Memoria para optar al Título Profesional de Químico Farmacéutico / La hipertensión arterial es uno de los factores de riesgo cardiovascular más
importante en todo el mundo industrializado. En las últimas décadas, la vía de
señalización RhoA/ROCK ha mostrado tener un rol clave en la hipertensión arterial al
ser responsable de la sensibilización del calcio en células musculares lisas y estimular
diversos procesos celulares, entre los que se incluye al crecimiento, diferenciación,
proliferación y migración celular entre otros.
En este trabajo se planteó como hipótesis que “La vía RhoA/ROCK está
sobreactivada en ratas hipertensas, generando una mayor fosforilación de las proteínas
Smad2/3 en tejido de aorta, ventrículo izquierdo y riñón, resultado que se ve revertido
por la administración de candesartán y/o fasudil”.
Los objetivos de este estudio fueron: a) Investigar los efectos antihipertensivos
de fasudil y/o candesartan el modelo de hipertensión arterial experimental por
sobrecarga de volumen independiente de renina y b) estudiar si fasudil y/o candesartan
modifican las formas totales y fosforiladas de Smad2/3 en aorta, ventrículo izquierdo y
riñón de ratas hipertensas y controles.
Para responder a estos objetivos, ratas Sprague Dawley se uninefrectomizaron y
trataron con DOCA (100 mg/kg/semana) más dieta hipersódica (NaCl 1%; KCl 0,4%)
por 6 semanas para generar hipertensión arterial por sobrecarga de volumen. Fasudil (50
mg/kg/día) y candesartán (10 mg/kg/día) se administraron por gavage desde la tercera
semana de hipertensión. Al término del tratamiento, se determinó presión sistólica y
peso corporal. Los animales se sacrificaron, extrayéndose la aorta toraco-abdominal,
corazón y riñón. Estos tejidos se pesaron y se almacenaron a -80°C hasta su
procesamiento. La fracción soluble de extractos tisulares se utilizaron para separar las
proteínas por electroforesis en geles de poliacrilamina-SDS y detectar las formas
fosforiladas y totales de Smad2/3 por Western blot.
Los resultados mostraron que las ratas experimentaron un aumento del 42% en la
presión arterial sistólica debido a la administración de DOCA-sal: 164 vs 118 mmHg. El peso disminuyó significativamente en las ratas Doca-sal mientras que las masas cardiaca
y pulmonar relativa aumentaron significativamente (p<0,01). Fasudil y candesartán
redujeron la presión arterial significativamente (fasudil: 111 mmHg, candesartán: 125
mmHg). Sin embargo, no se observó sinergia al asociar fasudil con candesartán. Solo
candesartán pero no fasudil atenuaron el efecto de la hipertensión arterial sobre el peso
corporal y las masas cardiaca y pulmonar relativas. Por otro lado, los niveles de las
formas fosforiladas de Smad2/3 no cambiaron por acción de la administración
DOCA/sal ni tampoco por efectos de fasudil o candesartán ni ambos lograron disminuir
la fosforilación de Smad2/3 en aorta, ventrículo izquierdo y riñón. Los niveles de
relativos de las formas totales de Smad2/3 tampoco se modificaron en estos grupos y
tejidos, excepto en riñón (p<0,05).
Se concluye de este trabajo de tesis que fasudil y candesartán redujeron el
aumento de la presión arterial inducida por la administración de DOCA/sal, pero su
asociación no logró un efecto sinérgico. Candesartán pero no fasudil atenuó la
hipertrofia cardiaca inducida por la sobrecarga de presión. Los factores transcripcionales
Smad2/3 no se activan en este modelo de hipertensión experimental ni tampoco por
acción de fasudil o candesartán en los tejidos blancos estudiados / The arterial hypertension is one the most important cardiovascular risk factor in
the industrialized world. In the last decades, the RhoA/ROCK signaling pathway has a
key role in the arterial hypertension. This pathway is responsible for calcium
sensitization in smooth muscle cells but it also regulate cell growth, differentiation,
proliferation and migration in these cells.
We hypothesized here that “The RhoA/ROCK pathway is upregulated in
hypertensive rats, promoting and activation of Smad2/3 transcription factor in aorta, left
ventricle and kidney, effect that is prevented by fasudil and/or candesartan”.
The specific aims were: a) To investigate the effect of fasudil and/or candesartan
on systolic blood pressure and cardiac hypertrophy in an experimental renin-independent
hypertension model. b) To study if fasudil and/or candesartan modify total and
phosphorylated Smad2/3 levels in aorta, left ventricle and kidney in hypertensive and
control rats. To this end, Sprague Dawley rats were uninephrectomized and treated with
DOCA (100 mg/kg/week) and NaCl 1%; KCl 0.4% for 6 weeks to develop hypertension
induced by volume overload. Fasudil (50 mg/kg/day) and candesartan (10 mg/kg/day)
were administrated by gavage since third week of hypertension. At end of treatment,
systolic pressure and body weight were measured. The animals were sacrified, and
toraco-abdominal aorta, heart and kidney were obtained, weighted and stored at -80°C
until processing. Protein from soluble tissue fraction were resolved polyacrylamide-SDS
electrophoresis and total and phosphorylated Smad2/3 levels were determined by
Western blot.
The results showed that the DOCA-salt administration induced a 42% increase in
systolic blood pressure and a significantly decreased in body weight. Relative cardiac
and pulmonary mass were significantly increased (p<0,01) in DOCA-salt treated rats. Fasudil and candesartan decreased systolic blood pressure significantly. However any
synergistic effect was observed by fasudil-candesartan coadministration. Only
candesartan but not fasudil prevented the increase in systolic blood pressure induced by
DOCA/salt and in the relative cardiac and pulmonary mass. Both total and
phosphorylated Smad2/3 levels did not change by the DOCA-salt administration or by
fasudil or candesartan in the studied tissues Total Smad2/3 protein levels did not change
by effect of hypertension, fasusil or candesartan , except in kidney (p<0,05).
In summary, fasudil and candesartan prevented hypertension induced by DOCAsalt
administration butany synergistic effect was observed between both drugs.
Candesartan but not fasudil attenuated cardiac hypertrophy induced by volume overloadhypertension.
The Smad2/3 transcriptional factors were not activated in the studied
tissues using this experimental hypertension model and neither fasudil or candesartan
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UCHILE/oai:repositorio.uchile.cl:2250/105353 |
| Date | January 2010 |
| Creators | López Dubó, Rafael Andrés |
| Contributors | Lavandero González, Sergio, García Nannig, Lorena del Pilar, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular |
| Publisher | Universidad de Chile, CyberDocs |
| Source Sets | Universidad de Chile |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | Tesis |
| Rights | López Dubó, Rafael Andrés |
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