Memoria para optar al título de Bioquímico / El factor de crecimiento nervioso (NGF) es una neurotrofina, que inicialmente fue
descrita en el cerebro, y que en los últimos años ha adquirido importancia, debido a que actúa en
sitios no-neuronales, entre ellos el ovario, donde se ha encontrado que NGF participa en el
desarrollo ovárico, proliferación y diferenciación de células somáticas y en la esteroidogénesis.
Una de las etapas importantes que ocurren durante el desarrollo folicular y del cuerpo lúteo es la
angiogénesis, una de las moléculas importantes en este proceso es el factor de crecimiento de
endotelio vascular (VEGF).
NGF aumenta la expresión de VEGF en diversos tipos celulares. VEGF es regulado en
forma directa por el gen inducible por hipoxia (HIF-1) y en forma indirecta por c-Myc. Además
c-Myc, es un gen involucrado en la proliferación celular. En este trabajo se investigó el rol que
cumple NGF en la regulación de VEGF y la proliferación celular. Para este fin se utilizaron
células de granulosa humana, provenientes de pacientes del programa de fertilización asistida,
las cuales se cultivaron por 2, 4, 8 y 18 horas con NGF (50 ng/ml). Se midieron los niveles del
ARNm de VEGF, c-Myc e HIF-1 alfa por RT-PCR. En este trabajo el ARNm de las isoformas
de VEGF 165 y 121 aumentaron a las 4 y 8 horas respectivamente, los niveles del ARNm de
HIF-1 alfa se mantuvieron inalterados a todos los tiempos estudiados. Los niveles de ARNm de
c-Myc aumentaron a las 8 y 18 horas por efecto de NGF. Por Inmunocitoquímica se determinó
Ki67, un marcador de proliferación celular. La proteína Ki67 aumentó a las 8 y 18 horas por
efecto de NGF, concordando con la expresión génica de c-Myc.
Los resultados indican que NGF presenta la capacidad de aumentar, tanto la expresión
del ARNm de VEGF, como la proliferación en forma independiente, y que este aumento en la
proliferación sería en una etapa posterior al alza de VEGF y que probablemente el VEGF
expresado en las células de granulosa humana en cultivo, éste involucrado en la proliferación
directamente, esto podría suponer que una falla en la producción de NGF por parte del folículo podría llevar a éste a un crecimiento y maduración deficiente, debido a que no ocurriría una
angiogénesis y proliferación adecuada / The nerve growth factor (NGF) is a neurothrophin, initially described in the brain, that
has acquired importance in the last few years, because it has several functions in non-neuronal
tissues. One of these tissues is the ovary, where NGF participates in the ovarian development,
proliferation and differentiation of somatic cells and steroidogenesis. Angiogenesis is an
essential stage during follicular and luteal development, and one of the most important
molecules in this process is the vascular endothelial growth factor (VEGF).
NGF increases VEGF expression in different cell types. VEGF is directly regulated by
hypoxia inducible factor-1(HIF-1) and indirectly by c-Myc. c-Myc is also a gene involved in cell
proliferation. This work investigated the role of NGF in regulating VEGF and cell proliferation.
To this aim, granulosa cells obtained from patients undergoing in vitro fertilization were cultured
for 2, 4, 8 and 18 hours with NGF (50 ng/ml). The levels of VEGF, c-Myc and HIF-1alpha
mRNA were evaluated by RT-PCR. mRNA for VEGF 165 and VEGF 121 isoforms increase at 4
and 8 hours respectively. HIF-1alpha mRNA levels did not change at any time. NGF (50ng/ml)
induces c-Myc mRNA increase at 8 and 18 hours. Ki67 protein, a cell proliferation marker, was
determined by immunocytochemistry. Ki67 protein increases at 8 and 18 hours with NGF
stimulation, and no change was observed at 4 hours, agreeing with the genic expression of c-
Myc.
The results indicate that NGF is able to increase VEGF mRNA expression and cell
proliferation by independent ways, and that the increase in the proliferation would be a later
stage to VEGF's rise. It is probable that the VEGF expressed in cultured human granulosa cells
acts directly on cell proliferation, suggesting that fails in follicular NGF production might induce a deficient follicular growth and maturation, due to impairment in angiogenesis and cell
proliferation
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UCHILE/oai:repositorio.uchile.cl:2250/105574 |
| Date | January 2006 |
| Creators | Lozada González, Patricia Emita |
| Contributors | Lara Peñaloza, Hernán, Romero Osses, Carmen, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular |
| Publisher | Universidad de Chile, Programa Cybertesis |
| Source Sets | Universidad de Chile |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | Tesis |
| Rights | Lozada González, Patricia Emita |
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