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Previous issue date: 2016-02-29 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul - FAPERGS / Tuberculosis is the infectious disease that causes more deaths worldwide, along with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). Great efforts have been exerted in recent years to the search for new anti-tuberculosis drugs without success. Drug development platforms fail at different stages of the research and development process and one aspect that contributes to this is the lack of knowledge of the potential molecular drug targets. Both the elucidation of the bioactive compounds mechanism of action and the identification of their cellular targets are important for the development of new drugs. As an experimental alternative to the identification of molecular targets is pulse proteolysis technique, which determines the fraction of proteins differentially degraded after a brief incubation with proteases when comparing samples treated and untreated with a ligand. In this work, we developed the PePTID method: a new method for identification of molecular targets using pulse proteolysis and mass spectrometry analysis. The application of PePTID resulted in a reproducible procedure that minimizes the required amount of sample and provides a more robust analysis method compared to other approaches that use pulse proteolysis. / A tuberculose ?, junto com a S?ndrome da Imunodefici?ncia Adquirida (SIDA), a doen?a infecciosa que mais causa mortes no mundo. Grandes esfor?os foram exercidos nos ?ltimos anos para a busca de novos f?rmacos antituberculose, por?m sem muito sucesso. As plataformas de desenvolvimento de f?rmacos falham em diferentes etapas do processo de pesquisa e desenvolvimento e um dos aspectos que contribui para isso ? a falta de conhecimento dos alvos moleculares de potenciais f?rmacos. Tanto a elucida??o do mecanismo de a??o de compostos bioativos quanto a identifica??o de seus alvos celulares s?o importantes para o desenvolvimento de novos f?rmacos. Como alternativa experimental para a identifica??o de alvos moleculares est? a t?cnica de prote?lise pulsada, a qual determina a fra??o de prote?nas diferencialmente degradadas ap?s breve incuba??o com proteases quando comparadas as amostras tratadas e n?o tratadas com um ligante. Nesse trabalho, desenvolvemos o m?todo PePTID: um novo m?todo para identifica??o de alvos moleculares usando a prote?lise pulsada e an?lise por espectrometria de massa. A aplica??o do m?todo PePTID resultou em um procedimento reprodut?vel que minimiza a quantidade necess?ria de amostra e que apresenta uma metodologia de an?lise mais robusta em rela??o a outras abordagens que utilizam a prote?lise pulsada.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2.pucrs.br:tede/6673 |
| Date | 29 February 2016 |
| Creators | Trindade, Rog?rio Valim da |
| Contributors | Bizarro, Cristiano Valim, Pinto, Ant?nio Frederico Michel |
| Publisher | Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul, Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular, PUCRS, Brasil, Faculdade de Bioci?ncias |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da PUC_RS, instname:Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, instacron:PUC_RS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 8198246930096637360, 600, 600, 600, 600, 36528317262667714, -1634559385931244697, -3614735573891122254 |
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