La comercialización de la fibra de alpaca es una de las principales fuentes de sustento para más de un millón de personas en el Perú, siendo de mucha importancia para su economía por ser el principal productor de fibra. Teniendo en cuenta que dos de los factores importantes en la calidad de la fibra son su diámetro y su longitud, se analizaron los ESTs de la alpaca depositados en la base de datos del NCBI para identificar los genes relacionados a la síntesis de fibra y microsatélites que tendrían una función importante relacionada a su calidad. Se analizaron 7286 ESTs de piel de una alpaca del tipo huacaya, resultando en 2428 secuencias ensambladas o unigenes, posteriormente se realizó la búsqueda de homologías y la anotación de secuencias. Se identificaron 22 genes relacionados a la síntesis de la fibra (KRT10, KRT25, KRT31, KRT14, KRT15, KRT5, KRT78, KRT81, KRT85, KRTAP3-2, KRTAP10, KRTAP11-1, TNFSF12, sFRP4, RACK1, COL1A1, COL1A2, DAB2IP, GLI1, BMP1, BMP4 y CTNNB1) donde se observó 4 de estos con una alta expresión (TNFSF12, sFRP4, COL1A1 y COL1A2) y 10 genes poseen microsatélites (COL1A1, TNFSF12, DAB2IP, GLI1, BMP4, KRT81, KRT5, KRT15, KRT85 y KRTAP3-2). El presente estudio aporta la identificación de genes relacionados a la síntesis de fibra y marcadores EST-SSR con los cuales se pueden probar en la alpaca para establecer de forma experimental si estos genes tienen una relación con el diámetro.

Submitted by Luiza Maria Pereira de Oliveira (luiza.oliveira@ufpe.br) on 2015-05-18T14:57:00Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_Ciria Vieira Barbosa.pdf: 1682880 bytes, checksum: 405863d4d293c22faf7b3cadd39e3e25 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-18T14:57:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_Ciria Vieira Barbosa.pdf: 1682880 bytes, checksum: 405863d4d293c22faf7b3cadd39e3e25 (MD5) Previous issue date: 2015-04-06 / A alopecia androgênica (AGA) é a mais comum das doenças crônicas dermatológicas e, entre os tratamentos utilizados para esta disfunção, o minoxidil (MNX) a 2% e 5% em soluções hidroalcoólicas tópicas apresenta sintomas relacionados à absorção sistêmica do fármaco, irritação do couro cabeludo devido ao álcool contido na formulação e retorno dos sintomas após interrupção do tratamento. O objetivo deste trabalho foi preparar, caracterizar e avaliar o perfil de liberação, a retenção no estrato córneo (EC) e nos folículos pilosos do MNX em lipossomas (LMNX) e destes lipossomas incorporados ao gel de hidroxipropilmetilcelulose (LMNX/HPMC). Estudos de estabilidade, difração de Raios-X (DR-X), espectroscopia no infravermelho (FTIR) e calorimetria diferencial exploratória (DSC) foram realizados para LMNX/HPMC (4 mg/mL). O perfil de liberação in vitro, retenção e permeação foi realizado em células de difusão de Franz, comparando-se às formulações LMNX e LMNX/HPMC a solução hidroalcoólica de MNX (20 mg/mL). A atividade promotora de crescimento capilar in vivo de LMNX/HPMC foi avaliada em ratos Wistar tratados por via tópica com os LMNX/HPMC e medicamento referência (Regaine®) a 2%. Análises de DR-X, FTIR e DSC sugerem interação fármaco-lipossoma e lipossoma-hidrogel. Porém, nos resultados da liberação in vitro, os coeficientes de difusão do MNX a partir de LMNX (D×10-6 = 4,8205±0,0451 cm2/s) e a partir de LMNX/HPMC (D×10-6 = 4,5900±0,0451 cm2/s) são semelhantes (p > 0,05) indicando que HPMC não interfere na liberação do fármaco. A retenção no EC in vitro apresentou-se na seguinte ordem decrescente: MNX em solução (19,05±1,58 μg/cm2) > LMNX (8,65±2,15 μg/cm2) > LMNX/HPMC (4,08±0,70 μg/cm2). Contudo, a retenção in vitro de MNX nos folículos a partir de LMNX/HPMC (2,42±0,77 μg/cm2) foi semelhante à obtida a partir da solução de MNX (4,40±2,81 μg/cm2) e significativamente menor que a obtida a partir de LMNX (14,60±4,47μg/cm2), possivelmente devido à maior habilidade de formulações lipossomais promoverem depósito folicular. Ao contrário do observado para o MNX em solução, a partir das formulações lipossomais, não foi detectada a presença de MNX no meio receptor. Nos estudos in vivo, o número de folículos por milímetro linear de pele apresentou-se na seguinte ordem decrescente: grupo referência (25,82±1,04) > LMNX/HPMC (20,97±0,46) > controle (11,79±0,25), indicando a grande eficiência de LMNX/HPMC, que apesar de possuir uma concentração de MNX vinte vezes menor que o medicamento referência, sua atividade foi apenas 19% inferior à deste. LMNX/HPMC foi capaz de prolongar a fase anágena de folículos dos animais, desde a primeira semana de tratamento (100% de folículos em fase anágena) e apresentou o menor tempo entre início e final do crescimento de novos pelos comparado ao produto referência e ao grupo controle. Portanto, conclui-se que o sistema lipossomal foi capaz de evitar a penetração de MNX através da pele, mostrou-se hábil em promover depósito folicular e que sua incorporação ao gel de HPMC não influenciou na liberação do fármaco, constituindo-se assim em formulações adequadas ao uso tópico do minoxidil.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T06:06:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 295105.pdf: 2193083 bytes, checksum: 9a0cebe808795e41f914d26e96e95c19 (MD5) / Células tronco são células com capacidade de auto renovação, e de diferenciação em diversos tipos celulares. Nos últimos anos, muitos estudos têm se dedicado à identificação de células tronco em tecidos adultos como modo de desenvolver estratégias para regeneração e reparo tecidual. A crista neural é uma estrutura embrionária de vertebrados, originada na parte dorsal do tubo neural em fechamento, durante o processo de neurulação. Estas células possuem uma característica migratória, que é iniciada com o fechamento do tubo neural, e são distribuídas pelo embrião contribuindo para o desenvolvimento de vários tecidos. O folículo piloso é uma estrutura exclusiva de mamíferos, e é considerado um anexo do tecido epitelial. Esta estrutura possui uma composição complexa, que inclui glândula sebácea, a saliência do bulge, eixo do cabelo (que se projeta externamente da epiderme), e a papila dermal. Assim como outros tecidos adultos o folículo piloso dispõe de células tronco residentes, presentes no bulge, que é um discreto microambiente, também conhecido como saliência do folículo piloso. As células tronco epidermais encontradas no bulge são identificadas principalmente pela expressão das citoqueratinas 15 e 19 (KRT 15 e 19). Em contrapartida, também são encontradas no bulge, células que apresentam as citoqueratinas 5 e 14 (KRT15 e 14), que caracterizam células no estágio final de diferenciação da linhagem epidermal. Com isso, nosso trabalho focou em analisar o folículo piloso de vibrissas de camundongos como potencial nicho de células tronco com características epidermais e de crista neural, avaliando diferentes condições de cultivo. Utilizamos camundongos com idade entre 8 e 10 semanas, dos quais eram isoladas as vibrissas, o folículo piloso dissecado, e o bulge cultivado como explante. As culturas de explante do bulge eram realizadas em placas de 24 poços sobre colágeno tipo I. Após 7 ou 14 dias estas eram fixadas para realização de imunoflorescência indireta ou extração de mRNA e realização do RT-PCR. Os marcadores celulares testados foram KRT14, P75, Nestina e TRP2. . Avaliamos a ação dos meios simples, simples com EE e complexo, além de verificar os efeitos da adição do morfógeno sonic headhog (SHH, 10nM e 100nm) ao meio complexo e também medimos o halo de migração/crescimento em volta do explante. Observamos que as células iniciam sua migração do explante para a placa de cultura por volta do 4o dia de cultivo e representam uma população heterogênea com grandes variações nas mesmas condições testadas. Estas células apresentam características epidermais (TRP2 e KRT14, marcadores de melanócitos e queratinócitos, respectivamente) e também de crista neural (Nestina e P75). A expressão dos marcadores de crista neural foi mais expressiva nas culturas de 14 dias. O meio complexo também se mostrou mais eficiente que os demais, em relação a migração das células KRT14 do folículo piloso para a placa de cultura e diferenciação para queratinócitos. Em conjunto, nossos resultados demonstram que o folículo piloso corresponde a um nicho com populações de células progenitoras com características epidermais e de crista neural e com importante potencial terapêutico e biotecnológico. / Stem cells are cells with self-renewal ability and differentiation into various cellular types. In recent years, many studies have been dedicated to the identification of stem cells in adult tissues as a way to develop strategies for regeneration and tissue repair. The neural crest is an embryonic structure of vertebrates, originated at the dorsal neural tube closure, during the process of neurulation. These cells have a migratory feature, which starts with the closure of the neural tube, and are distributed by embryo contributing to the development of various tissues. The hair follicle is a unique structure to mammals, and is considered an attachment of epidermal tissue. This structure has a complex composition, which includes sebaceous gland, the bulge salience, the hair shaft (that falls outside of the epidermis), and the dermal papilla. As well as other adult tissues has the follicle stem cells residents in the bulge, which is a discreet microenviroment, also known as salience of the follicle. The epidermal stem cells found in the bulge are identified mainly by the expression of cytoqueratins 15 and 19 (KRT 15 and 19). In contrast, are also found in the bulge, cells that have the cytokeratins 5 and 14 (KRT15 and 14), that characterize cells in the final stage of epidermal lineage. With this, our work focused on analyzing the follicle pits of mice as potential stem cell niche with epidermal features and neural crest, evaluating different cultivation conditions. We use mice aged between 8 and 10 weeks of which were isolated from the whiskers, the follicle dissected, and the bulge cultivated as explants. Explants cultures of the bulge were realized in 24 wells plate dishes, on type I collagen. After 7 or 14 days these cultures were fixed for achievement of indirect immunofluorescence or mRNA extraction and realization of RT-PCR. This cells markers was tested were KRT14, P75, Nestin and TRP2. . Evaluate the action simple medium, simple medium with EE and complex medium, and check the effects of addition of morfogen sonic headhog (SHH, 10nM to 100nm) in the complex medium and also measure the migration/border around the explants growth. We note that the cells start their migration from explants culture card around the day 4 of cultivation and represent a heterogeneous population with large variations in the same conditions tested. These cells presents epidermal characteristics (TRP2 and KRT14, markers of melanocytes and keratinocytes, respectively) and also of neural crest (Nestina and P75). The expression of neural crest markers was more expressive with 14 days. The complex also proved more efficient than the other, in relation to the cells migration KRT14 follicle to the culture and differentiation to keratinocytes. Together, our results show that the follicle is a niche with populations of progenitor cells with epidermal characteristics and neural crest and important potential therapeutic biotechnology.

O pelo é uma característica dos mamíferos: na maioria das espécies, juntamente com a pele, a pelagem reveste externamente o corpo, com exceção de algumas regiões bem delimitadas. O pelo do cão e demais mamíferos apresenta formato distinto de acordo com a região do corpo. O estudo da obtenção e caracterização de células-tronco em cães poderá ampliar as possibilidades terapêuticas, mediante a utilização das células indiferenciadas na reparação capilar e lesões da pele e seus anexos. Neste trabalho foram utilizadas amostras de folículo piloso retiradas da região rostral de fetos caninos correspondentes a três fases gestacionais distintas (grupo I= 30 dias de gestação; grupo II= 35 dias de gestação; grupo III= 40 dias de gestação).Estas amostras foram cultivadas em placas de Petri de 75 cm² com 5mL de meio de cultivo DMEM, suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB) e 1% de antibióticos estreptomicina/penicilina. As células obtidas foram congeladas e descongeladas e utilizados nos procedimentos de, análise da expressão dos marcadores de células-tronco: STRO-1, CD 117, OCT 3/4, CD 90, Nanog, CD- 34, SSEA-4, CD -105, MCP-1, HSP- 47, CD 1 A, VEGFR1, DR4, IL- 1 β, caspase3, Ki- 67, CD -45. A escolha dos anticorpos marcadores de células-tronco foi baseada em estudos que mostraram afinidade e avidez com o folículo piloso. Utilizamos também para a caracterização do folículo piloso, a imunohistoquímica e análise de PCR com o marcador S100 e a imunocitoquímica com os marcadores OCT 3/4, VEGF, STRO-1, CD117 e Nanog. Os resultados obtidos sugerem que a linhagem celular do folículo piloso de fetos de cães apresentaram crescimento satisfatório com a utilização do meio DMEM-hight suplementado com 10% de SFB inativado e 1% de antibióticos, sendo mantidas e expandidas em cultivo. O crescimento e a expansão das células-tronco do folículo piloso são peculiares, pois, sua expansão ocorre em torno da haste pilosa, utilizando-a como ancoragem. Os resultados indicaram características de pluripotência nas células-tronco do folículo piloso pela expressão dos marcadores OCT3/4, Nanog, CD105, CD90, SSEA-4, e STRO-1, em todos os grupos analisados. Considerando, a taxa de proliferação, a fase do ciclo celular, distribuição e aspectos de morte celular não foram encontradas diferenças significantes na expressão dos marcadores HSP47, DR4. Para verificar a angiogêneseforam utilizados os marcadores VEGFR1, Ki-67 e caspase-3, sendo expressos em todos os grupos. Na imunohistoquímica e análise de PCR observou-se a expressão da proteína S100, sendo maior nas células do grupo de fetos com 40 dias de gestação- grupo III. Neste estudo, podemos concluir que o conjunto de marcadores expressos nos diferentes grupos de células tronco obtidas das vibrissas de fetos caninos indicaram a expressão de marcadores de pluripotência das células-tronco do folículo piloso / Hair is a characteristic of mammals, since in most species the coat spreads throughout the body, except for some well-defined regions. Mammals in general, including dogs, have different characteristics in their coat according to the region of the body. The study of obtainment and characterization of stem cells from the hair follicle could contribute to new therapeutic possibilities, particularly in the treatment of hair, skin and it appendices injuries. In this study, hair follicle samples were harvestedin the rostral region of canine fetuses, divided into three distinct groups, according to the stage of pregnancy, as follows: Group I = 30 days, Group II = 35 days, Group III = 40 days. These samples were grown in 75 cm² Petri dishes with 5 mL of DMEM culture medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) and antibiotics 1% streptomycin / penicillin. Cells were frozen and thawed and used in procedures for analysis of expression of markers of stem cells: STRO-1, CD 117, OCT 3/4, CD 90, Nanog, CD- 34,SSEA -4,CD- 105, MCP-1, HSP-47, CD 1 A, VEGF-R1, DR4, IL-1 β, caspase-3, Ki-67, CD -45. The choice of antibodies was based on studies that showed affinity and avidity to the hair follicle. In addition, for purposes of characterization of the hair follicle, procedures for immunohistochemistry and PCR analysis with the marker S100 and immunocytochemistry with the markers OCT3/4, VEGF, STRO-1, CD117 e Nanog were used. The results suggested that hair follicle cell line of fetal dogs showed satisfactory growth using the DMEM high medium supplemented with 10% inactivated FBS and 1% antibiotics and could be maintained and expanded in culture. The growth and expansion of stem cells of the hair follicle are unique because they occur around the hair shaft using it as anchorage. Results also indicated pluripotency features in the hair follicle stem cells through the positive expression of Oct3/4, Nanog, CD105, CD90, SSEA-4 and STRO-1, in all groups. Regarding the proliferation rate and cell cycle phase, distribution and cell death aspects, HSP47, DR4 were used. To verify angiogenesis, VEGFR1, Ki67 and Caspase-3 were expressed in all groups. In Immunohistochemistry procedures we observed the expression of S100, and in mRNA on RT-PCR. We concluded in this study that in group III the expression of S100 was higher than in the two other groups. In addition, we found that the pluripotency of the stem cells was indicated by the expression of the markers OCT3/4, Nanog, CD105, CD90, SSEA-4 and STRO-1

A alopecia difusa não-cicatricial (ADNC) acomete 7% dos pacientes HIV positivos. O objetivo deste trabalho foi comparar os achados histológicos e imunohistoquímicos (citoqueratina 19/TUNEL e caspase 3 clivada) em cortes transversais de couro cabeludo de 15 pacientes HIV-1 positivos com ADNC e de 12 controles sadios. A apoptose de células tronco-foliculares e amplificadoras transitórias na protuberância folicular foi demonstrada pela dupla marcação TUNEL/CK19 em 80% dos casos e em 25% dos controles e, pelo anticorpo anti-caspase 3 clivada em 61% dos casos e 16% dos controles. Não houve correlação entre a incidência de apoptose e o grau de imunodeficiência dentre os casos / Seven percent of HIV positive patients present diffuse non-cicatricial alopecia (DNCA). The aim of this study was to compare the histological and the immunohistochemical (cytokeratin 19/TUNEL and cleaved caspase 3) findings in transverse scalp sections of 15 HIV-1 positive patients with DNCA and 12 healthy controls. Follicular stem and transit amplifying cells apoptosis in the bulge was demonstrated by double labeling TUNEL/CK19 in 80% of cases and 25% of controls, and by the anti-cleaved caspase 3 antibody in 61% of cases and 16% of the controls. There was no relation between the incidence of apoptosis and the degree of immunodeficiency among cases

Submitted by Raquel Vasconcelos Guimarães de Castro null (rvgcastro@hotmail.com) on 2016-06-10T17:22:52Z No. of bitstreams: 1 Definitivo v11 VERSÃO IMPRESSA.pdf: 3954271 bytes, checksum: fbf5e7559a791827787906302174080b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-06-15T17:22:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 castro_rvg_me_jabo.pdf: 3954271 bytes, checksum: fbf5e7559a791827787906302174080b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-15T17:22:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 castro_rvg_me_jabo.pdf: 3954271 bytes, checksum: fbf5e7559a791827787906302174080b (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A pele é um órgão extenso e de fácil acesso, e possui vários tipos celulares diferentes que estão em constante renovação. Dentre estas células, alguns tipos de células-tronco com potencial proliferativo, de autorrenovação e de diferenciação, são responsáveis pela manutenção da homeostase deste órgão e pela cura de feridas. Estudos anteriores sugerem a existência de um nicho de células-tronco presente no “bulge” dos folículos pilosos, que contém populações positivas para CD200 e CD34. Este trabalho foi realizado com o intuito de: 1- Obter tecidos derivados da pele de cães adultos e fetos, isolar e cultivar as células in vitro derivadas destes, empregando um método de isolamento celular através de digestão enzimática simples 2- Comprovar a presença de células do “bulge”, positivas para CD200 e CD34 após cultivo celular in vitro, comparando com a análise do tecido; Uma coloração por hematoxilina e eosina foi realizada da pele de cães adultos e fetos, e biopsias e células cultivadas in vitro foram caracterizadas pela presença das proteínas CD200 e CD34 através de imunofluorescência, imunocitoquímica e citometria de fluxo. Os resultados da imunofluorescência foram negativos para ambos CD200 e CD34 nas peles de feto e adulto. Na imunocitoquímica, as células foram positivas para CD34 e CD200, tanto em fetos quanto adultos. Adicionalmente, o marcador de pluripotência OCT4 foi testado, sendo expresso em células de feto. Por citometria de fluxo, a porcentagem média de células marcadas duplamente por CD200 e CD34 nos adultos foi de 3,1% e nos fetos de 0,33% (n=3). A marcação somente por CD200 foi encontrada somente nos adultos, sendo de 2,8% (n=3). Os resultados sugerem ser possível a obtenção de células-tronco do “bulge” do folículo piloso através do método de digestão enzimática simples, utilizado neste trabalho. Este estudo é o primeiro passo para novas pesquisas que envolvam esse nicho, na pele de cães. / Skin is an extensive and easily accessible organ, possessing various cell types which are in constant renovation. Some stem cell types found in the skin have the potential of self-renewal, proliferation and differentiation, processes which are responsible for the organ’s maintenance of homeostasis and the healing of wounds. Previous studies suggested the presence of a stem cell niche at the bulge region of the hair follicle, which contains cell populations positive for CD200 and CD34. Thus, this work sought to identify these cell populations in canine cultures using the following methods: 1. 1- Collecting samples of adult and fetus canine skin, isolating and culturing these cells in vitro using a method of simple enzymatic digestion; 2- Testing the cell cultures for CD200 and CD34 in vitro, comparing them with analyzed tissue material. Hematoxylin and eosin staining were conducted for the biopsies and analysis of fetal and adult canine skin, with the extracted cell cultures being characterized for the presence of the proteins CD200 and CD34 through immunofluorescence, immunocytochemistry and flow cytometry. In both adult and fetal tissue samples, CD200 and CD34 immunofluorescence results were negative. In immunocytochemistry, both fetal and adult cultures cells tested positive for CD34 and CD200. The pluripotency marker OCT4 was also tested, and was positive for fetal culture cells. Flow cytometer results showed that, for samples with a double staining of CD200 and CD34 the average percentage of marked cells was 3.1% in adults and 0.33% in fetal cells (n=3). For the CD200 marker alone, positive cells were found only in adult cultures, representing 2.8% of the total population (n=3). In conclusion, the results suggest that obtaining bulge stem cells from both fetuses and adults, with use of CD200 and CD34 markers, is validated through the simple enzymatic digestion and cell culture methods utilized in this study. The present work is the first step towards developing new research involving this niche in dogs.

A alopecia difusa não-cicatricial (ADNC) acomete 7% dos pacientes HIV positivos. O objetivo deste trabalho foi comparar os achados histológicos e imunohistoquímicos (citoqueratina 19/TUNEL e caspase 3 clivada) em cortes transversais de couro cabeludo de 15 pacientes HIV-1 positivos com ADNC e de 12 controles sadios. A apoptose de células tronco-foliculares e amplificadoras transitórias na protuberância folicular foi demonstrada pela dupla marcação TUNEL/CK19 em 80% dos casos e em 25% dos controles e, pelo anticorpo anti-caspase 3 clivada em 61% dos casos e 16% dos controles. Não houve correlação entre a incidência de apoptose e o grau de imunodeficiência dentre os casos / Seven percent of HIV positive patients present diffuse non-cicatricial alopecia (DNCA). The aim of this study was to compare the histological and the immunohistochemical (cytokeratin 19/TUNEL and cleaved caspase 3) findings in transverse scalp sections of 15 HIV-1 positive patients with DNCA and 12 healthy controls. Follicular stem and transit amplifying cells apoptosis in the bulge was demonstrated by double labeling TUNEL/CK19 in 80% of cases and 25% of controls, and by the anti-cleaved caspase 3 antibody in 61% of cases and 16% of the controls. There was no relation between the incidence of apoptosis and the degree of immunodeficiency among cases

O pelo é uma característica dos mamíferos: na maioria das espécies, juntamente com a pele, a pelagem reveste externamente o corpo, com exceção de algumas regiões bem delimitadas. O pelo do cão e demais mamíferos apresenta formato distinto de acordo com a região do corpo. O estudo da obtenção e caracterização de células-tronco em cães poderá ampliar as possibilidades terapêuticas, mediante a utilização das células indiferenciadas na reparação capilar e lesões da pele e seus anexos. Neste trabalho foram utilizadas amostras de folículo piloso retiradas da região rostral de fetos caninos correspondentes a três fases gestacionais distintas (grupo I= 30 dias de gestação; grupo II= 35 dias de gestação; grupo III= 40 dias de gestação).Estas amostras foram cultivadas em placas de Petri de 75 cm² com 5mL de meio de cultivo DMEM, suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB) e 1% de antibióticos estreptomicina/penicilina. As células obtidas foram congeladas e descongeladas e utilizados nos procedimentos de, análise da expressão dos marcadores de células-tronco: STRO-1, CD 117, OCT 3/4, CD 90, Nanog, CD- 34, SSEA-4, CD -105, MCP-1, HSP- 47, CD 1 A, VEGFR1, DR4, IL- 1 β, caspase3, Ki- 67, CD -45. A escolha dos anticorpos marcadores de células-tronco foi baseada em estudos que mostraram afinidade e avidez com o folículo piloso. Utilizamos também para a caracterização do folículo piloso, a imunohistoquímica e análise de PCR com o marcador S100 e a imunocitoquímica com os marcadores OCT 3/4, VEGF, STRO-1, CD117 e Nanog. Os resultados obtidos sugerem que a linhagem celular do folículo piloso de fetos de cães apresentaram crescimento satisfatório com a utilização do meio DMEM-hight suplementado com 10% de SFB inativado e 1% de antibióticos, sendo mantidas e expandidas em cultivo. O crescimento e a expansão das células-tronco do folículo piloso são peculiares, pois, sua expansão ocorre em torno da haste pilosa, utilizando-a como ancoragem. Os resultados indicaram características de pluripotência nas células-tronco do folículo piloso pela expressão dos marcadores OCT3/4, Nanog, CD105, CD90, SSEA-4, e STRO-1, em todos os grupos analisados. Considerando, a taxa de proliferação, a fase do ciclo celular, distribuição e aspectos de morte celular não foram encontradas diferenças significantes na expressão dos marcadores HSP47, DR4. Para verificar a angiogêneseforam utilizados os marcadores VEGFR1, Ki-67 e caspase-3, sendo expressos em todos os grupos. Na imunohistoquímica e análise de PCR observou-se a expressão da proteína S100, sendo maior nas células do grupo de fetos com 40 dias de gestação- grupo III. Neste estudo, podemos concluir que o conjunto de marcadores expressos nos diferentes grupos de células tronco obtidas das vibrissas de fetos caninos indicaram a expressão de marcadores de pluripotência das células-tronco do folículo piloso / Hair is a characteristic of mammals, since in most species the coat spreads throughout the body, except for some well-defined regions. Mammals in general, including dogs, have different characteristics in their coat according to the region of the body. The study of obtainment and characterization of stem cells from the hair follicle could contribute to new therapeutic possibilities, particularly in the treatment of hair, skin and it appendices injuries. In this study, hair follicle samples were harvestedin the rostral region of canine fetuses, divided into three distinct groups, according to the stage of pregnancy, as follows: Group I = 30 days, Group II = 35 days, Group III = 40 days. These samples were grown in 75 cm² Petri dishes with 5 mL of DMEM culture medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) and antibiotics 1% streptomycin / penicillin. Cells were frozen and thawed and used in procedures for analysis of expression of markers of stem cells: STRO-1, CD 117, OCT 3/4, CD 90, Nanog, CD- 34,SSEA -4,CD- 105, MCP-1, HSP-47, CD 1 A, VEGF-R1, DR4, IL-1 β, caspase-3, Ki-67, CD -45. The choice of antibodies was based on studies that showed affinity and avidity to the hair follicle. In addition, for purposes of characterization of the hair follicle, procedures for immunohistochemistry and PCR analysis with the marker S100 and immunocytochemistry with the markers OCT3/4, VEGF, STRO-1, CD117 e Nanog were used. The results suggested that hair follicle cell line of fetal dogs showed satisfactory growth using the DMEM high medium supplemented with 10% inactivated FBS and 1% antibiotics and could be maintained and expanded in culture. The growth and expansion of stem cells of the hair follicle are unique because they occur around the hair shaft using it as anchorage. Results also indicated pluripotency features in the hair follicle stem cells through the positive expression of Oct3/4, Nanog, CD105, CD90, SSEA-4 and STRO-1, in all groups. Regarding the proliferation rate and cell cycle phase, distribution and cell death aspects, HSP47, DR4 were used. To verify angiogenesis, VEGFR1, Ki67 and Caspase-3 were expressed in all groups. In Immunohistochemistry procedures we observed the expression of S100, and in mRNA on RT-PCR. We concluded in this study that in group III the expression of S100 was higher than in the two other groups. In addition, we found that the pluripotency of the stem cells was indicated by the expression of the markers OCT3/4, Nanog, CD105, CD90, SSEA-4 and STRO-1

Vários estudos têm relatado um aumento da incidência de câncer de pele em todo o mundo. No Brasil, o câncer de pele em geral continua sendo a neoplasia mais incidente em ambos os gêneros. Os tumores de anexos cutâneos compõem um grupo grande de neoplasias que exibem diferenciação morfológica para um dos epitélios anexiais da pele normal. Este trabalho trata dos aspectos clínicos, histológicos e imunoistoquímicos de um tumor anexial de origem folicular: o triquilemocarcinoma e sua versão benigna o triquilemoma. Os objetivos foram analisar comparativamente os dados clínicos, epidemiológicos e a expressão de citoqueratinas 15 e 16, claudinas 1,3,4,5,7 e 11, antígeno CD34, do p63 e do índice de proliferação celular pelo Ki67 entre o grupo dos Triquilemomas e Triquilemocarcinomas diagnosticados na Divisão de Dermatologia do Hospital das Clínicas da Universidade de São Paulo no período de 1991 a 2009 e definir um padrão imunofenotípico que auxilie no diagnóstico diferencial dos dois tumores. O estudo foi feito através de revisão clínico-epidemiológica de prontuário dos casos diagnosticados no período de 1991 a 2009; revisão das lâminas em HE e PAS com e sem diastase; realização das técnicas de imunoistoquímica. No período de 18 anos foram identificados 22 casos válidos de triquilemoma e 16 casos válidos de triquilemocarcinoma. Observou-se uma maior incidência de Triquilemoma entre adultos masculinos enquanto que os Triquilemocarcinomas predominaram entre os idosos femininos. A cabeça foi mais acometida entre os casos benignos que entre os malignos. A opção terapêutica predominante entre os triquilemomas foi de eletrocoagulação e de excisão cirúrgica para os demais casos. A claudina-1, claudina-4 e o CD34 apresentavam medianas mais altas nos casos benignos que nos malignos. Portanto, conclui-se que os dados epidemiológicos e clínicos dos dois grupos de tumores se distinguem em relação à idade, gênero, local de acometimento e tipo de tratamento; observou-se perda de expressão das CL1 e 4 e do CD34, marcadores de diferenciação celular, nos Triquilemocarcinomas em comparação aos Triquilemomas. Por outro lado, o índice de proliferação celular pelo Ki67 mostrou-se um marcador inútil para a distinção entre as formas benigna e maligna / Several studies have been reporting an increasing incidence in skin cancers all over the world. In Brazil, skin cancers are the most prevalent neoplasia in both genders. The skin adnexal tumors are a large group of neoplasias that differentiate into normal skin adnexal epithelium. We report here the clinical, histopathological and immunochemical aspects of the tumors of follicular origin: the trichilemmal carcinoma and its benign variation - trichilemmoma. The objectives were to analise comparatively the clinical and histological data and to compare the expression of the cytokeratins 15 and 16, claudins 1,3,4,5,7 and 11, antigen CD34, p63 and the cell proliferation index in the Ki67 between the two groups, defining a immunophenotypic pattern that could help the differential diagnosis of the two tumors. The study was made by identifying in the hospital records the cases of these tumors between 1991 and 2009. After that, a clinico-epidemiological review was made in the medical records, the histological samples were reviewed to confirm the diagnosis. The best areas were selected to compose the Tissue MicroArray that was used to immunochemical reactions. In these 18 years, there were 22 valid cases of trichilemmoma and 16 of trichilemmal carcinoma. There was a higher incidence of trichilemmoma in male adults and of trichilemmal carcinoma in female elderly. The head was more affected in the benign tumors than in the malignat ones. The treatment option was electrodissection in Trichilemmomas and surgical excision in Trichilemmal carcinomas. Claudin-1, claudin-4 and CD34 were more expressed in the first group. So, we concluded that the clinical and epidemiological data in the two groups differ in age, gender, local of the tumor and treatment option. There was loss of expression of CL1 and 4 and of CD34, cell differentiation markers, in the Trichilemmal carcinoma when compared to the Trichilemmomas. On the other hand, the Ki67 expression was of no use in differentiating the two groups of tumor

Introdução: A micose fungóide foliculotrópica (MFF) é subtipo de linfoma cutâneo de células T que atinge especialmente o folículo piloso e parece ter prognóstico mais reservado. Informações clínicas sobre a população acometida por linfomas cutâneos no Brasil são escassas. O fenômeno de imunoprivilégio (IP) diz respeito à habilidade de alguns órgãos em permanecer protegidos contra reações inflamatórias. Tem sido sugerido que o folículo piloso normal represente um local de IP. Nesse estudo aventou-se a possibilidade de haver uma quebra no equilíbrio desse fenômeno na MFF, com alteração na expressão de moléculas do complexo maior de histocompatibilidade (MHC) e na expressão de MHC não-clássicos (HLA-G), com algum papel no mecanismo do foliculotropismo. Os objetivos foram: descrever o perfil clínico-epidemiológico de paciente com MFF, descrever a histologia e imunofenótipo dos casos de MFF e investigar os mecanismos envolvidos na predileção dos linfócitos atípicos pelo folículo piloso. Metodologia: Os prontuários de pacientes com diagnóstico de MFF provenientes do ambulatório de Linfomas Cutâneos da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (FMUSP) foram revisados (n=33). O material histológico de biópsias de pele dos pacientes com MFF provenientes dos ambulatórios de Linfomas Cutâneos da FMUSP e da Northwestern University foi analisado por meio de escala semi-quantitativa (n=43). Na coloração de hematoxilina-eosina foram avaliados os seguintes parâmetros: infiltrado neoplásico epidérmico, infiltrado neoplásico dérmico, presença de acantose/espongiose, de mucinose folicular, de fibroplasia do tecido conjuntivo, de eosinófilos, de plasmócitos, o tamanho celular e o grau de dano folicular. Analisou-se a positividade do infiltrado neoplásico para os seguintes marcadores celulares: CD1a, CD56, TIA-1 e CD117. As expressões do complexo de histocompatibilidade HLA-G e do MHCII no infiltrado celular e no epitélio folicular foram investigadas no grupo de pacientes com MFF e comparadas com o grupo de pacientes com micose fungóide clássica (MFC) e pele normal. A expressão do complexo de histocompatibilidade MHCII também foi investigada na epiderme. Resultados: A mediana das idades ao diagnóstico foi de 46 anos com 61% dos pacientes classificados como portadores de estágio avançado. A proporção entre homens e mulheres foi de 1,54 e a mediana de duração de doença antes do diagnóstico foi de três anos. Ao final de três anos de acompanhamento, 67% dos casos estavam vivos com a doença. O prurido foi relatado em 82% dos casos. Histologicamente, encontrou-se associação entre a presença de eosinófilos e de plasmócitos com fibroplasia do tecido conjuntivo. Observou-se diminuição da expressão do HLA-G no epitélio folicular nos grupos MFF e MFC em relação à pele normal. Observou-se aumento da expressão do MHCII no epitélio folicular na MFF em comparação à pele normal e na epiderme na MFC quando comparada à MFF. Conclusões: Dados clínicos da população estudada assemelharam-se aos dados da literatura como estágio avançado ao diagnóstico e prognóstico reservado. Cerca de metade dos casos de MFF foi positiva para o marcador citotóxico TIA-1. Demonstrou-se haver um provável colapso do imunoprivilégio folicular nos linfomas cutâneos com expressão diminuída de moléculas HLA-G em comparação à pele normal. O aumento da expressão do MHCII poderia relaciona-se com o foliculotropismo na MFF e com o epidermotropismo na MFC / Introduction: Folliculotropic mycosis fungoides (FMF) is a subtype of cutaneous T cells lymphoma affecting mainly the hair follicle and seems to have a less favorable prognosis. Clinical information on the population affected by cutaneous lymphomas in Brazil is scarce. The immune privilege (IP) phenomenon involves the ability of some body sites remaining protected from inflammatory reactions. It has been suggested that normal hair follicle represents an IP location. We hypothesized that a collapse of this phenomenon would occur in FMF, with changes in the expression of classical major histocompatibility molecules (MHC) and in the expression of nonclassical MHC molecules (HLA-G) with a role in folliculotropism mechanism. The objectives of this study were to describe the clinical and epidemiological profile of patients with MFF, describe the histology and immunophenotype of cases of MFF and investigate the expression of MHC molecules. Methods: The medical records of patients from the outpatient Cutaneous Lymphoma Clinic of the University of Sao Paulo Medical School (FMUSP) diagnosed with MFF were reviewed (n = 33). The histological material from skin biopsies of patients with MFF from the Cutaneous Lymphomas Clinic of FMUSP and Northwestern University was stained and evaluated by semi-quantitative scale. In hematoxylin-eosin staining the following parameters were evaluated: epidermal neoplastic infiltrate, dermal neoplastic infiltrate, acanthosis/spongiosis, follicular mucinosis, connective tissue fibroplasia, presence of eosinophils and plasma cells, cell size and degree of follicular damage. We analyzed the positivity of the neoplastic infiltrate for the following cellular markers: CD1a, CD56, TIA-1, and CD117. Finally, the expression of histocompatibility complex HLA-G and MHC II in the neoplastic infiltrate and the follicular epithelium was investigated in MFF group and compared to patients with classical mycosis fungoides (CMF) and to normal skin. MHCII expression in the epidermis was also investigated. Results: The median age at diagnosis was 46 years, with 61% classified as advanced stage disease. The ratio between men and women was 1.54, the median disease duration before diagnosis was three years. After a median time of follow-up of three years, 67% of the cases were alive with disease. Pruritus was reported in 82% of the cases. Histologically, an association between the presence of eosinophils and plasma cells with fibroplasia of collagen was found. There was a decrease of HLA-G expression in the follicular epithelium in MFF and CMF groups compared to normal skin. There was an increase of MHCII expression in the follicular epithelium in FMF group compared to normal skin. There was an increased MHCII expression in the epidermis in CMF compared to FMF. Conclusions: Clinical data from the studied population were similar to the previous literature in relation to advanced stage at diagnosis and prognosis. There was a relationship between the presence of eosinophils and plasma cells in neoplastic infiltrate and the connective tissue fibrosis. Near half of the cases of FMF was positive for the cytotoxic marker TIA-1. A possible hair follicle immune privilege collapse was suggested by a decreased expression of HLA-G molecules in FMF and CMF compared to normal skin. Increased MHCII expression appears to be involved in the folliculotropism of FMF and epidermotropism of CMF