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Previous issue date: 2012-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this study was to develop biomonitoring of the hydroalcoholic extract of Malva sylvestris to evaluate the phytochemical profile beyond the effect of the hydroalcoholic extract of the plant on the release of IL-1β, TNF-α, LPS-induced
nitric oxide, and finally, to assess possible toxicological effects of the extract. The activity of the various forms of extraction (soxhlet, maceration, turbolise and infusion) were tested using the ear edema model in mice, induced by 2-Otetradecanoylphorbol 13-acetate (TPA) and subsequently evaluated to determine which ethanol concentration presented the most anti-edematous activity. ESI-MS and LC-ESI-MS analyses were performed to exploit the ions that were representative of patterns of malvidin 3-glucoside, quercetin and scopoletin. Using in vitro tests, fibroblasts from the stock cell line 3T3 were grown in Dulbecco’s modified eagle
medium (DMEM). The cells were analyzed by experimental tests after four passages. Stimulation with LPS in 3T3 fibroblasts resulted in an increased production of nitric oxide released in the cell culture supernatant. A method based on the use of
fluorogenic probe (DAF-FM DA) was used to quantify the amount of nitric oxide. After sensitization with LPS, the release of IL-1 and TNF-α were measured, and subsequently separately evaluated by ELISA. To identify substances with genotoxic activity the Comet test was employed, using the technique of electrophoresis on microgel. The results demonstrated that at the highest dose tested (3.0 g/ml), the
three forms of extraction were able to reduce ear edema by 44-46% and that the extract of Malva sylvestris in 100% ethanol concentration reached a higher inhibition (50.69%). In the in vitro tests, the treatment with hydroalcoholic extract was able to prevent the formation of nitric oxide by 80 ± 14% at the highest concentration used, in comparison to the control group, and the concentration of 1.0 g/ml was able to inhibit 86 ± 2% levels of IL-1. The levels of TNF-α were reduced by 84 ± 4%. The hydroalcoholic extract obtained by maceration at 100% concentration suggests an anti-inflammatory potential when used topically in a skin inflammation model. In assessing cell culture it suggests the interference of the extract on the IL-1 and TNF-α cytokines. This creates the need for further methods to investigate the cellular and molecular mechanisms on which the plant has an anti-inflammatory effect. / O objetivo deste trabalho foi desenvolver um biomonitoramento do extrato hidroalcóolico da Malva sylvestris (EHM), avaliar o perfil fitoquímico além do efeito do extrato hidroalcóolico da planta sobre a liberação de IL-1β, TNF-α, NO induzido
por LPS e por fim, verificar possíveis efeitos toxicológicos do extrato. A atividade das várias formas extratoras (Soxhlet, Maceração, Turbólise e Infusão) foram testadas através do modelo de edema de orelha em camundongos induzido por 12-Otetradecanoilforbol 13-acetato (TPA) e posteriormente avaliado qual concentração etanólica apresentou maior atividade anti-edematogênica. As análises de ESI-MS e
LC-ESI-MS foram realizadas para explorar os íons representativos dos padrões de malvidin 3-glucosídeo, quercetina e escopoletina. Em ensaio in vitro fibroblastos
provenientes do banco de células, linhagem 3T3, foram cultivados em meio de cultura completo Dulbecco Mem (DMEM). As células foram analisadas para testes experimentais após quatro passagens. A estimulação com LPS em fibroblastos 3T3
ocasionou um aumento na produção de Oxido Nítrico liberado no sobrenadante de cultura de células, para quantificação de óxido nítrico foi utilizado o método baseado no uso de sonda fluorogênica (DAF-FM DA). Após sensibilização com LPS, a
liberação de, IL-1 e TNF- foram quantificadas, e posteriormente foram avaliadas separadamente através do método de ELISA. Para o ensaio de identificação de
substâncias com atividade genotóxica foi utilizado o Ensaio do Cometa através da técnica de eletroforese em microgel.Os resultados demonstraram que as três formas extratoras na maior dose testada (3.0 g/ml) do (EHM) foram capazes de reduzir o edema de orelha em 44- 46% e que o extrato da malva na concentração etanólica de 100% alcançou maior inibição (50,69%).Nos ensaios in vitro, o tratamento com o
extrato hidroalcóolico foi capaz de impedir a formação de Oxido Nítrico em 80 ± 14% na maior concentração utilizada em comparação ao grupo Controle, e a concentração de 1,0 g/ml foi capaz de inibir 86 ± 2% os níveis de IL-1β. Os níveis
de TNF – α foram reduzidos em 84 ± 4%. O (EHM) obtido pelo método de maceração na concentração de 100% sugere o potencial anti-inflamatório por via tópica em modelo de inflamação de pele, em avaliação em cultura de células sugere
a interferência do extrato nas citocinas IL-1β e TNF–α, o que gera necessidade de outras metodologias a fim de investigar o mecanismo celular e molecular sobre a qual a planta exerce o efeito anti-inflamatório.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2.uepg.br:prefix/1780 |
| Date | 28 February 2012 |
| Creators | Benso, Bruna |
| Contributors | Otuki, Michel Fleith, Lima, Adilson Antonio Soares de, Faveró, Giovani Marino |
| Publisher | UNIVERSIDADE ESTADUAL DE PONTA GROSSA, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, UEPG, BR, Clinica Integrada, Dentística Restauradora e Periodontia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UEPG, instname:Universidade Estadual de Ponta Grossa, instacron:UEPG |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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