted to follicular aspiration guided by ultrasound Ovum pick up (OPU) for measurement of the follicular hormonal synthesis and gene expression. There was no effect of enalapril on arterial pressure, in utero-ovarian hemodynamics and follicular and luteal growth. The ovulation rate (%) was significantly higher in the enalapril treated cows. The plasma and intrafollicular concentrations of progesterone and estradiol not differed significantly between treatments. The enalapril altered significantly the gene expression of enzymes P450aromatase, ECA2 and MAS receptor in the granulosa cells of dominant follicles. / O objetivo com este estudo foi avaliar o efeito da inibição da Enzima Conversora de Angiotensina (ECA), utilizando Maleato de Enalapril, na pressão arterial, crescimento folicular, taxa de ovulação, hemodinâmica útero-ovariana, concentrações de P4 e E2 e expressão gênica de células foliculares. Utilizou-se 31 fêmeas bovinas da raça Nelore (Bos indicus), que foram sincronizadas com protocolo à base de progesterona/ estradiol e, em seguida, tratadas com maleato de enalapril (0,5 mg/kg/dia) ou placebo (NaCl 0,9%) durante todo o protocolo (10 dias). Metade das fêmeas sincronizadas (n=17) foram submetidas a avaliações ultrassonográficas para acompanhamento da dinâmica folicular e dopplerfluxometria útero-ovariana. A outra metade (n=14) foi submetida à aspiração folicular guiada por ultrassom (Ovum pick up; OPU) para aferição da síntese hormonal e expressão gênica pelas células foliculares ovarianas. Não houve efeito do enalapril na pressão arterial média, na hemodinâmica útero-ovariana e no crescimento folicular e luteínico, porém a taxa de ovulação (%) foi significativamente maior no grupo Enalapril. As concentrações plasmáticas e intrafoliculares de Progesterona e Estradiol não diferiram significativamente entre tratamentos. O Enalapril alterou significativamente expressão gênica das enzimas P450aromatase, ECA2 e do receptor MAS nas células da granulosa dos folículos dominantes.

O estudo avaliou os efeitos agudos da Ang-(1-7) na reabsorção de bicarbonato (JHCO3-) no túbulo proximal cortical de rato, in vivo, medindo o pH intratubular pelo microeletródio sensível a H+. O JHCO3- controle é 2,84 ± 0,08 nmol. cm-2. s-1 (49), a Ang-(1-7; 10-12 ou 10-9 M) o reduz (35 ou 61 %) e a Ang-(1-7; 10-6 M) o eleva (56 %). A inibição do receptor Mas (por A779) eleva o JHCO3- (30 %), abole o efeito inibidor da Ang-(1-7), mas não afeta seu efeito estimulador. A inibição do NHE3 (por S3226) diminui o JHCO3- (45 %), não altera o efeito inibidor da Ang-(1-7), mas transforma seu efeito estimulador em inibidor. A concentração de cálcio citosólico ([Ca2+]i), medida pelo FURA-2-AM, controle é 100 ± 2,47 nM (35) e a Ang-(1-7; 10-12, 10-9 ou 10-6 M) a aumenta (152, 103 ou 53 %) transientemente (3 min). A inibição do receptor Mas aumenta a [Ca2+]i (26 %), mais inibe o efeito estimulador de todas as doses de Ang-(1-7). Os resultados indicam que o efeito bifásico dose-dependente da Ang-(1-7) sobre o JHCO3- no túbulo proximal é via receptor Mas e isoforma NHE3 e sugerem estimulação desse trocador por moderado aumento da [Ca2+]i na presença de Ang-(1-7; 10-6 M) e sua inibição por pronunciado aumento da [Ca2+]i na vigência de Ang-(1-7; 10-12 ou 10-9 M). / The action of Ang-(1-7) on bicarbonate reabsorption (JHCO3-) was evaluated in vivo middle proximal tubule of rat kidney, using H ion-sensitive microelectrodes. The control JHCO3- is 2,84 ± 0.08 nmol. cm-2. s-1 (49), Ang-(1-7; 10-12 or 10-9 M) decreases it (35 and 61 %) but Ang-(1-7; 10-6 M) increased it (56 %). A779 (an Ang-(1-7) receptor Mas antagonist) increases the JHCO3- (30 %), prevents the inhibitory effect of Ang-(1-7) and does not affect the stimulatory effect of Ang-(1-7). S3226 (10-6 M; an inhibitor of NHE3) decreases the JHCO3- (45 %), does not affect the inhibitory effect of Ang-(1-7) and changes its stimulatory effect on an inhibitory effect. The control cytosolic free calcium ([Ca2+]i), monitored by FURA-2-AM, is 100 ± 2,47 nM (35) and Ang-(1-7; 10-12, 10-9 or 10-6 M) causes a transient (3 min) increase of it (152, 103 or 53 %). A779 increases the [Ca2+]i (26 %) but impaired the stimulatory effect of Ang-(1-7). Our results indicate the biphasic dose-dependent effect of Ang-(1-7) on JHCO3- in proximal tubule is mediated via Mas receptor and NHE3 and are compatible with stimulation of this exchanger by a moderate increase in [Ca2+]i in the presence of Ang-(1-7, 10-6 M), and its inhibition by large increase in [Ca2+]i with Ang-(1-7, 10-12 or 10-9 M).

A restrição alimentar de cloreto de sódio prejudica o perfil de lípides plasmáticos e a sensibilidade à insulina, favorecendo a aterosclerose em modelos animais dislipidêmicos. A hiperlipidemia e a ativação do sistema renina-angiotensina-aldosterona, isolados ou conjuntamente, estimulam a aterogênese. O objetivo deste estudo foi investigar a influência da restrição crônica de cloreto de sódio na dieta sobre a aterogênese utilizando-se camundongos hiperlipidêmicos (modelo de estudo para aterosclerose) e com hipertensão renovascular. Camundongos knockout para o receptor de lipoproteína de densidade baixa (LDLR KO) e com hipertensão renovascular cirurgicamente induzida (hipertensão dependente de angiotensina II endógena; 2-kidney, 1-clip; 2K1C), tratados ou não com fármacos anti-hipertensivos (losartana ou hidralazina), foram alimentados ad libitum com ração contendo baixa concentração de sódio (HS) (0,15% NaCl) ou ração com concentração padrão de sódio (NS) (1,27% NaCl) a partir do desmame até completarem 5 meses de idade. Camundongos hipertensos submetidos à restrição de sódio apresentaram maior concentração plasmática de colesterol total (CT) e triglicérides (TG), quando comparados aos animais alimentados com dieta NS, confirmando nosso estudo anterior com camundongos normotensos. Os camundongos hipertensos alimentados com dieta HS apresentaram maior infiltração de lípides na parede do arco aórtico quando comparados aos animais NS, apesar da redução da pressão arterial (PA) obtida com a restrição de sódio. A dieta LS não alterou o peso corpóreo e o hematócrito dos animais, exceto em relação aos camundongos tratados com losartana os quais apresentaram discreta redução de hematócrito e das concentrações plasmáticas de TG e de ácidos graxos livres (AGL) justificando, provavelmente, a menor infiltração de lípides no arco aórtico destes animais. Quando comparados aos animais normotensos alimentados com dieta HS, os camundongos hipertensos tratados com losartana ou hidralazina apresentaram menor infiltração lipídica na vasculatura, sugerindo que mecanismos benéficos dos fármacos anti-hipertensivos sobre o metabolismo possam ter superado o efeito destes fármacos sobre a PA. Este estudo pode contribuir no esclarecimento dos mecanismos de ação dos fármacos anti-hipertensivos sobre a aterogênese e nas questões conflitantes em relação à restrição alimentar de sódio, hipertensão arterial, dislipidemia e doença cardiovascular prematura / This study sought to investigate the influence of chronic dietary sodium chloride restriction on atherogenesis utilizing renovascular hypertensive hyperlipidemic mice. Low density lipoprotein receptor knockout (LDLR KO) mice with renovascular hypertension (endogenous angiotensin II-dependent hypertension; 2-kidney, 1-clip - 2K1C), treated or not with antihypertensive drugs losartan or hydralazine, were fed ad libitum either a low-sodium diet (LS) (0.15% NaCl) or a normal-sodium chow (NS) (1.27% NaCl) from weaning to 5 months of age. Hypertensive mice showed higher plasma total cholesterol (TC) and triglyceride (TG) concentrations on LS than on NS confirming our previous study on normotensive mice. In hypertensive mice aortic lipid infiltration was much greater on LS than on NS in spite of the reduction of the blood pressure (BP) attained by LS. LS did not modify the mouse body weight and hematocrit, however the latter was slightly but significantly diminished in the losartan-treated hypertensive group. In hypertensive mice plasma TG and nonesterified fatty acids (NEFA) levels were significantly reduced by losartan seemingly explaining the most significant of all reduction of aortic lipid infiltration reached in this group. Hypertensive mice fed LS diet either on losartan or hydralazine treatment had lower aortic lipid infiltration, suggesting that other beneficial metabolic actions of these drugs must have overcome their effect on BP, as compared to normotensive mice on LS diet. This study sheds light on mechanisms of action of antihypertensive drugs in atherosclerosis and on the conflicting issues regarding dietary sodium restriction on hypertension, dyslipidemia and premature cardiovascular disease in human populations

A restrição alimentar de cloreto de sódio prejudica o perfil de lípides plasmáticos e a sensibilidade à insulina, favorecendo a aterosclerose em modelos animais dislipidêmicos. A hiperlipidemia e a ativação do sistema renina-angiotensina-aldosterona, isolados ou conjuntamente, estimulam a aterogênese. O objetivo deste estudo foi investigar a influência da restrição crônica de cloreto de sódio na dieta sobre a aterogênese utilizando-se camundongos hiperlipidêmicos (modelo de estudo para aterosclerose) e com hipertensão renovascular. Camundongos knockout para o receptor de lipoproteína de densidade baixa (LDLR KO) e com hipertensão renovascular cirurgicamente induzida (hipertensão dependente de angiotensina II endógena; 2-kidney, 1-clip; 2K1C), tratados ou não com fármacos anti-hipertensivos (losartana ou hidralazina), foram alimentados ad libitum com ração contendo baixa concentração de sódio (HS) (0,15% NaCl) ou ração com concentração padrão de sódio (NS) (1,27% NaCl) a partir do desmame até completarem 5 meses de idade. Camundongos hipertensos submetidos à restrição de sódio apresentaram maior concentração plasmática de colesterol total (CT) e triglicérides (TG), quando comparados aos animais alimentados com dieta NS, confirmando nosso estudo anterior com camundongos normotensos. Os camundongos hipertensos alimentados com dieta HS apresentaram maior infiltração de lípides na parede do arco aórtico quando comparados aos animais NS, apesar da redução da pressão arterial (PA) obtida com a restrição de sódio. A dieta LS não alterou o peso corpóreo e o hematócrito dos animais, exceto em relação aos camundongos tratados com losartana os quais apresentaram discreta redução de hematócrito e das concentrações plasmáticas de TG e de ácidos graxos livres (AGL) justificando, provavelmente, a menor infiltração de lípides no arco aórtico destes animais. Quando comparados aos animais normotensos alimentados com dieta HS, os camundongos hipertensos tratados com losartana ou hidralazina apresentaram menor infiltração lipídica na vasculatura, sugerindo que mecanismos benéficos dos fármacos anti-hipertensivos sobre o metabolismo possam ter superado o efeito destes fármacos sobre a PA. Este estudo pode contribuir no esclarecimento dos mecanismos de ação dos fármacos anti-hipertensivos sobre a aterogênese e nas questões conflitantes em relação à restrição alimentar de sódio, hipertensão arterial, dislipidemia e doença cardiovascular prematura / This study sought to investigate the influence of chronic dietary sodium chloride restriction on atherogenesis utilizing renovascular hypertensive hyperlipidemic mice. Low density lipoprotein receptor knockout (LDLR KO) mice with renovascular hypertension (endogenous angiotensin II-dependent hypertension; 2-kidney, 1-clip - 2K1C), treated or not with antihypertensive drugs losartan or hydralazine, were fed ad libitum either a low-sodium diet (LS) (0.15% NaCl) or a normal-sodium chow (NS) (1.27% NaCl) from weaning to 5 months of age. Hypertensive mice showed higher plasma total cholesterol (TC) and triglyceride (TG) concentrations on LS than on NS confirming our previous study on normotensive mice. In hypertensive mice aortic lipid infiltration was much greater on LS than on NS in spite of the reduction of the blood pressure (BP) attained by LS. LS did not modify the mouse body weight and hematocrit, however the latter was slightly but significantly diminished in the losartan-treated hypertensive group. In hypertensive mice plasma TG and nonesterified fatty acids (NEFA) levels were significantly reduced by losartan seemingly explaining the most significant of all reduction of aortic lipid infiltration reached in this group. Hypertensive mice fed LS diet either on losartan or hydralazine treatment had lower aortic lipid infiltration, suggesting that other beneficial metabolic actions of these drugs must have overcome their effect on BP, as compared to normotensive mice on LS diet. This study sheds light on mechanisms of action of antihypertensive drugs in atherosclerosis and on the conflicting issues regarding dietary sodium restriction on hypertension, dyslipidemia and premature cardiovascular disease in human populations

O estudo avaliou os efeitos agudos da Ang-(1-7) na reabsorção de bicarbonato (JHCO3-) no túbulo proximal cortical de rato, in vivo, medindo o pH intratubular pelo microeletródio sensível a H+. O JHCO3- controle é 2,84 ± 0,08 nmol. cm-2. s-1 (49), a Ang-(1-7; 10-12 ou 10-9 M) o reduz (35 ou 61 %) e a Ang-(1-7; 10-6 M) o eleva (56 %). A inibição do receptor Mas (por A779) eleva o JHCO3- (30 %), abole o efeito inibidor da Ang-(1-7), mas não afeta seu efeito estimulador. A inibição do NHE3 (por S3226) diminui o JHCO3- (45 %), não altera o efeito inibidor da Ang-(1-7), mas transforma seu efeito estimulador em inibidor. A concentração de cálcio citosólico ([Ca2+]i), medida pelo FURA-2-AM, controle é 100 ± 2,47 nM (35) e a Ang-(1-7; 10-12, 10-9 ou 10-6 M) a aumenta (152, 103 ou 53 %) transientemente (3 min). A inibição do receptor Mas aumenta a [Ca2+]i (26 %), mais inibe o efeito estimulador de todas as doses de Ang-(1-7). Os resultados indicam que o efeito bifásico dose-dependente da Ang-(1-7) sobre o JHCO3- no túbulo proximal é via receptor Mas e isoforma NHE3 e sugerem estimulação desse trocador por moderado aumento da [Ca2+]i na presença de Ang-(1-7; 10-6 M) e sua inibição por pronunciado aumento da [Ca2+]i na vigência de Ang-(1-7; 10-12 ou 10-9 M). / The action of Ang-(1-7) on bicarbonate reabsorption (JHCO3-) was evaluated in vivo middle proximal tubule of rat kidney, using H ion-sensitive microelectrodes. The control JHCO3- is 2,84 ± 0.08 nmol. cm-2. s-1 (49), Ang-(1-7; 10-12 or 10-9 M) decreases it (35 and 61 %) but Ang-(1-7; 10-6 M) increased it (56 %). A779 (an Ang-(1-7) receptor Mas antagonist) increases the JHCO3- (30 %), prevents the inhibitory effect of Ang-(1-7) and does not affect the stimulatory effect of Ang-(1-7). S3226 (10-6 M; an inhibitor of NHE3) decreases the JHCO3- (45 %), does not affect the inhibitory effect of Ang-(1-7) and changes its stimulatory effect on an inhibitory effect. The control cytosolic free calcium ([Ca2+]i), monitored by FURA-2-AM, is 100 ± 2,47 nM (35) and Ang-(1-7; 10-12, 10-9 or 10-6 M) causes a transient (3 min) increase of it (152, 103 or 53 %). A779 increases the [Ca2+]i (26 %) but impaired the stimulatory effect of Ang-(1-7). Our results indicate the biphasic dose-dependent effect of Ang-(1-7) on JHCO3- in proximal tubule is mediated via Mas receptor and NHE3 and are compatible with stimulation of this exchanger by a moderate increase in [Ca2+]i in the presence of Ang-(1-7, 10-6 M), and its inhibition by large increase in [Ca2+]i with Ang-(1-7, 10-12 or 10-9 M).