L'encéphalopathie hépatique (HE) est un syndrome neuropsychiatrique complexe, une
complication majeure de la maladie du foie. L'œdème cytotoxique est une complication grave
de l'encéphalopathie hépatique, connu comme étant le résultat d'un gonflement des astrocytes.
Les facteurs pathogéniques dérivés du sang tels que l'ammoniaque (NH4+) et le stress oxydatif
(SO) sont connus pour être synergiquement impliqués. Les cellules endothéliales (CE) de la
barrière hémato-encéphalique (BHE), régulant le passage vers le cerveau, sont les premières
cellules à entrer en contact avec les molécules circulantes. L'effet de l'ammoniaque et du SO sur
le transport et le métabolisme des CE n'a jamais été complètement exploré. Par conséquent,
notre objectif était d'évaluer les effets de NH4+ et des espèces réactives de l'oxygène (ROS) sur
les CE de la BHE en utilisant des systèmes de modèles in vivo et in vitro. Il a été démontré que
le cotransporteur Na-K-2Cl (NKCC1) était impliqué dans la pathogenèse de l'œdème cérébral
dans de nombreuses affections neurologiques. Le NKCC1 peut transporter NH4+ vers le cerveau
et est régulé par les ROS. Par conséquent, l'expression de NKCC1 a été évaluée dans des CE
primaires soumises à différentes concentrations de ROS et de NH4+ ainsi que dans des
microvaisseaux cérébraux (MVC) isolés chez le rat BDL (bile-duct ligated), un modèle d'EH
induit par une maladie hépatique chronique. Aucune régulation à la hausse de NKCC n'était
présente chez les CE traitées ou les MVC. La glutamine synthétase (GS) est une enzyme qui
joue un rôle compensatoire important dans la détoxification du NH4+ au cours de la maladie du
foie. La GS est exprimée dans le muscle et le cerveau (astrocytes), mais n'a jamais été totalement
explorée dans les CE de la BHE. L'expression et l'activité de la protéine GS ont été trouvées
dans les CE de la BHE in vitro (CE primaires) et in vivo (MVC isolés de rats naïfs). Dans le
modèle BDL, l'expression de GS dans les MVC n'était pas significativement différente des
témoins (SHAM). Par ailleurs, nous avons traité des CE avec du milieu conditionné à partir de
plasma de rats BDL et avons trouvé une diminution de l’expression de la protéine GS et de
l'activité par rapport aux SHAM. De plus, les CE traitées avec NH4+ augmentaient en activité
de GS tandis que les traitements avec SO avec et sans NH4+ diminuent l'activité de GS.
Globalement, ces résultats démontrent pour la première fois que la GS est présente dans les CE,
à la fois in vivo et in vitro. La GS est régulée à la baisse dans les CE traitées avec du plasma de
BDL (mais pas dans les MVC de BDL). Il est intéressant de noter que le NH4+ stimule l'activité
de GS dans les CE, alors que le SO inhibe l'activité de GS, ce qui justifie possiblement les
résultats de nos études avec les milieux conditionnés. Nous supposons que le SO empêche la
régulation à la hausse de GS de la BHE, en diminuant la capacité des CE à détoxifier
l'ammoniaque et à limiter l'entrée d'ammoniaque dans le cerveau. Nous envisageons qu'une
régulation à la hausse de GS dans les CE de la BHE pourrait devenir une nouvelle cible
thérapeutique de l'EH. / Hepatic encephalopathy (HE) is a complex neuropsychiatric syndrome, which is a major
complication of liver disease. Cytotoxic edema is a serious complication of HE, known to be
the result of astrocyte swelling. Blood derived pathogenic factors such as ammonia (NH4+) and
oxidative stress’ (OS) are known to be synergistically implicated. Endothelial cells (EC) of the
blood brain barrier (BBB) are the first cells regulating passage into the brain and to contact
blood-derived molecules. The effect of ammonia and oxidative stress on EC transport and
metabolism has never been thoroughly explored. Therefore, our aim was to evaluate the effects
of NH4+ and reactive oxygen species (ROS) on EC of the BBB using in vivo and in vitro models
systems. The Na–K–2Cl cotransporter (NKCC1) has been demonstrated to be involved in the
pathogenesis of brain edema in numerous neurological conditions. NKCC1 can transport NH4+
into the brain and is regulated by ROS. Therefore, the expression of NKCC1 was evaluated in
primary EC submitted to different concentrations of ROS and NH4+ as well as in cerebral
microvessels (CMV) isolated from the bile-duct ligated (BDL) rat, a model HE induced by
chronic liver disease. No upregulation of NKCC1 was present in either the treated EC or CMV.
Glutamine synthetase (GS) is an enzyme with an important compensatory role in NH4+
detoxification during liver disease. GS is expressed in muscle and brain (astrocytes) but has
never been thoroughly explored in ECs of the BBB. GS protein expression and activity was
found in EC of the BBB in vitro (primary EC) and in vivo (CMV isolated from naive rats). In
the BDL model, GS expression in CMVs was not significantly different from SHAM-operated
controls. In addition, we treated ECs with conditioned medium from plasma of BDL rats and
found a decrease in GS protein and activity when compared to SHAM. Furthermore, EC treated
with NH4+ increased GS activity while treatments with ROS with and without NH4+ decreased
GS activity. Overall these results demonstrate for the first time that GS is present in EC both in
vivo and in vitro. GS is downregulated in EC treated with BDL plasma (but not in BDL CMV).
Interestingly, NH4+ stimulates GS activity in ECs, while ROS inhibits GS activity, possibly
justifying the results found from the conditioned medium studies. We speculate that ROS
prevents the upregulation of GS in the BBB, decreasing the capacity of the EC to detoxify
ammonia and to limit ammonia entry into the brain. We foresee that upregulating GS in ECs of
the BBB could become a new therapeutic target for HE.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:umontreal.ca/oai:papyrus.bib.umontreal.ca:1866/19438 |
| Date | 12 1900 |
| Creators | Macedo de Oliveira, Mariana |
| Contributors | Rose, Christopher |
| Source Sets | Université de Montréal |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | Thèse ou Mémoire numérique / Electronic Thesis or Dissertation |
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