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Previous issue date: 2014-03-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / No Brasil, ? grande a incid?ncia de animais pe?onhentos, dentre os quais se
destacam os escorpi?es por sua import?ncia m?dica, sendo sua pe?onha fonte de
diversas subst?ncias qu?micas com atividades biol?gicas e farmacol?gicas ainda n?o
compreendidas, incluindo diversos pept?deos bioativos. Pept?deos antimicrobianos
(PAMs) s?o componentes do sistema imune de procariotos e eucariotos utilizados como
primeira linha de defesa contra micro-organismos. No presente trabalho, foi
caracterizado o primeiro PAM do escorpi?o Tityus stigmurus, nomeado Stigmurina,
previamente identificado por meio do transcriptoma da gl?ndula de veneno desta
esp?cie. As caracter?sticas da Stigmurina foram investigadas por modelagem
computacional e constru??o de dendrograma. Al?m disso, as caracter?sticas estruturais
da Stigmurina foram investigadas por dicro?smo circular em ?gua, em 2, 2, 2-
trifluoethanol (TFE) e em dodecil sulfato de s?dio (SDS) e os modelos refinados por
simula??es de din?mica molecular. Testes in vitro foram empregados para investigar a
atividade antibacteriana, antif?ngica, hemol?tica e citot?xica do veneno bruto e da
Stigmurina. Os resultados mostraram que a sequ?ncia selecionada codifica uma prote?na
madura com 17 res?duos de amino?cidos e o dendrograma revela um caso de
converg?ncia evolutiva. Os espectros de dicro?smo demonstraram flexibilidade
conformacional, predominando estrutura estendida e ??folha, al?m de not?vel
capacidade de renatura??o. A pe?onha bruta n?o apresentou atividade relevante nos
testes antimicrobianos para as concentra??es testadas. No entanto, a Stigmurina mostrou
um amplo espectro de atividade antibacteriana, com concentra??es inibit?rias m?nimas
(CIMs) entre 31,25?g/mL a 250 ?g/mL para diferentes micro-organismos, enquanto que
os resultados para a avalia??o da atividade hemol?tica nestas concentra??es foram
baixas. Nos estudos de citotoxicidade, a pe?onha bruta foi incapaz de reduzir a
viabilidade celular em c?lulas VERO E6, por?m sua toxicidade em c?lulas SiHa foi
significativamente superior, correspondendo a uma IC50 de 3,6 ?g/mL. J? nos testes
com a Stigmurina, as concentra??es capazes de reduzir a viabilidade celular das c?lulas
VERO E6 e SiHa em 50% foram de 275,67 ?g/mL e 212,54 ?g/mL, respectivamente.Os
resultados sugerem que a Stigmurina poder ser considerada como um potencial
medicamento anti-infeccioso. / In Brazil, there is a high incidence of venomous animals. Among them,
scorpions are highlighted by their medical importance, and for being their venom a
source of several molecules with biological and pharmacological activity not yet fully
understood, including several bioactive peptides. Antimicrobial peptides (AMPs) are
components of the immune system in prokaryotes and eukaryotes, used in the first line
of defense against microorganisms. In the present study, we characterized the first PAM
previously identified through transcriptome of the venom gland of the scorpion Tityus
stigmurus, named Stigmurin. The characteristics of Stigmurin were investigated by
computational modeling and construction of dendrogram. In vitro tests investigated the
antibacterial, antifungal, haemolytic and cytotoxic effects of crude venom and
Stigmurin. In addition, the structural characteristics of Stigmurin were investigated by
circular dochroism in water, 2, 2 , 2- trifluoethanol (TFE) and sodium dodecyl sulfate
(SDS) and the models were refined by molecular dynamics simulations. The results
showed that the selected sequence encodes a mature protein of 17 amino acid residues
and the dendrogram reveals a case of convergent evolution. The crude venom showed
no antimicrobial activity, however, Stigmurin exhibited a broad spectrum of
antibacterial activity, with minimal inhibitory concentrations (MIC) ranging from 31.25
and 250 ?g/mL for different strains, while the hemolytic activity at these concentrations
was low. In cytotoxicity studies, the crude venom was unable to reduce cell viability in
VERO E6 cells; in contrast, its activity in SiHa cells was significantly higher,
corresponding to IC50 of 3.6 ?g/mL. For Stigmurin the concentration sable to decrease
cell viability of Vero E6 and SiHa cells in 50% were 275.67 ?g/mL and 212.54 ?g/mL,
respectively. The dichroism spectra revealed the conformational flexibility, with
predominating extended and ??sheet structures, as well as a remark able renaturation
ability. The results suggest that Stigmurin could be considered as a potential antiinfective
drug
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufrn.br:123456789/19955 |
| Date | 31 March 2014 |
| Creators | Melo, Edinara Targino de |
| Contributors | 96728647449, http://lattes.cnpq.br/2929963416385218, Uchoa, Adriana Ferreira, 58024867320, http://lattes.cnpq.br/6644671747055211, Salvador, Daniela Priscila Marchi, 26757993864, http://lattes.cnpq.br/2247233142415132, Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes |
| Publisher | Universidade Federal do Rio Grande do Norte, PROGRAMA DE P?S-GRADUA??O EM CI?NCIAS FARMACEUTICAS, UFRN, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFRN, instname:Universidade Federal do Rio Grande do Norte, instacron:UFRN |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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