Made available in DSpace on 2017-07-24T19:22:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruna Benso.pdf: 1456799 bytes, checksum: df2a517354e51e0567f4105cdc729566 (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this study was to develop biomonitoring of the hydroalcoholic extract of Malva sylvestris to evaluate the phytochemical profile beyond the effect of the hydroalcoholic extract of the plant on the release of IL-1β, TNF-α, LPS-induced nitric oxide, and finally, to assess possible toxicological effects of the extract. The activity of the various forms of extraction (soxhlet, maceration, turbolise and infusion) were tested using the ear edema model in mice, induced by 2-Otetradecanoylphorbol 13-acetate (TPA) and subsequently evaluated to determine which ethanol concentration presented the most anti-edematous activity. ESI-MS and LC-ESI-MS analyses were performed to exploit the ions that were representative of patterns of malvidin 3-glucoside, quercetin and scopoletin. Using in vitro tests, fibroblasts from the stock cell line 3T3 were grown in Dulbecco’s modified eagle medium (DMEM). The cells were analyzed by experimental tests after four passages. Stimulation with LPS in 3T3 fibroblasts resulted in an increased production of nitric oxide released in the cell culture supernatant. A method based on the use of fluorogenic probe (DAF-FM DA) was used to quantify the amount of nitric oxide. After sensitization with LPS, the release of IL-1 and TNF-α were measured, and subsequently separately evaluated by ELISA. To identify substances with genotoxic activity the Comet test was employed, using the technique of electrophoresis on microgel. The results demonstrated that at the highest dose tested (3.0 g/ml), the three forms of extraction were able to reduce ear edema by 44-46% and that the extract of Malva sylvestris in 100% ethanol concentration reached a higher inhibition (50.69%). In the in vitro tests, the treatment with hydroalcoholic extract was able to prevent the formation of nitric oxide by 80 ± 14% at the highest concentration used, in comparison to the control group, and the concentration of 1.0 g/ml was able to inhibit 86 ± 2% levels of IL-1. The levels of TNF-α were reduced by 84 ± 4%. The hydroalcoholic extract obtained by maceration at 100% concentration suggests an anti-inflammatory potential when used topically in a skin inflammation model. In assessing cell culture it suggests the interference of the extract on the IL-1 and TNF-α cytokines. This creates the need for further methods to investigate the cellular and molecular mechanisms on which the plant has an anti-inflammatory effect. / O objetivo deste trabalho foi desenvolver um biomonitoramento do extrato hidroalcóolico da Malva sylvestris (EHM), avaliar o perfil fitoquímico além do efeito do extrato hidroalcóolico da planta sobre a liberação de IL-1β, TNF-α, NO induzido por LPS e por fim, verificar possíveis efeitos toxicológicos do extrato. A atividade das várias formas extratoras (Soxhlet, Maceração, Turbólise e Infusão) foram testadas através do modelo de edema de orelha em camundongos induzido por 12-Otetradecanoilforbol 13-acetato (TPA) e posteriormente avaliado qual concentração etanólica apresentou maior atividade anti-edematogênica. As análises de ESI-MS e LC-ESI-MS foram realizadas para explorar os íons representativos dos padrões de malvidin 3-glucosídeo, quercetina e escopoletina. Em ensaio in vitro fibroblastos provenientes do banco de células, linhagem 3T3, foram cultivados em meio de cultura completo Dulbecco Mem (DMEM). As células foram analisadas para testes experimentais após quatro passagens. A estimulação com LPS em fibroblastos 3T3 ocasionou um aumento na produção de Oxido Nítrico liberado no sobrenadante de cultura de células, para quantificação de óxido nítrico foi utilizado o método baseado no uso de sonda fluorogênica (DAF-FM DA). Após sensibilização com LPS, a liberação de, IL-1 e TNF- foram quantificadas, e posteriormente foram avaliadas separadamente através do método de ELISA. Para o ensaio de identificação de substâncias com atividade genotóxica foi utilizado o Ensaio do Cometa através da técnica de eletroforese em microgel.Os resultados demonstraram que as três formas extratoras na maior dose testada (3.0 g/ml) do (EHM) foram capazes de reduzir o edema de orelha em 44- 46% e que o extrato da malva na concentração etanólica de 100% alcançou maior inibição (50,69%).Nos ensaios in vitro, o tratamento com o extrato hidroalcóolico foi capaz de impedir a formação de Oxido Nítrico em 80 ± 14% na maior concentração utilizada em comparação ao grupo Controle, e a concentração de 1,0 g/ml foi capaz de inibir 86 ± 2% os níveis de IL-1β. Os níveis de TNF – α foram reduzidos em 84 ± 4%. O (EHM) obtido pelo método de maceração na concentração de 100% sugere o potencial anti-inflamatório por via tópica em modelo de inflamação de pele, em avaliação em cultura de células sugere a interferência do extrato nas citocinas IL-1β e TNF–α, o que gera necessidade de outras metodologias a fim de investigar o mecanismo celular e molecular sobre a qual a planta exerce o efeito anti-inflamatório.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:22:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Cristina Kovalik.pdf: 3088957 bytes, checksum: b54849fe2a689381329efe2cd77859ee (MD5) Previous issue date: 2012-02-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Phytotherapy includes several herbal preparations and herbal final products which contain active substances or a combination of them with no synthetic compounds and/or isolated constituents. Some studies have indicated Malva, Malvaceae plant family has showed antimicrobial and anti-inflammatory potential. The aim of this present study was to assess the wound healing effect of Malva sylvestris L. on a palate mucosa wound. A hundred thirty-six rats (Rattus novergicus albinus – Wistar), two month-old, weighing 270 to 300 g were used. After intraperitoneal anesthesia, a 4 mm-diameter excisional wound was made (central area of palatal mucosa), using a punch-out biopsy tool. Mucoperiosteal tissue was removed by sharp dissection exposing a circular area of uncovered bone. Eight animals were sacrificed immediately (baseline). The remaining rats were divided into 4 groups: Group 1- Sham, Group 2- Orabase Vehicle (gelatin, pectin and carboxymethylcellulose in equal parts), Group 3- 2% Chlorhexidine, Group 4- Orabase 20% Malva. The agents were applied twice a day (50 mg). Experimental periods were 3, 7, 15 and 21 days. The wound area was photographically measured (mm2) considering the distance between the epithelium margins. The data were analyzed by ANOVA and Tukey post-hoc test with a 5% significance level. The results showed a similar healing pattern among the groups, with no significant differences (p>0.05). According to the methodology it was concluded that Malva sylvestris L. extract had no effect on wound healing in palatal mucosa of rats. / A fitoterapia é uma terapêutica caracterizada pela utilização de plantas medicinais em suas diferentes formas farmacêuticas sem substâncias ativas isoladas. Estudos indicam que a Malva, planta da família das malváceas apresenta potencial antimicrobiano e antiinflamatório. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a ação cicatrizante da Malva sylvestris em feridas na mucosa palatina. Foram utilizados 136 ratos Wistar, 60 dias de idade, peso entre 270 e 300 g. Os animais foram divididos em 4 grupos: Grupo 1- Controle; Grupo 2- Veículo orabase (gelatina, pectina e carboximetilcelulose em partes iguais; Grupo 3- Clorexidina 2% em gel natrosol; Grupo 4- Malva 20% em orabase. Após anestesia uma ferida na mucosa palatina foi confeccionada com um bisturi circular com extremidade ativa de 4 mm de diâmetro. Após a incisão circular o tecido mucoso foi removido com um descolador de periósteo, deixando exposto o tecido ósseo. As substâncias foram aplicadas 2x/dia (50mg). O reparo das feridas foi analisada através da avaliação de fotos digitais padronizadas do palato, sendo realizadas medidas em mm2 da área da ferida. Também foram realizados cortes histológicos para análise histomorfométrica da porcentagem de epitelização das margens epiteliais em relação à extensão palatina. Os períodos de avaliação foram de 0, 3, 7, 15 e 21 dias. Os dados foram analisados através de ANOVA e pós teste de Tukey com o nível de significância 5%. Os resultados mostraram um padrão similar de reparo da mucosa entre todos os grupos, sendo as diferenças não significativas (p> 0,05). De acordo com a metodologia empregada foi possível concluir que o extrato de Malva sylvestris L. não apresentou efeito na modulação do reparo de feridas na mucosa palatina de ratos.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:22:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eliana Cristina Fosquiera.pdf: 7050579 bytes, checksum: 45d6e1d81644de66f2115a0e12480883 (MD5) Previous issue date: 2010-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / In this study, a phytochemical screening and the in vitro antimicrobial and antioxidant properties of crude hydroalcoholic extract of Malva sylvestris L. (EHBM) was performed for a M. sylvestris gel formulation. Antiplaque and antigingivitis were also carried out using a partial-mouth, experimental gingivitis model in humans. Thirty subjects were chosen to participate in this crossover double-blind study, three 15-days experimental periods with a 10-days interval between each treatment. Patients were submitted to 3 treatments: Treatment 1 – placebo gel, Treatment 2 – 10% M.sylvestris gel; Treatment 3 – 2% chlorhexidine gel (positive control). The clinical parameters plaque index, modified marginal bleeding index and gingival fluid measurement were evaluated. The teeth: 15, 16, 35 and 36 were analyzed. EHBM showed the presence of mucilage (primary metabolite), steroids and/or triterpenes, coumarins, anthraquinones, flavonoids and tannins (secondary metabolites). The antioxidant activity mean was 5.75% and 26.30% compared to 100% of the total antioxidant activity attributed to ascorbic acid, respectively for EHBM and 10% M.sylvestris gel. No concentration of EHBM revealed antimicrobial effect in both agar disk and agar well diffusion tests. In the clinical study, there was no statistical difference for clinical parameters and gingival fluid measurement considering the different treatments. The primary and secondary metabolites of M. sylvestris suggest its anti-inflammatory effect. The EHBM has a reduced antioxidant activity. No influence on supragingival plaque is observed between 10% M. sylvestris gel and placebo. For gingival inflammation, no influence is verified for 10% M. sylvestris gel compared to placebo and chlorhexidine. / Os objetivos dessa pesquisa foram realizar a prospecção fitoquímica do extrato hidroalcoólico bruto (EHBM) de Malva sylvestris L., determinar in vitro a atividade antimicrobiana e propriedade antioxidante e in vivo a ação antiplaca e antigengivite do EHBM utilizando um modelo de gengivite experimental parcial em humanos. Trinta indivíduos foram selecionados para participar deste estudo cruzado duplocego, no qual foram estabelecidos três períodos experimentais de 15 dias cada um com um intervalo de 10 dias entre cada tratamento. Os pacientes foram submetidos a 3 tratamentos: Tratamento 1- Gel placebo, Tratamento 2- Gel de M. sylvestris a 10%; Tratamento 3- Gel de clorexidina a 2% (controle positivo). Os parâmetros clínicos avaliados foram o índice de placa, índice de sangramento marginal modificado e o volume de fluido gengival. Os dentes analisados foram: 15, 16, 35 e 36. Os resultados demonstraram a presença de mucilagens (metabólito primário), esteróides e/ou triterpenos, cumarinas, antraquinonas, flavonoides e taninos (metabólitos secundários) no EHBM. A média da atividade antioxidante relativa do EBHM foi igual a 5,75% e do gel de M. sylvestris 10% foi 26,30%, em relação a 100% do total de atividade antioxidante atribuída ao ácido ascórbico. Não foi observada a formação de halo de inibição tanto para o método da difusão em disco quanto para a técnica da perfuração no ágar na avaliação da atividade antimicrobiana in vitro. No estudo clínico não se observou diferenças estatísticas entre os diferentes tratamentos para os parâmetros clínicos avaliados e a quantidade de fluido gengival. O metabólito primário e os metabólitos secundários presentes na planta sugerem o seu efeito anti-inflamatório. O EHBM apresentou ausência de atividade antimicrobiana e uma reduzida atividade antioxidante. O gel contendo o extrato hidroalcoólico de M. sylvestris 10% não influenciou a formação de biofilme dental supragengival em comparação com o placebo e não influenciou a inflamação gengival em comparação com o placebo e clorexidina.