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Previous issue date: 2013-03-04 / Introduction: Asthma is a disease with predominant presence of CD4 Th2 cells that affects children. The disease main characteristics is inflammation and airway hyperreactivity. Asthma has two main phenotypes depending on the presence of atopy. It was not yet fully described in asthmatic children of school age the presence of different profiles of Th1, Th2, Th17 and Treg cells in peripheral blood, which may be related to the pathogenesis of the disease. Aims: To analyze the phenotypic of CD4 T cells in asthmatics children in Porto Alegre/RS. Methods: This was a croos-sectional study when it was recruited children between 9 to 15 years old, asthmatics and controls. The PBMCs were isolated using Ficoll and the cells were cultured with anti-CD3/CD28antibodies, Derp1 or left unstimulated. After 24hs the cells were stained with antibodies specifics for transcription factors in order to analyze Th1, Th2, Treg and Th17 cells by flow cytometry and the supernatant was collected for cytokine analysis by CBA assay. Plasma was used to perform analysis of specific IgE. Results: It was analyzed 104 patients, 12 controls and 92 asthmatics. Atopic asthmatic patients presented higher frequency of Th2 cells compared with non-atopic and atopic controls. When we analyzed cells expressing more than one transcription factor it was observed that atopic asthmatics patients have a higher frequency of CD4+GATA3+FOXP3+, CD4+RORγT+GATA3+ and CD4+GATA3+Tbet+ compared with non-atopic patients and controls atopic. Analyzing the asthma severity it was seen a higher frequency of CD4+RORγT+GATA3+ in patients with moderate asthma compared with patients with mild asthma. Stimulating the cells from atopic asthma patients with anti-CD3 and anti-CD28 induced more Th1 profile while stimulating with DerP1 protein changed the profile of the cells mainly to Th17 and Treg cells. Conclusion: This is the first study in children that analyzes Th1, Th2, Treg and Th17 cells using the tag transcription factor by flow cytometry in asthmatic or atopic and non-atopic controls. We found a Th2 profile in atopic asthmatic children according to the literature. Interestingly non-atopic children showed no predominant profile. Children with moderate asthma have a profile that expresses both the transcription factor GATA3 and RORγT. Depending on the stimulus used it was induced different phenotypes in the cells of this group of patients with asthma. / Introdu??o: A asma ? uma doen?a com predomin?ncia da presen?a das c?lulas T CD4 do tipo Th2, que afeta das crian?as e tem como principais caracter?sticas a inflama??o e hiperreatividade das vias a?reas. A asma apresenta dois fen?tipos principais dependendo da presen?a de atopia. Ainda n?o foi totalmente descrito em crian?as asm?ticas com idade escolar a presen?a dos diferentes perfis de c?lulas Th1, Th2, Th17 e Treg no sangue perif?rico, que podem estar relacionados com a patog?nese da doen?a. Objetivo: Avaliar o perfil fenot?pico de c?lulas T CD4 em pacientes asm?ticos escolares do munic?pio de Porto Alegre/RS. M?todos: Este foi um estudo transversal realizado com o recrutamento de crian?as com 09 a 15 anos de idade, asm?ticas e controles. O sangue perif?rico foi coletado e as c?lulas mononucleares foram separadas utilizando Ficoll e colocadas em cultura com anticorpos anti-CD3/CD28. Ap?s 24hs as c?lulas foram marcadas com anticorpos espec?ficos para fatores de transcri??o para an?lise do perfil Th1, Th2, Th17 e Treg por citometria de fluxo e o sobrenadante foi recolhido para analise de citocinas por CBA. No plasma foi realizada a an?lise de IgE espec?ficas. Resultados: Foram analisados 104 pacientes, sendo 12 controles e 92 asm?ticos. Os pacientes asm?ticos at?picos apresentaram um perfil Th2 mais acentuado, comparado com os n?o-at?picos e controles at?picos. Quando analisamos as c?lulas que expressam mais de um fator de transcri??o foi observado que os pacientes asm?ticos at?picos apresentam maior frequ?ncia de c?lulas T CD4 positivas GATA3+FOXP3+, RORγT+GATA3+, GATA3+Tbet+ comparada com pacientes n?o-at?picos e controles at?picos. Analisando a severidade foi observado uma frequencia maior de c?lulas T CD4+ RORγT+ GATA3+ em pacientes com asma moderada comparado com pacientes com asma leve. O est?mulo com anti-CD3 e anti-CD28 nas c?lulas dos pacientes asm?ticos at?picos induziu mais um perfil Th1 enquanto que est?mulo com DerP1 mudou o perfil de algumas c?lulas principalmente de c?lulas Tregs e Th17. Conclus?o: Este ? o primeiro estudo em crian?as que analisa o perfil Th1, Th2, Th17 e Treg utilizando a marca??o de fatores de transcri??o por citometria de fluxo em crian?as asm?ticas at?picas ou n?o-at?picas e controles. Encontramos um perfil mais Th2 em crian?as asm?ticas at?picas de acordo com a literatura. Interessantemente as crian?as n?o-at?picas n?o apresentaram nenhum perfil predominante. As crian?as com asma moderadas apresentam um perfil que expressa ao mesmo tempo o fator de transcri??o RORgT e GATA3. Dependendo do estimulo s?o induzidas diferentes fen?tipos nas c?lulas deste grupo de pacientes com asma.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2.pucrs.br:tede/1430 |
| Date | 04 March 2013 |
| Creators | Ara?jo, Patr?cia Dias de |
| Contributors | Bonorino, Cristina |
| Publisher | Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul, Programa de P?s-Gradua??o em Medicina/Pediatria e Sa?de da Crian?a, PUCRS, BR, Faculdade de Medicina |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da PUC_RS, instname:Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, instacron:PUC_RS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 3098206005268432148, 500, 600, -8624664729441623247 |
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