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Previous issue date: 2015-05-07 / O teste de Allium cepa L. tem sido rotineiramente empregado para a avaliação de
ecotoxicologia e prospecção de efeitos biológicos. A estratégia mais comum
associada ao teste é a análise de parâmetros citogenéticos, tais como índice mitótico
e percentual de alterações cromossômicas. O uso da citometria de fluxo para a
análise de citogenotoxidade e mutagênese em A. cepa ainda é um aspecto pouco
explorado. Diante disto, o presente trabalho teve como objetivo estabelecer
parâmetros de citometria de fluxo para a análise de citogenotoxidade em A. cepa,
utilizando como agente mutagênico o cloreto de sódio. Bulbos de A. cepa foram
expostos em água destilada por um período mínimo de 24 horas e em seguida
submetidos às concentrações de cloreto de sódio (0; 31,25; 62,5; 125; 250 e
500mM) por 2, 4, 8, 12 e 24 horas. O cloreto de sódio foi utilizado por ser conhecido
na literatura como indutor de morte celular em plantas. Os parâmetros considerados
na citometria de fluxo foram: intensidade de fluorescência, FSC (tamanho nuclear) e
SSC (complexidade nuclear). Já na análise citogenética, os parâmetros avaliados
foram índice mitótico (IM) e alterações cromossômicas. Foi realizado ensaio cometa
nos tratamentos expostos por 24 horas para a averiguação de fragmentação do
DNA. Células controle foram caracterizadas quanto ao tamanho nuclear, por meio de
técnicas citogenéticas e pela citometria de fluxo. Houve redução no IM com o
aumento da concentração e tempo de exposição aos tratamentos. Da mesma forma,
os resultados de citometria de fluxo indicaram uma diminuição gradual significativa
no percentual de células em G1, S e S + G2. Nos tratamentos com índice mitótico
próximo ou igual a zero foram observadas características de morte celular, como
condensação do núcleo (diminuição do FSC e intensidade de fluorescência) e
fragmentação do material genético (aumento de sub-G1 e coeficiente de variação);
esta fragmentação também foi observada no ensaio cometa. Os resultados da
análise de complexidade interna (SSC) foram inversamente proporcionais aos dados
de tamanho nuclear (FSC), indicando que a condensação da cromatina ocorre de
maneira irregular. Diante dos resultados, pode-se identificar que estes parâmetros de
citometria de fluxo podem ser utilizados com segurança na avaliação de morte
celular em A. cepa, considerando as características de condensação do núcleo e
fragmentação do DNA. Curiosamente, em todas as análises a concentração 62,5mM
de NaCl se destacou por apresentar um elevado percentual de c-metáfases e
algumas metáfases poliploidizadas. Esta mesma concentração foi testada quanto à
capacidade de induzir c-metáfases em células de alface e tomate e os resultados
sugerem o cloreto de sódio como potencial agente antimitótico. / Allium cepa L. assay has been routinely used for the evaluation of ecotoxicology and prospecting of biological effects. The most common strategy associated with this test is the analysis of cytogenetic parameters such as mitotic index and percentage of chromosomal abnormalities. The use of flow cytometry for cytogenotoxicity and mutagenesis analysis in A. cepa is still an unexplored aspect. The present work aims to establish parameters from flow cytometry for cytogenotoxicity analysis in the Allium cepa test using with mutagen, sodium chloride. A. cepa bulbs were exposed in distilled water for a minimum of 24 hours and then exposed to the concentrations of sodium chloride (0, 31.25, 62.5, 125, 250, and 500mM) for 2, 4, 8, 12 and 24 hours. The sodium chloride was used because it is known in the literature as an inducer of cell death in plants. The parameters considered in flow cytometry were: fluorescence intensity, FSC (nuclear diameter) and SSC (nuclear complexity). In the cytogenetic analysis, the parameters evaluated were: mitotic index (MI) and chromosomal alterations. Comet assay was carried out in treatments exposed for 24 hours to the investigation of DNA fragmentation. Control cells were characterized by nuclear size, either by cytogenetic as by flow cytometry. A decrease in the percentage of dividing cells was observed in a dose-time dependent. Likewise, the results of flow cytometry showed significant decrease in the percentage of cells in G1, S and S + G2. In the treatments with mitotic index equal or close to zero features of cell death were observed as nuclei condensation (decrease of the FSC and fluorescence intensity) and fragmentation of genetic material (increased sub-G1 and coefficient of variation); this fragmentation was also viewed by comet assay. The results of analysis of internal complexity (SSC) were inversely proportional to the FSC data indicating that chromatin condensation occurs irregularly in the nuclear membrane. From the results, you can identify those parameters that flow cytometry can be used safely in assessing cell death in A. cepa, considering the characteristics of the nucleus condensation and DNA fragmentation. Interestingly, in all analyzes the NaCl concentration 62,5mM stood out with a high percentage of c-metaphase and some polyploid metaphase. This same concentration was tested for ability to induce c-metaphases lettuce and tomato cells and the results suggest the potential sodium chloride as antimitotic agent.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:hermes.cpd.ufjf.br:ufjf/100 |
| Date | 07 May 2015 |
| Creators | Oliveira , Cynthia Elaine de |
| Contributors | Campos, José Marcello Salabert de, Viccini, Lyderson Facio, Vieira, Larissa Fonseca Andrade |
| Publisher | Universidade Federal de Juiz de Fora, Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologia, UFJF, Brasil, ICB – Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFJF, instname:Universidade Federal de Juiz de Fora, instacron:UFJF |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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