Orientador : Prof. Dr. Roberto Pontarolo / Co-orientador : Prof. Dr. João Cleverson Gasparetto / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 29/08/2014 / Inclui referências / Área de concentração : Insumos, medicamentos e correlatos / Resumo: O objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar um metodo HILIC-EM/EM para quantificar em plasma humano metformina e vildagliptina. A pre-purificacao dos analitos foi realizada atraves da tecnica de precipitacao de proteinas com acetonitrila acidificada (0,1% acido formico). A fonte de ionizacao por electrospray operou no modo positivo de ionizacao e a separacao cromatografica foi realizada em uma coluna Atlantis HILIC Silica 150 x 2,1 mm, 3 ƒÊm de tamanho de particula. O volume de injecao foi de 5 ƒÊL e a temperatura de forno mantida a 40 ‹C. A fase movel isocratica consistiu de (A) 20% de agua e (B) 80% de solucao acetonitrila:agua (95:5 v/v), ambos contendo 0,1% de acido formico e 3 mM de formiato de amonio. O fluxo foi mantido em 400 ƒÊL/min. Os resultados de validacao mostraram que o novo metodo e seletivo, sensivel (limite de deteccao<1,5 ng/mL) e livre de efeitos residual e de matriz. O novo metodo tambem foi preciso (CV<9,0%), exato (ER<11,2%) e linear (r . 0,99) dentro dos limites de 5 a 500 ng/mL de cada composto. Nos diferentes niveis de concentracao das curvas de calibracao, as variacoes de precisao e exatidao foram < 9,6%. A recuperacao dos analitos e padroes internos (>75%) foi obtida com elevada precisao (CV< 4,0%). O metodo desenvolvido foi aplicado com sucesso em amostras reais de voluntarios que receberam separadamente uma dose de metformina (850 mg), uma dose de vildagliptina (50 mg) ou uma dose de um medicamento contendo a combinacao metformina e vildagliptina (850 mg + 50 mg). O novo metodo pode ser utilizado como uma ferramenta analitica para o monitoramento clinico da metformina e vildagliptina no plasma. A partir desse monitoramento, e possivel verificar a adesao ao tratamento e propor ajuste de dose de modo a garantir a efetividade e a seguranca clinica do tratamento.
Palavras chave: metformina, vildagliptina, CLAE-EM/EM, plasma, HILIC, diabetes. / Abstract: The objective of this work was to develop and validate a HILIC-MS/MS method for the simultaneous determination of metformin and vildagliptin in human plasma. Sample cleanup was achieved using protein precipitation with acetonitrile containing 0.1% formic acid. The electrospray source was operated in the positive ion mode. Chromatographic separation was achieved using an Atlantis HILIC Silica 150 x 2.1-mm, 3-ƒÊm particle size column maintained at 40 oC. The isocratic mobile phase consisted of 20% water and 80% acetonitrile/water solution 95:5 v/v, containing both 0.1% formic acid and 3 mM ammonium formate. The flow rate was maintained at 400 ƒÊL/min. The volume of injection was 5.0 ƒÊL. Data from validation studies demonstrated that the new method is highly selective, sensitive (limits of detection < 1.5 ng/mL) and free of matrix and residual effects. The new method was also precise (RSD<9.0%), accurate (RE<11.2%) and linear (r . 0.99) over the ranges of 5 to 500 ng/mL for each compound. The individual values for accuracy and precision at each concentration level were lower than 9.6%. For all compounds, satisfactory recovery (>75%) was achieved with high reproducibility (RSD<4.0%). The developed method was successfully applied to determine metformin and vildagliptin in plasma volunteers who orally received a single dose of metformin (850 mg), vildagliptin (50 mg) or drug association (metformin 850 mg + vildagliptin 50 mg). The new method can thus be used as a tool for the clinical monitoring of metformin and vildagliptin.
Keywords: metformin, vildagliptin, LC-MS/MS, human plasma, HILIC.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:dspace.c3sl.ufpr.br:1884/37165 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Gimenez, Ana Carolina |
| Contributors | Pontarolo, Roberto, 1954-, Gasparetto, Joao Cleverson, Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 79f. : il., grafs., tabs., application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPR, instname:Universidade Federal do Paraná, instacron:UFPR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | Disponível em formato digital |
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