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Previous issue date: 2008-03-19 / Fosfodiesterase (PDE) ? uma super fam?lia de enzimas respons?veis pela degrada??o dos segundos mensageiros intracelulares adenosina monofosfato c?clico (AMPc) e guanosina monofosfato c?clico (GMPc). Como reguladoras essenciais na sinaliza??o de segundos mensageiros c?clicos com diversas fun??es fisiol?gicas as PDEs s?o alvo de drogas para o tratamento de diversas doen?as. Dentre estas est?o insufici?ncia card?aca, depress?o, asma, inflama??o e disfun??o er?til. Dentre as 11 fam?lias de genes de PDE, a fosfodiesterase 5 (PDE5) ? espec?fica para GMPc, sendo respons?vel pela atividade de hidr?lise que sofre o GMPc dentro dos tecidos dos corpos cavernosos penianos dos homens. A PDE5 ? amplamente conhecida por ser alvo de diversas drogas utilizadas no tratamento da disfun??o er?til, como por exemplo, o sildenafil (Viagra?). Este trabalho tem por objetivo a s?ntese da regi?o codificante, clonagem, express?o e purifica??o do dom?nio catal?tico da PDE5 humana. A s?ntese da regi?o codificante do polipept?deo alvo foi realizada atrav?s da t?cnica de overlap, utilizando 24 oligonucleot?deos que foram unidos atrav?s da rea??o em cadeia da polimerase (PCR). A constru??o foi clonada em vetor pCRBlunt? e sequenciada para confirmar sua identidade e a aus?ncia de muta??es. O fragmento foi subclonado em vetor de express?o pET23a(+) com s?tios de restri??o NdeI e BamHI, para o N terminal e C terminal, respectivamente. C?lulas eletrocompetentes de E. coli Rosetta (DE3) foram transformadas com o plasm?deo recombinante, a regi?o que codifica para o dom?nio catal?tico da PDE5 foi expressa em sua forma sol?vel e ativa na presen?a de 0,1 mM do indutor IPTG. Quando o dom?nio catal?tico da PDE5 foi isolado, um rendimento de 2,39 mg.mL-1 foi obtido atrav?s de 3 passos de purifica??o.
O dom?nio catal?tico da PDE5 puro permitir? a realiza??o de uma triagem de extratos vegetais oriundos da biodiversidade brasileira. Com o intuito de buscar novos compostos que possam se tornar poss?veis inibidores de PDE5, e assim serem utilizados no tratamento da disfun??o er?til.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2.pucrs.br:tede/5315 |
| Date | 19 March 2008 |
| Creators | Selbach, Bruna Pelegrim |
| Contributors | Santos, Di?genes Santiago |
| Publisher | Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul, Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular, PUCRS, BR, Faculdade de Bioci?ncias |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da PUC_RS, instname:Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, instacron:PUC_RS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 8198246930096637360, 600, 600, 36528317262667714 |
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