Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan that belongs to the
Apicomplexa phylum and causes toxoplasmosis which is especially severe in
immunocompromised individuals and who acquired the infection by congenital
transmission. Dense granules are organelles involved in this parasite invasion and
replication of the parasite inside the cell. Among the proteins secreted by dense
granules, jointly called GRAs, the GRA 2 is particularly immunogenic. In the
present work, we aim to study the role of this protein in inducing adaptive immune
response by produced and characterized a monoclonal antibody against GRA2.
The parasite treated with this antibody showed the lowest rate of replication in
intracellular proliferation assay compared to treatment with irrelevant antibody.
The epitopes of this protein that binds to the monoclonal antibody have been
mapped by phage display. Through bioinformatics analysis, epitopes for B cells
and T GRA2 were predicted and based on that and on the results of phage display
amino acid sequences were chosen to synthesize two peptides that were tested
as potential vaccine. Immunization tests were carried out in C57BL/6 mice with
synthetic peptides and these animals were subsequently infected with T. gondii.
There was a significant reduction in mortality in the group immunized with the
mixture of both peptides. The negative control group, immunized only with BSA,
showed the highest mortality and analysis of cytokine present in the sera of these
animals there was a predominance of proinflammatory cytokines while antiinflammatory
cytokines were shown to be almost nonexistent in the serum of these
animals. Given these results, it was found that the group with higher survival
showed better Th1/Th2 balance. This demonstrates that immunization with
epitopes recognized by both B cells and T cells appear to be more effective. Thus,
peptide mimetics GRA2 regions of the protein may be likely candidates for the
development of vaccines against toxoplasmosis. / Toxoplasma gondii é um protozoário do filo Apicomplexa intracelular obrigatório
causador da toxoplasmose, que é especialmente grave em indivíduos
imunocomprometidos e em indivíduos que adquiriram a infecção por transmissão
congênita. Grânulos densos são organelas deste parasito envolvidas no processo
de invasão e replicação do parasito no interior da célula. Dentre as proteínas
secretadas pelos grânulos densos, chamadas conjuntamente de GRAs, a GRA 2
é particularmente imunogênica. No presente trabalho, no sentido de estudar a
participação dessa proteína na indução da resposta imune adaptativa, foi
produzido e caracterizado um anticorpo monoclonal contra GRA2. O parasito
tratado com esse anticorpo apresentou menor taxa de replicação em ensaio de
proliferação intracelular comparado ao tratamento com anticorpo irrelevante. Os
epítopos de ligação da proteína GRA2 ao anticorpo monoclonal foram mapeados
por phage display. Por meio de análises de bioinformática, epítopos para células
B e T da GRA2 foram preditos e com base nisso e nos resultados do phage
display foram escolhidas seqüências de aminoácidos para sintetizar dois
peptídeos que foram testados quanto ao potencial vacinal. Foram feitos ensaios
de imunização em camundongos C57BL/6 com estes peptídeos sintéticos e os
animais foram posteriormente infectados com T. gondii. Foi observada redução
significativa na mortalidade no grupo imunizado com a mistura de ambos os
peptídeos. O grupo controle negativo, imunizado somente com BSA, apresentou a
maior mortalidade e nas análises de produção de citocinas presentes nos soros
destes animais observou-se uma predominância de citocinas pró-inflamatórias
enquanto as citocinas anti-inflamatórias mostraram-se quase inexistentes no soro
destes animais. Tendo em vista esses resultados, percebeu-se que o grupo com
maior sobrevivência apresentou melhor balanço Th1/Th2. Isso demonstra que a
imunização com epítopos reconhecidos tanto por células B quanto por células T
parece ser mais efetiva. Assim, peptídeos miméticos de regiões da proteína
GRA2 podem ser prováveis candidatos no desenvolvimento de vacinas anti
Toxoplasmose. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/urn:repox.ist.utl.pt:RI_UFU:oai:repositorio.ufu.br:123456789/16609 |
| Date | 14 June 2013 |
| Creators | Bastos, Luciana Machado |
| Contributors | Mineo, Jose Roberto |
| Publisher | Universidade Federal de Uberlândia, Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas, UFU, BR, Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFU, instname:Universidade Federal de Uberlândia, instacron:UFU |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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