Resumo: Os fungos gasteroides compõem um grupo morfológico de Basidiomycota cuja produção de esporos ocorre em um himênio fechado e a dispersão dos mesmos é passiva. Eram conhecidas, até então, 44 espécies de gasteromicetos no Paraná, porém a maioria dos estudos foi realizada em Florestas Ombrófilas na região de Curitiba. Nesse sentido, este trabalho teve por objetivo realizar um levantamento dos fungos gasteroides no Parque Estadual São Camilo (PESC), unidade de conservação localizada no município de Palotina, oeste do Paraná. As coletas foram realizadas entre junho/2011 e julho/2012, em trilhas na área, depois analisadas macroscopicamente e microscopicamente. O estudo de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) foi realizado a fim de analisar a topografia dos basidiósporos e corroborar as identificações. Os espécimes coletados foram depositados no Herbário do Campus Palotina (HCP), exceto os holótipos, que foram depositados no Herbário do Departamento de Botânica (UPCB), ambos da Universidade Federal do Paraná. Ao todo, foram coletados 137 espécimes, representando 27 espécies de fungos gasteroides, pertencentes às subclasses Agaricomycetidae e Phallomycetidae. Em Agaricomycetidae, todas espécies pertencem à família Agaricaceae (Agaricales) e correspondem aos gêneros Arachnion (1 espécie), Bovista (2), Calvatia (4), Cyathus (2), Lycoperdon (2) e Morganella (3). Duas famílias de Phallomycetidae foram identificadas: Phallaceae (Phallales), com uma espécie de Mutinus, e Geastraceae (Geastrales), com 12 espécies de Geastrum. Duas novas espécies são descritas: Calvatia guzmanii e Morganella sulcatostoma. São novas ocorrências para o Paraná: Arachnion album, Bovista aestivalis, Calvatia fragilis, Cyathus montagnei, Lycoperdon perlatum, Morganella afra, M. pyriformis, Geastrum coronatum, G. lageniforme e G rufescens. Com a realização do presente estudo, foi ampliada a lista de espécies de fungos gasteroides do Paraná de 44 para 56 espécies e a distribuição geográfica de várias espécies, já que a maioria delas não havia sido registrada nessa região do estado.

Os basidiomicetos Pleurotus sajor-caju e Lentinula edodes despertam grande interesse industrial devido às propriedades nutritivas e terapêuticas e também devido à capacidade de secreção de fenol-oxidases, enzimas com grande potencial biotecnológico. O melhoramento genético torna-se importante para a obtenção de variantes com características de interesse, podendo ser realizado através de protoplastização e mutagênese. No presente estudo o objetivo foi a obtenção de clones com maior atividade de fenol-oxidases (com ênfase para as lacases) e clones com maior produtividade de basidiomas, visando possíveis aplicações biotecnológicas e industriais. As linhagens P. sajor-caju PS-2001 e L. edodes LE-06 foram submetidas às técnicas de protoplastização e mutagênese de protoplastos (radiação UV) e por método seletivo foram isolados clones com maior relação halo/colônia e também com maior diâmetro da colônia em relação aos parentais. Inicialmente realizou-se cultivo submerso em diferentes meios com o intuito de identificar uma condição adequada para a secreção de fenol-oxidases pelas linhagens parentais de L. edodes e P. sajor-caju e neste contexto, o caldo batata dextrose (CBDY) apresentou resultados satisfatórios para ambas as linhagens. Os clones selecionados, dos dois fungos, foram cultivados em estado sólido utilizando serragem como substrato e também a cultivo submerso em meio CBDY para caracterização quanto ao crescimento e secreção de fenol-oxidases. Adicionalmente, os clones também foram cultivados em sacos contendo serragem para a avaliação da produtividade de basidiomas. Um dos clones obtidos em P. sajorcaju, mutante PS UV22, apresentou secreção 1,5 vezes maior de lacases, em relação à linhagem parental em cultivo sólido. Outro mutante, PS UV56, apresentou secreção 2,1 vezes maior de lacases, em relação ao parental em cultivo submerso. Com relação à produtividade de basidiomas, dois clones, (PS3 e PS UV30) apresentaram aumento significativo em relação ao parental PS-2001. Em L. edodes, foram identificados quatro clones (LE UV6, LE UV9, LE UV11 e LE UV20), com aumento significativo na atividade de lacases em relação ao parental LE-06, em cultivo submerso. No cultivo sólido foi selecionado um clone, mutante LE UV23 que apresentou atividade de lacases 2,6 vezes maior que a parental LE-06. A partir dos resultados obtidos, é possível afirmar que as técnicas de protoplastização e mutagênese podem ser utilizadas no melhoramento genético de L. edodes e P. sajor-caju para aumento da atividade enzimática e produtividade de basidiomas. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-06-12T13:04:13Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Anameli Lipreri.pdf: 3300819 bytes, checksum: ce60a0054f415dc33b8cca4173ce757f (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-12T13:04:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Anameli Lipreri.pdf: 3300819 bytes, checksum: ce60a0054f415dc33b8cca4173ce757f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The basidiomycetes Pleurotus sajor-caju and Lentinula edodes exhibit great industrial interest due to properties nutritional and therapies and also due the secretion capacity of phenoloxidases, enzymes with high biotechnological potential. The improvement genetic becomes important to obtaining variants with features of interest, which can be obtained with protoplastization and mutagenesis techniques. In this study the objective was obtaining clones with increased activity of phenoloxidases (emphasizing laccases) and clones with high productivity of the mushroom, seeking possible biotechnological and industrial applications. The strains P. sajor-caju PS-2001 and L. edodes LE-06 were subjected to protoplastization and mutagenesis of protoplasts by radiation UV method, and, by selective clones were isolated with more relation halo/colony and also the larger diameter of the colony in comparison with their parents. Initially held submerged cultive in different medium in order to identify the more adequate condition for growth and enzyme secretion by parental strains (L. edodes and P. sajorcaju). In this context, the potato dextrose broth (CBDY) showed satisfactory results for both strains. The new selected clones, from the two fungi were submitted to solid-state cultive using sawdust as the substrate and also to the submerged cultive in medium CBDY. In addition, new clones were also grown in bags containing sawdust to evaluate the productivity of the basidiomes. One of the mutants obtained from P. sajor-caju, strain PS UV22, showed 1.5 fold higher secretion of laccase in comparison of the parental strain growing on solid-state cultive. Another mutant, strain PS UV56, showed 2.1 fold higher secretion of laccases, compared to parental submerged cultive. Regarding the productivity of basidiomes, two clones (PS3 and PS UV30), showed a significant increase in comparison with parental PS-2001. In L. edodes, it was identified two clones (LE UV9 and LE UV20), with a significant increase in laccase activity in relation to parental LE-06 in submerged cultive. For solid-state cultive was selected a clone, mutant LE UV23 that showed laccase activity 2.6 times greater than the parental LE-06. From the results obtained in this study, it can be predicate that the protoplast formation and mutagenesis techniques can be used in improvement genetic of L. edodes and P. sajor-caju for enzyme activity and increased productivity of the basidiomes.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-11T21:06:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Emília de Medeiros Roberto.pdf: 2427887 bytes, checksum: 98fa3502db60df7b1feef1a3e2887aa1 (MD5) / Rejected by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br), reason: Ajustes para Pedro realizar. on 2018-07-11T21:10:32Z (GMT) / Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-11T21:13:25Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Carla Rejane Sousa de Lira.pdf: 8856315 bytes, checksum: 49b2bcdfabf0b25b09c24662646ef705 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-13T22:41:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Carla Rejane Sousa de Lira.pdf: 8856315 bytes, checksum: 49b2bcdfabf0b25b09c24662646ef705 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:41:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Carla Rejane Sousa de Lira.pdf: 8856315 bytes, checksum: 49b2bcdfabf0b25b09c24662646ef705 (MD5) Previous issue date: 2016-05-12 / CAPES / Os Agaricomycetes são caracterizados por desenvolverem basidiomas onde produzem basídios e basidiosporos. Grande parte dos representantes deste grupo degrada componentes da madeira, sendo assim chamados de lignolíticos ou lignocelulolíticos. Para ampliar o conhecimento sobre a diversidade taxonômica e ecológica desse grupo de fungos em áreas de Caatinga, foram realizadas coletas em seis áreas de caatinga xerófila e em seis de brejos de altitude, totalizando 72 transectos percorridos. Para avaliar a diversidade, foram utilizados testes de χ² e ANOSIM. No presente estudo, foram coletados 2249 espécimes correspondendo a 191 espécies de Agaricomycetes lignocelulolíticos. Dentre estas espécies, há 132 novos registros para estados, região, bioma, país, continente ou ciência. Após 102 visitas a campo, as curvas cumulativas de espécies não se estabilizaram, indicando que mais coletas são necessárias. Apesar disso, os esforços amostrais, de modo geral, variaram entre 58 e 85% da riqueza estimada e foram considerados suficientes no presente trabalho. De acordo com a frequência relativa das espécies, em todas as áreas analisadas a maioria dos táxons foram classificados como raros, sendo a minoria classificada como abundante. Os resultados dos testes mostraram que há diferença significativa na composição, riqueza e a abundância de espécies entre as fitofisionomias, sendo coletados um maior número de espécies e espécimes nas áreas de brejo de altitude. Entre as áreas preservadas e antropizadas do Parque Nacional do Catimbau, não houve diferença significativa na riqueza e na abundância de espécies, indicando que não há influencia das atividades antrópicas na ocorrência de Agaricomycetes poróides no local. Foram coletados mais espécimes durante o período chuvoso, porém não houve diferenciação na riqueza e na composição de espécies entre as estações seca e chuvosa nas áreas de Caatinga estudadas. Também foram empregadas ferramentas moleculares para elucidação de complexos de espécies. A partir delas, foi possível encontrar as novas espécies Datroniella minuta, Megasporoporiella variabilicolor, Perenniporia brasiliensis e P. paraguyanensis e ainda propor as duas novas combinações Megasporoporiella amazonica e M. anoectopora. / The Agaricomycetes are characterized by developing basidiomata in which basidia and basidiospores are produced. Most of the representatives of this group degrades components of wood, so called lignolitics or lignocellulolytic fungi. To increase knowledge about the taxonomic and ecological diversity of this group of fungi in areas of Caatinga, collections were made in six xerophytic areas and six montane areas, totaling 72 visited transects. To assess the diversity of these fungi, χ² and ANOSIM tests were used. In this study, were collected 2249 specimens representing 191 species lignocellulolytic Agaricomycetes. Among these species, 132 are new records for states, region, biome, country, continent or science. After 102 field visits, the cumulative curves of species did not stabilized, indicating that more collections are required. Despite this, effort sampling, generally ranged between 58 and 85% of the estimated richness and was considered sufficient in present work. According to the relative frequency of the species in all analyzed areas, most taxa were classified as rare, being the minority classified as abundant. The test results showed significant differences in composition, richness and abundance of species between vegetation types, and more species and specimens being collected in the areas of altitude. Among the native and disturbed areas of Catimbau National Park, there was no significant difference in the richness and abundance of species, indicating no influence of human activities on the occurrence of poroid Agaricomycetes on site. More specimens were collected during the rainy season, but there was no difference in the richness and species composition between the dry and rainy seasons in the studied areas of Caatinga. Also used were molecular tools to elucidate complex species. It was possible to find the new species Datroniella minuta, Megasporoporiella variabilicolor, Perenniporia brasiliensis and P. paraguyanensis and also to propose two new combinations Megasporoporiella amazonica and M. anoectopora.

Os basidiomicetos Pleurotus sajor-caju e Lentinula edodes despertam grande interesse industrial devido às propriedades nutritivas e terapêuticas e também devido à capacidade de secreção de fenol-oxidases, enzimas com grande potencial biotecnológico. O melhoramento genético torna-se importante para a obtenção de variantes com características de interesse, podendo ser realizado através de protoplastização e mutagênese. No presente estudo o objetivo foi a obtenção de clones com maior atividade de fenol-oxidases (com ênfase para as lacases) e clones com maior produtividade de basidiomas, visando possíveis aplicações biotecnológicas e industriais. As linhagens P. sajor-caju PS-2001 e L. edodes LE-06 foram submetidas às técnicas de protoplastização e mutagênese de protoplastos (radiação UV) e por método seletivo foram isolados clones com maior relação halo/colônia e também com maior diâmetro da colônia em relação aos parentais. Inicialmente realizou-se cultivo submerso em diferentes meios com o intuito de identificar uma condição adequada para a secreção de fenol-oxidases pelas linhagens parentais de L. edodes e P. sajor-caju e neste contexto, o caldo batata dextrose (CBDY) apresentou resultados satisfatórios para ambas as linhagens. Os clones selecionados, dos dois fungos, foram cultivados em estado sólido utilizando serragem como substrato e também a cultivo submerso em meio CBDY para caracterização quanto ao crescimento e secreção de fenol-oxidases. Adicionalmente, os clones também foram cultivados em sacos contendo serragem para a avaliação da produtividade de basidiomas. Um dos clones obtidos em P. sajorcaju, mutante PS UV22, apresentou secreção 1,5 vezes maior de lacases, em relação à linhagem parental em cultivo sólido. Outro mutante, PS UV56, apresentou secreção 2,1 vezes maior de lacases, em relação ao parental em cultivo submerso. Com relação à produtividade de basidiomas, dois clones, (PS3 e PS UV30) apresentaram aumento significativo em relação ao parental PS-2001. Em L. edodes, foram identificados quatro clones (LE UV6, LE UV9, LE UV11 e LE UV20), com aumento significativo na atividade de lacases em relação ao parental LE-06, em cultivo submerso. No cultivo sólido foi selecionado um clone, mutante LE UV23 que apresentou atividade de lacases 2,6 vezes maior que a parental LE-06. A partir dos resultados obtidos, é possível afirmar que as técnicas de protoplastização e mutagênese podem ser utilizadas no melhoramento genético de L. edodes e P. sajor-caju para aumento da atividade enzimática e produtividade de basidiomas. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The basidiomycetes Pleurotus sajor-caju and Lentinula edodes exhibit great industrial interest due to properties nutritional and therapies and also due the secretion capacity of phenoloxidases, enzymes with high biotechnological potential. The improvement genetic becomes important to obtaining variants with features of interest, which can be obtained with protoplastization and mutagenesis techniques. In this study the objective was obtaining clones with increased activity of phenoloxidases (emphasizing laccases) and clones with high productivity of the mushroom, seeking possible biotechnological and industrial applications. The strains P. sajor-caju PS-2001 and L. edodes LE-06 were subjected to protoplastization and mutagenesis of protoplasts by radiation UV method, and, by selective clones were isolated with more relation halo/colony and also the larger diameter of the colony in comparison with their parents. Initially held submerged cultive in different medium in order to identify the more adequate condition for growth and enzyme secretion by parental strains (L. edodes and P. sajorcaju). In this context, the potato dextrose broth (CBDY) showed satisfactory results for both strains. The new selected clones, from the two fungi were submitted to solid-state cultive using sawdust as the substrate and also to the submerged cultive in medium CBDY. In addition, new clones were also grown in bags containing sawdust to evaluate the productivity of the basidiomes. One of the mutants obtained from P. sajor-caju, strain PS UV22, showed 1.5 fold higher secretion of laccase in comparison of the parental strain growing on solid-state cultive. Another mutant, strain PS UV56, showed 2.1 fold higher secretion of laccases, compared to parental submerged cultive. Regarding the productivity of basidiomes, two clones (PS3 and PS UV30), showed a significant increase in comparison with parental PS-2001. In L. edodes, it was identified two clones (LE UV9 and LE UV20), with a significant increase in laccase activity in relation to parental LE-06 in submerged cultive. For solid-state cultive was selected a clone, mutant LE UV23 that showed laccase activity 2.6 times greater than the parental LE-06. From the results obtained in this study, it can be predicate that the protoplast formation and mutagenesis techniques can be used in improvement genetic of L. edodes and P. sajor-caju for enzyme activity and increased productivity of the basidiomes.

Orientador: Lucia Regina Durrant / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-29T04:56:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_KarlaCristinaFreitas_M.pdf: 22509011 bytes, checksum: c132df0a2cb53e34eb8a887cf91c67c7 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Este trabalho descreve a ação de fungos basidiomicetos na degradabilidade dos quatro principais polímeros sintéticos utilizados em embalagens de alimentos: polietileno tereftalato (PET), polipropileno (PP), poliestireno (PS), policloreto de vinila (PVC), e um outro polímero sintético, a espuma poliuretana (PU). Os microrganismos foram crescidos em meio líquido de sais, pH 6,8, contendo 0,1 % de tiamina, com 0,5 % do polímero sintético como única fonte de carbono durante 20, 30 e 40 dias de cultivo. A biodegradabilidade destes plásticos foi avaliada pelo monitoramento de crescimento dos organismos degradadores de lignocelulose em meio líquido Carbono-deficiente, determinação da perda de massa molar dos polímeros, da massa celular crescida na superfície, e examinação microscópica no final dos ensaios de incubação por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), a qual indicou alterações na integridade dos plásticos, particularmente em amostras de PVC, que sofreram reduções de massa muito significantes (cerca de 20 %). A habilidade fúngica para produção de enzimas celulolíticas e ligninolíticas tais como avicelase, xilanase, carboximetilcelulase, manganês peroxidase, lignina peroxidase, álcool veratrílico oxidase e lacase, assim como de biosurfactantes foi observada, revelando o potencial destes organismos para processos de biodegradação. A detecção de produtos de degradação dos plásticos no meio de cultura foi verificada utilizando-se espectrofotometria UVNisível, na faixa de comprimento de onda de 200 a 500 nm, que produziu resultados interessantes para PVC com Pleurotus 001. A degradação dos polímeros foi investigada utilizando métodos viscosimétricos e Cromatografia de Permeação em Gel (GPC), resultando em perda de viscosidade dos polímeros após incubação com os microrganismos e discretas alterações nas distribuições das massas molares nos polímeros testados (PVC e PS). Nossos resultados indicaram a ocorrência de alterações estruturais nos polímeros sintéticos em decorrência do processo de biodegradação. / Abstract: This work describes the action of basidiomycetes fungi on the degradability of the four main synthetic polymers used in food packaging: polyethylene terephthalate (PET), polypropylene (PP), polystyrene (PS), polyvinyl chloride (PVC) and another synthetic polymer, a polyurethane foam (PU). The microorganisms were grown in the salts liquid medium, pH 6.8, containing 0.1 % of thiamine, with 0.5 % of synthetic polymer as the sole carbon source for 20,30 and 40 days of cultivation. The biodegradability of these plastics was evaluated by monitoring the growth of the lignocellulose-degrading organisms on carbondeficient liquid medium; determination of the molar mass loss of the polymers, of the cellular mass grown on the surface, and microscopic examination at the end of the incubation assays by Scanning Electron Microscopy (SEM), which indicated changes in the integrity of the plastics, particularly in PVC specimens, which suffered very significant mass reductions (about 20 %). The ability of the fungi to produce cellulolytic and ligninolytic enzymes, such as avicelase, xylanase, carboximethilcellulase, manganese peroxidase, lignin peroxidase, alcohol veratryl oxidase and laccase, as well as of biosurfactants was observed, revealing the potential of these organisms in biodegradation processes. The detection of degradation products of the plastics in the culture medium was verified using ultraviolet-visible spectrophotometry, in the wavelength range of 200 to 500 nm, which produced interesting results for PVC with Pleurotus 001. The degradation of the polymers, investigated using viscosimetric methods and Gel Permeation Chromatography (GPC), resulted in viscosity loss on the polymers following incubation with microorganisms and small changes in the molar mass distribution in the polymers tested (PVC and PS). Our results indicated structural alterations in the synthetic polymers due to biodegradation process. / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-01-25T16:45:19Z No. of bitstreams: 1 Betania_Barros_Cota.pdf: 18306356 bytes, checksum: deed89dbf117b1a6d715965faf6591af (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-25T16:45:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Betania_Barros_Cota.pdf: 18306356 bytes, checksum: deed89dbf117b1a6d715965faf6591af (MD5) Previous issue date: 2007 / As espécies estudadas neste trabalho foram selecionadas a partir de um estudo de triagem intitulado “Bioprospecção da Biodiversidade Mineira e Desenvolvimento de Novas Drogas em Minas Gerais”, em que extratos de espécies vegetais e fungos basidiomicetos, coletados em ecossistemas locais, foram submetidos a diversos ensaios biológicos. O extrato acetato em etila do meio líquido do fungo Lentinus strigosus inibiu a enzima tripanotiona redutase (TR) de Trypanosoma cruzi e seu fracionamento biomonitorado levou ao isolamento de quatro substâncias; neopanepoxidol, 6,7-epóxi-4(15)-hirsuteno-1,5-diol, hipnofilina e panepoxidona, sendo as duas últimas responsáveis pelas atividades biológicas do extrato. Esses dois metabólitos terpênicos apresentaram atividade citotóxica para três linhagens tumorais humanas (UACC-62 -melanoma; TK-10 - renal e MCF-7 - mama; CI de 3,2 μM a 11,0 μM), inibiram a proliferação de linfócitos induzidos por. fitohemaglutinina (CI de 5,9 μM e 10,0 μM), a enzima TR (CI de 48,5 μM a 1,0 μM) e o crescimento de formas amastigotas de T. cruzi (CI de 6,0 μM e 2,5 μM). Panepoxidona e hipnofilina já foram descritas anteriormente, porém, é a primeira vez que se relata o isolamento desses metabólitos em L. strigosus. O extrato bruto etanólico de Habenaria petalodes (Orquidaceae) apresentou atividade citotóxica para três linhagens tumorais humanas a 20 μg/ mL (UACC-62 - melanoma; TK-10 -renal e MCF-7 - mama). O extrato etanólico bruto de toda a planta foi extraído com diclorometano (fração apolar) e metanol/água (fração polar) por extração líquidolíquido. A fração diclorometânica apresentou actividade citotóxica para as três linhagens de células tumorais a 20 μg/ mL e foi selecionada para posterior fracionamento biomonitorado devido a sua baixa massa e complexidade química. Devido à ausência de relatos sobre os constituintes químicos, as frações polares de Habenaria petalodes (Orquidaceae) foram priorizadas para estudo fitoquímico. A fração polar foi extraída em cartucho Sep-Pak C e forneceu as subfrações, metanólica e aquosa que foram fracionadas por técnicas cromatográficas, obtendose três derivados do ácido succínico; loroglossina, militarina e dactilorina acetilada no anel 2 e, três flavonóides: isoquercitrina, isoramnetina 3-O-β-glicopiranosídeo e 50 50 50 50. 18 isoramnetina 3,7-di-O-β-glicopiranosídeo, isolados pela primeira vez nesta espécie vegetal (AU / In a previous screening work many vegetal species and basidiomycete fungi were collected on local ecosystems and tested in several bioassays. From this work we selected to study the Lentinus strigosus fungus and Habenaria petalodes orchid. The ethyl acetate extract from the culture of fungus inhibited the enzyme trypanothione reductase (TRYR) from Trypanosoma cruzi. The chromatographic fractionation guided by inhibition of trypanothione reductase assay of L. strigosus extract furnished four compounds, neopanepoxidol, 6,7-epoxi-4(15)-hirsutene-1,5-diol, hypnophilin and panepoxidone, reported from this fungus species for the first time. Panepoxidone and hypnophilin, the bioactive compounds of the extract, showed a cytotoxic activity on human tumour cell lines (IC 3.2 to 11.0 μm), inhibited the lymphocyte proliferation (IC 5.9 and 10.0 μm), the TRYR enzyme (IC 48.5 to 1.0 μm) and the growth of amastigotes of T. cruzi (IC de 6.0 and 2.5 μm). The ethanolic crude extract of Habenaria petalodes (Orchidaceae) showed cytotoxic activity in three human tumour cell lines, at 20 μg.ml (UACC-62 - melanome; TK-10 - kidney e MCF-7 - breast). The ethanolic crude extract of whole plant was extracted with dichlorometane (apolar fraction) and methanol/water (polar fraction) by liquid-liquid extraction. The apolar fraction showed cytotoxic activity in the three human tumour cell lines, at 20 μg.ml and was selected for further guided fractionation because low mass and complexity of this fraction. The chemical investigations of polar fractions of H. petalodes was performed because there is no previous studies of this plant. The polar fraction was subjected to Sep-Pak C cartridge to give two polar subfrations, the methanolic and aqueous. These subfractions were purified by chromatographic techniques furnishing three succinic acid derivatives, loroglossine, militarine and dactilorine acylated in the ring 2, and three flavonoids: isoquercitrine, isoramnetin 3-O-β-glycopyranoside and isoramnetin 3,7-di-O-β-glycopyranoside, related in this species from the first time.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-05T22:22:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 319058.pdf: 1195939 bytes, checksum: 7a16d693bd3b53a8e32368cbf4998a3e (MD5) Previous issue date: 2013 / A quitosana é um polímero de larga aplicação, destacando-se por ser estável, atóxico, filmogênico e apresentar potencial elétrico natural. Apresenta também biodegradabilidade, biocompatibilidade e mucoadesividade, além de ação antioxidante e antimicrobiana. Em geral, a quitosana é um produto derivado da quitina de crustáceos oriundos da indústria pesqueira. Seu fornecimento é afetado por instabilidades climáticas, carecendo de controle de qualidade e padronização da matéria-prima. Adicionalmente, os processos de extração são demorados e com considerável impacto ambiental. Estudos têm evidenciado o potencial de produção de quitosana prontamente extraível de microrganismos. Esse processo tem a vantagem do total acompanhamento do processo, do baixo custo e a possibilidade de controle de qualidade da matéria-prima. Além do mais, os processos de extração e purificação são mais rápidos e menos poluentes. Nesse contexto, a possibilidade de uma produção padronizada, aliada à extração facilitada e menor probabilidade de efeitos toxicológicos dos extratos de origem marinha, são diferenciais que motivaram este trabalho. O Laboratório de Bioprocessos da UFSC vem trabalhando no desenvolvimento de processos para o cultivo de microrganismos em biorreatores para produção de biomassa e obtenção de substâncias bioativas, sendo este trabalho parte de suas pesquisas. Além de avaliar biomassa residual da extração de betaglucanas e glucomananas de um fungo basidiomiceto para a obtenção de quitosana, também se isolou e estudou o processo de produção e extração de aminopolissacarídeos de cultivo submerso em biorreator airlift e biorreator de tanque agitado. Optou-se por metodologias de extração heterogênea (termoquímica) e os resultados obtidos apontam consideráveis diferenças entre os dois fungos. As diferenças são relacionadas tanto aos cultivos, quanto aos processos necessários para a extração dos materiais de interesse, além do rendimento, produtividade e qualidade dos mesmos. Os resultados reafirmam que fungos da ordem Mucorales destacam-se como alternativa para a produção de amino polissacarídeos, sobretudo quitosana. Assim, a busca por novos isolados, o aprimoramento das condições de cultivo e de extração dos compostos são os indicativos importantes a serem seguidos .<br>

O corpo de frutificação do basidiomiceto Ganoderma multiplicatum seco, moído e deslipidificado foi submetido a extrações aquosas e alcalinas (KOH a 2, 10, 20 e 30%). O extrato aquoso foi primeiramente submetido a precipitação com etanol, enquanto que os extratos alcalinos foram submetidos a precipitação com adição de ácido acético até ~ pH 5,0. Os extratos obtidos foram submetidos aos processos de purificação por congelamento e degelo, precipitação com solução de Fehling e por ultrafiltração e diálise em membranas de diferentes porosidades, respectivamente. A partir destes processos foram purificadas e caracterizadas diferentes estruturas. As frações 10ESFW e 10RSFW, obtidas por extração aquosa, apresentaram-se homogêneas quando analisadas por HPSEC e compostas principalmente por glucose. O espectro de RMN- ¹³C apresentou sinais na região anomérica em d 102,7 e 102,3 correspondentes ao C-1 sugerindo configuração glicosídica do tipo b. Além destes, também foi observado sinais pouco intensos em d 100,3 e 97,7 correspondentes ao C-1, provavelmente, em configuração do tipo a. Estes dados sugerem a presença de uma glucana apresentando unidades em a e b configuração. A fração eluída (30EPFW) e a fração retida (30RPFW) apresentaram fucose, xilose e manose como principais monossacarídeos, sugerindo tratar-se de uma fucoxilomanana. As frações 10ESFK2 e 10RSFK2, obtidas a partir do sobrenadante de Fehling (SFK2) da extração com KOH 2%, apresentaram-se homogêneas e glucose como principal monossacarídeo. Os dados obtidos por RMN- ¹³C, DEPT e análise de metilação sugerem a presença de uma b-glucana ramificada contendo, principalmente, ligações do tipo (1 - 3) e (1 - 6). Também pode ser observado unidades ligadas (1 - 4). A partir da extração com KOH 10% foi isolada uma xilomanana (30RPFP5 e 30EPFP5). As análises de metilação, juntamente com os dados de RMN-¹³C, sugerem um heteropolissacarídeo ramificado contendo uma cadeia principal formada por unidades de a-D-Manp ligadas (1 - 4) e parcialmente substituída em O-3 por terminais não redutores de b-Xylp. Uma glucana linear com ligações do tipo b-(1 - 3), denominada de laminarana, foi obtida por extração com KOH 20%. Além destas estruturas, foi isolada, da extração com KOH 30%, uma b-glucana ramificada contendo uma cadeia principal com ligações do tipo (1 - 3) a qual encontra-se substituída em O-6 apenas por unidades de b-Glcp-(1 - 4)- ligadas. Estes dados foram confirmados por análises de metilação, degradação controlada de Smith e RMN-¹³C

Resumo: A presente pesquisa visou isolar e caracterizar polissacarídeos presentes em cogumelos comestíveis, bem como determinar novos métodos de obtenção dessas moléculas através de cultivo submerso desses fungos. O objetivo de se estudar esses polissacarídeos, em especial as p-glucanas, é devido à capacidade dos mesmos em atuar como imunomoduladores no organismo humano, propiciando a melhora para algumas doenças como tumores, artrite reumatóide, alergias, entre outras. Foram testados alguns polissacarídeos isolados em um modelo de estudo para a resposta imune, utilizando a linhagem monocítica de células humanas THP-1. Inicialmente foram determinadas algumas condições de cultivo do basidiomiceto Pleurotus pulmonarius, sendo possível obter polissacarídeos semelhantes aos isolados do basidioma, com rendimento superior. Também foram utilizados os cogumelos Agaricus bisporus, A. brasiliensis e Cordyceps militaris, com os quais se procederam a extrações aquosas e alcalinas, seguidas de processos de purificação para obtenção de seus polissacarídeos. Os dois primeiros também são basidiomicetos e apresentaram polissacarídeos semelhantes, considerando que pertencem ao mesmo gênero. Foi observada a presença de uma p-glucana-(1->6), de uma a-glucana- (1->4)-(1->6) e de uma manogalactana em ambos os cogumelos. Entretanto, as proporções de cada um variaram entre eles, sendo que A. bisporus apresentou maior teor do heteropolissacarídeo, enquanto A. brasiliensis apresentou maior teor de p-glucana. Extratos brutos de ambos os basidiomicetos foram testados em macrófagos, sendo seus efeitos semelhantes, independentemente da composição polissacarídica apresentar essa variação na proporção. Pôde-se observar moderado aumento na expressão de IL-ip, TNF-a e COX-2 e inibição dos efeitos inflamatórios de LPS quando as células foram tratadas com esses extratos. As p-glucanas-(1->6) de Agaricus spp. apresentaram elevado aumento da expressão dos genes pró-inflamatórios testados e moderada inibição dos efeitos de LPS. Também foram isolados uma galactomanana com alto teor de ramificação de C. militaris e uma p-glucana-(1->3) linear. Ambos os polissacarídeos são comumente encontrados em ascomicetos, grupo ao qual este cogumelo pertence. A p-glucana-(1->3) foi analisada quanto a sua capacidade de estimular o sistema imune, mostrando ser incapaz de estimular a expressão de IL-ip, TNF-a, COX-2 e NF-KB. Entretanto, essa mesma glucana apresentou grande inibição dos efeitos desencadeados por LPS, mostrando uma capacidade antiinflamatória. Sugere-se que as p-glucanas-(1->6), por serem solúveis, estejam ativando receptores do tipo Toll like (TLRs), os quais ativam a expressão de NF-KB, que por sua vez, estimula a produção de outras moléculas pró-inflamatórias. A p-glucana-(1->3) foi, entretanto, incapaz de ativar esses receptores. A insolubilidade em água dessa molécula sugere que a ligação ocorra com o receptor dectina-1, entretanto ainda precisa ser esclarecida qual via de ativação é desencadeada por essa ligação, visto que os efeitos gerados são antiinflamatórios. Moléculas solúveis também podem ligar-se a dectina-1, porém somente moléculas insolúveis são capazes de ativar esse receptor. Outros estudos são necessários para se determinar como essas p-glucanas estão inibindo a ação inflamatória do LPS, sendo uma possível explicação, a competição pela ligação com o mesmo receptor de membrana. Os resultados observados nessa pesquisa mostraram a importância da determinação da estrutura química dos polissacarídeos para uma eficiente avaliação das suas propriedades terapêuticas, visando esclarecer mecanismos de ação, vias de ativação, bem como os efeitos proporcionados pelo tratamento com essas moléculas.

Orientador: Lucia Regina Durrant / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:24:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reyes_LucianaFrias_M.pdf: 7919926 bytes, checksum: 4f5a782fdd9947f504bc1d077739b1f1 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Este trabalho tem como objetivo o estudo do crescimento e da ação degradativa de linhagens fúngicas no polímero sintético Polietileno Tereftalato (PET). Para tal, foram crescidos nove fungos basidiomicetos, entre eles Pleurotus sajor caJu, Pleurotus tailandia, Pleurotus sp (P.001 ), Phanerochaete chrysosporium, Agaricus campestris, Pleurotus sp (P1), Pleurotus sp (PSC 94/03), Flu e H2, em meio de cultura líquido de sais por períodos de 30, 60, 90 e 120 dias, e em meio de cultivo contendo farelo de trigo por 30, 60 e 90 dias de crescimento, a 30°C. Após incubação, foram avaliados crescimento qualitativo das linhagens, a diminuição de massa polimérica, a produção de enzimas ligninolíticas, e de biosurfactantes e determinadas medidas de viscosidade do PET. Todas as linhagens promoveram perda de massa do PET, destacando-se Phanerochaete chrysosporium (6,72%) com 90 dias de incubação, P.001 (5,79%) com 30 dias e P. sajorcaju (4,82%) e PSC 94/03 (4,13%) com 120 dias de cultivo. Com relação à produção enzimática, verificou-se que a Manganês Peroxidase apresentou os maiores valores de atividade, destacando-se Agaricus campestris (8,16 UI/Lmin) no período de cultivo de 120 dias em meio líquido, e PSC 94/03 (1900,77 UI/Lmin) com 90 dias de incubação em meio contendo farelo de trigo. As melhores produções de biosurfactantes, em meio líquido, foram obtidas com a linhagem H2 emulsão óleo/água (0,17) e Pleurotus 001 emulsão água/óleo (1,8 cm) com 120 dias de cultivo, e nos ensaios em meio contendo farelo e trigo com a linhagem Flu emulsão óleo/água (0,245) em 30 dias e PSC 94/03 emulsão água/óleo (2,25 cm) com 60 dias de crescimento. As amostras de PET apresentaram diminuição da ESTUDO DA DEGRADAÇÃO DE PET POR FUNGOS BASIDIOMICETOS LIGNINOLíncos viscosidade intrínseca, destacando-se Pleurotus sp (P.001) e Pleurotus sp (P1), indicando ocorrência de alterações estruturais do polímero causadas pelo crescimento dos microrganismos estudados neste substrato / Abstract: The goal of this work was to determine the ability of ine fungal strains to grow and degradae Polyethylene Terephtalate (PET). The basidiomycete fungi (Pleurotus sajor caju, Pleurotus tailandia, Pleurotus 001, Phanerochaete chrysosporium, Agaricus campestris, Pleurotus sp (P1), Pleurotus sp (PSC 94/03), and the strains Flu e H2) were cultivated at 30°C either in a mineralliquid medium for 30, 60, 90 and 120 days or in a wheatbran: water solid medium for 30, 60 and 90 days, both containing PET pellets. Following the incubation periods, the qualitative growth of the fungi, the loss of polymeric mass, the production of ligninolytic enzymes and the production of biosurfactants, as well as the viscosity of the PET, were investigated. P. chrysosporium showed the greatest loss of polymeric mass (6,72% in 90 days), followed by P.001 (5,79% in 30 days). P. sajor caju and PSC 94/03 caused 4,82% and 4,13% loss of polymeric mass, respectively, after 120 days of incubation. Strain H2 showed only 0,08% of degradation after 90 days of incubation. Ali the strains produced at least one of the enzymes under both culture conditions. A. campestris presented the highest levels of manganese-peroxidase activities in120 ddays of incubation in liquid medium, and PSC 94/03 after 90 days of incubation in solid medium. The best production of biosurfactant activities was observed following growth of Pleurotus tailandia (oil/water) and of Pleurotus sp (P.001) (water/oil emulsion), both in liquidmedium for 120 days. Following growth in solid medium best oil-in-water emulsion was produced by the strain Flu after 30 days and PSC 94/03 produced the best water-in-oil emulsion after 60 days of growth. Ali PET samples showed reduction oh the intrinsic viscosity when compared with the controls. The fungal strain P.001 and P1 presented lowest values for viscosity indicating the occurence of strutural modification in the PET caused by these microorganisms / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos