Resumo: A presente pesquisa visou isolar e caracterizar polissacarídeos presentes em cogumelos comestíveis, bem como determinar novos métodos de obtenção dessas moléculas através de cultivo submerso desses fungos. O objetivo de se estudar esses polissacarídeos, em especial as p-glucanas, é devido à capacidade dos mesmos em atuar como imunomoduladores no organismo humano, propiciando a melhora para algumas doenças como tumores, artrite reumatóide, alergias, entre outras. Foram testados alguns polissacarídeos isolados em um modelo de estudo para a resposta imune, utilizando a linhagem monocítica de células humanas THP-1. Inicialmente foram determinadas algumas condições de cultivo do basidiomiceto Pleurotus pulmonarius, sendo possível obter polissacarídeos semelhantes aos isolados do basidioma, com rendimento superior. Também foram utilizados os cogumelos Agaricus bisporus, A. brasiliensis e Cordyceps militaris, com os quais se procederam a extrações aquosas e alcalinas, seguidas de processos de purificação para obtenção de seus polissacarídeos. Os dois primeiros também são basidiomicetos e apresentaram polissacarídeos semelhantes, considerando que pertencem ao mesmo gênero. Foi observada a presença de uma p-glucana-(1->6), de uma a-glucana- (1->4)-(1->6) e de uma manogalactana em ambos os cogumelos. Entretanto, as proporções de cada um variaram entre eles, sendo que A. bisporus apresentou maior teor do heteropolissacarídeo, enquanto A. brasiliensis apresentou maior teor de p-glucana. Extratos brutos de ambos os basidiomicetos foram testados em macrófagos, sendo seus efeitos semelhantes, independentemente da composição polissacarídica apresentar essa variação na proporção. Pôde-se observar moderado aumento na expressão de IL-ip, TNF-a e COX-2 e inibição dos efeitos inflamatórios de LPS quando as células foram tratadas com esses extratos. As p-glucanas-(1->6) de Agaricus spp. apresentaram elevado aumento da expressão dos genes pró-inflamatórios testados e moderada inibição dos efeitos de LPS. Também foram isolados uma galactomanana com alto teor de ramificação de C. militaris e uma p-glucana-(1->3) linear. Ambos os polissacarídeos são comumente encontrados em ascomicetos, grupo ao qual este cogumelo pertence. A p-glucana-(1->3) foi analisada quanto a sua capacidade de estimular o sistema imune, mostrando ser incapaz de estimular a expressão de IL-ip, TNF-a, COX-2 e NF-KB. Entretanto, essa mesma glucana apresentou grande inibição dos efeitos desencadeados por LPS, mostrando uma capacidade antiinflamatória. Sugere-se que as p-glucanas-(1->6), por serem solúveis, estejam ativando receptores do tipo Toll like (TLRs), os quais ativam a expressão de NF-KB, que por sua vez, estimula a produção de outras moléculas pró-inflamatórias. A p-glucana-(1->3) foi, entretanto, incapaz de ativar esses receptores. A insolubilidade em água dessa molécula sugere que a ligação ocorra com o receptor dectina-1, entretanto ainda precisa ser esclarecida qual via de ativação é desencadeada por essa ligação, visto que os efeitos gerados são antiinflamatórios. Moléculas solúveis também podem ligar-se a dectina-1, porém somente moléculas insolúveis são capazes de ativar esse receptor. Outros estudos são necessários para se determinar como essas p-glucanas estão inibindo a ação inflamatória do LPS, sendo uma possível explicação, a competição pela ligação com o mesmo receptor de membrana. Os resultados observados nessa pesquisa mostraram a importância da determinação da estrutura química dos polissacarídeos para uma eficiente avaliação das suas propriedades terapêuticas, visando esclarecer mecanismos de ação, vias de ativação, bem como os efeitos proporcionados pelo tratamento com essas moléculas.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:dspace.c3sl.ufpr.br:1884/32255 |
| Date | 02 October 2013 |
| Creators | Smiderle, Fhernanda Ribeiro |
| Contributors | Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Programa de Pós-Graduaçao em Bioquímica, Iacomini, Marcello |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPR, instname:Universidade Federal do Paraná, instacron:UFPR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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