Resumo: Os resíduos de fármacos em matrizes aquosas se tornaram foco de elevado interesse científico. A principal fonte de preocupação relacionada com a presença destes compostos em compartimentos ambientais reside no fato destas substâncias apresentarem potencial para causar efeitos tóxicos nos organismos mesmo em concentrações muito baixas, da ordem de ?g L-1 e ng L-1. Neste trabalho avaliou-se a presença de diclofenaco e ibuprofeno em diferentes matrizes aquosas, com ênfase em amostras de esgoto de Estações de Tratamento (ETEs) da cidade de Curitiba- PR, no período de julho a novembro de 2012. Estes anti-inflamatórios foram escolhidos por serem fármacos de elevado consumo, por antecedentes da literatura indicarem efeitos tóxicos na biota e pelo desconhecimento do perfil de remoção e ocorrência nos esgotos, em rios e na água para consumo humano fornecida pelo sistema de abastecimento da cidade. O método utilizado para limpeza (clean up) das amostras foi a extração em fase sólida (EFS), e a separação dos compostos foi realizada por cromatografia em fase líquida de alta eficiência (CLAE), assistida por detector por arranjo de diodos (DAD). A validação do método analítico foi realizada a partir de parâmetros determinados pela ANVISA, INMETRO, IUPAC, EURACHEM e por trabalhos que abordam a validação de métodos analíticos. A determinação dos fármacos nas amostras de esgotos e no rio a jusante da ETE se mostrou extremamente complexa, principalmente em razão de um forte efeito de matriz associado à presença de espécies que não são eliminadas na etapa de limpeza e que absorvem fortemente na região ultravioleta. Embora nestas condições a determinação de ibuprofeno não tenha sido possível, o diclofenaco foi detectado em todas as amostras de esgoto analisadas (bruto e tratado), o que confirma a baixa eficiência de remoção dos sistemas convencionais de tratamento, aeróbios e anaeróbios. Adicionalmente, nenhum dos dois fármacos foi detectado em amostras de água para consumo humano fornecida pelo sistema de abastecimento de água e na água de rio a montante da ETE.

Resumo: O objetivo com este trabalho foi realizar um estudo farmacocinético da cumarina (CUM), 7-hidroxicumarina (7-HC), ácido o-cumárico (AOC) e ácido caurenóico (CAU) em voluntários sadios. Para quantificação em plasma dessas substâncias, dois métodos por CLAE-EM/EM foram desenvolvidos e validados. A pré-purificação dos analitos foi realizada por meio de extração líquido-líquido com tert-butil metil éter e através da técnica de precipitação de proteínas com acetonitrila. A cumarina, a 7-hidroxicumarina e o padrão interno (PI) 6-metilcumarina foram monitorados no modo positivo de ionização enquanto que os ácidos o-cumárico, caurenóico, isoferúlico (PI) e a prednisona (PI) no modo negativo de ionização. A separação cromatográfica foi realizada em uma coluna XBridge Shield RP18 150 x 2,1 mm (tamanho de partícula 5 ?m). Para o modo positivo de ionização a fase móvel foi composta de uma mistura de acetonitrila/água/ácido fórmico (65:35:0.05, v/v/v) eluída em modo isocrático. Para o modo negativo de ionização a fase móvel foi composta de um gradiente entre água e acetonitrila/água (95:5, v/v), ambos contendo 1 mM de formiato de amônio. Os resultados de validação mostraram que os novos métodos são seletivos e livres de efeito residual e de matriz. Os baixos limites de detecção (1,5 ng/mL para CAU, 3,0 ng/mL para CUM e 2,5 ng/mL para 7-HC e AOC) e de quantificação (5,0 ng/mL para CAU, 7,5 ng/mL para 7-HC e 10,0 ng/mL para AOC e CUM) indicaram que os novos métodos são muito sensíveis. As curvas de calibração apresentaram uma excelente correlação (r ? 0,99) nas faixas de 10,0 - 1500 ng/mL para CUM, 7,5 - 1000 ng/mL para 7-HC, 10,0 - 1000 ng/mL para AOC e 5,0 - 750 ng/mL para AOC. Nos diferentes níveis de concentração as variações de precisão e exatidão foram < 10,2%. A recuperação dos analitos e PI (> 70%) foi obtida com elevada precisão (CV < 5,0%). Sob as condições normais de trabalho, uma excelente estabilidade dos analitos foi observada tanto em plasma quanto em solução. Os métodos foram aplicados na análise da CUM, 7-HC, AOC e CAU no plasma de voluntários que receberam via oral o xarope de guaco, ou xarope de guaco fortificado com CUM. O estudo conduzido com 60 mL de xarope de guaco, em dose única, monstrou que a quantidade destas substâncias presentes no xarope não proporciona níveis plasmáticos suficientes para serem detectados pelos métodos bioanalíticos validados. A administração de 60 mL de xarope fortificado com 1500 mg de cumarina resultou em níveis plasmáticos de CUM, 7-HC e AOC suficientes para a determinação de seus parâmetros farmacocinéticos. Neste estudo foi possível verificar que a eliminação de AOC é dependente da sua taxa de formação e que AOC é um dos principais metabolitos biodisponíveis da CUM. Esses resultados reforçam a necessidade da condução de novos estudos para avaliar o potencial tóxico e terapêutico do AOC. O estudo também demonstrou que os níveis plasmáticos de 7-HC são extremamente baixos e o seu perfil farmacocinético sugere significativo metabolismo sequencial hepático com baixo acesso à circulação sistêmica. Esse estudo ainda reuniu evidências de que a administração do xarope de guaco na dose recomendada não proporciona níveis plasmáticos suficientes de CUM, 7-HC e AOC para o efeito broncodilatador esperado. Esse resultado sugere que estudos clínicos devem ser realizados para validar a eficácia deste fitoterápico. Só assim será possível garantir os benefícios do guaco, ou quem sabe impedir que recursos públicos sejam alocados para compra de medicamentos que não trazem nenhum benefício à população.

Orientador : Prof. Dr. Itamar Francisco Andreazza / Co-orientador : Prof. Dr. Mayumi Sato / Co-orientador : Prof. Dr. Fábio Seigi Murakami / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação e m Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 26/02/2015 / Inclui bibliografia / Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatos / Resumo: O melasma é caracterizado pelo aumento de melanina, cujo tratamento se faz com a utilização de agentes despigmentantes como o ácido kójico. As farmácias magistrais preparam formulações contendo este ativo a partir de bases pré-elaboradas disponíveis no mercado que possuem uma composição de excipientes bastante diversas, proporcionando preparações tópicas com constituição e consistência diferenciadas. As características físico-químicas da formulação interferem na liberação do ativo, etapa primordial para o fármaco atingir seu local de ação. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo preparar quatro diferentes formulações a partir de bases magistrais comerciais, avaliando suas características reológicas, espalhabilidade e a liberação in vitro de ácido kójico. As formulações foram preparadas com veículos comerciais de grande utilização como a base Lanette N®, base não-iônica e uma base comercial composta por fosfolipídios. As formulações apresentaram comportamento de espalhabilidade semelhantes, sendo maior quanto maior o peso adicionado. Na reologia evidenciou-se a característica pseudoplástica em todas as formulações com G' (módulo de armazenamento) superior a G" (módulo de perda). A validação da metodologia foi realizada em ultravioleta-visível em 269nm, em solução tampão fosfato pH 7,4, levando-se em consideração os aspectos do teste de liberação in vitro, obtendo-se linearidade, precisão, exatidão e robustez para o método. Diferentes comportamentos de liberação do fármaco foram obtidos, sendo que a F4, composta por base com fosfolipídios, apresentou a maior liberação, seguido da F3, F2 (base não iônica) e F1(base Lanette N®) com a menor taxa de liberação do ácido kójico. Observou-se uma relação entre a taxa de liberação e a viscosidade, sendo que quanto menor a viscosidade maior a taxa de liberação do fármaco. As membranas de polietersulfona e acetato de celulose não apresentaram diferença estatística significativa (pvalue > 0,05) de liberação do ácido kójico, sugerindo-se a intercambialidade das mesmas para o estudo do fármaco. Palavras-chave: ácido kójico, espalhabilidade, liberação in vitro, reologia. / Abstract: The melasma is characterized by the increase in melanina and its treatment is by topical with depigmentation agents like kojic acid. The dosage form containing this isolated pharmaco are generally prepared in pharmacies from prebuilt bases available in the market with a very diverse composition, providing differentiated and varied topical preparations. The physicochemical characteristics of the formulation influences on the release of the drug, primordial stage for it to reach the site of action. In this context, the present work aimed to assess the in vitro release of kojic acid. The formulations were prepared with commercial vehicles, base Lanette N®, non-ionic base and a commercial base consists of phospholipids. The formulations showed similar behavior spreadability, being greater with the weight added. In the rheology characteristic is evidenced the pseudoplastic behavior in all formulations with G' (elastic modulus) greater than G " (viscous modulus). The validation of the method was performed in an ultraviolet-visible at 269nm, in phosphate buffer pH 7.4, resulting in linearity, precision, accuracy and robustness to the method. Different drug release behavior was obtained, and F4, base consisted of phospholipids, showed the greatest release, followed by the F3, F2 (non-ionic base) and F1 (Lanette N®) with a lower rate release of kojic acid. The membranes of polyethersulfone and cellulose acetate showed no statistically significant difference (p-value> 0.05) release of kojic acid, suggesting the interchangeability. Key words: kojic acid, spreadability, in vitro release test, rheology.

Orientador : Prof. Dr. Roberto Pontarolo / Co-orientador : Prof. Dr. João Cleverson Gasparetto / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 29/08/2014 / Inclui referências / Área de concentração : Insumos, medicamentos e correlatos / Resumo: O objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar um metodo HILIC-EM/EM para quantificar em plasma humano metformina e vildagliptina. A pre-purificacao dos analitos foi realizada atraves da tecnica de precipitacao de proteinas com acetonitrila acidificada (0,1% acido formico). A fonte de ionizacao por electrospray operou no modo positivo de ionizacao e a separacao cromatografica foi realizada em uma coluna Atlantis HILIC Silica 150 x 2,1 mm, 3 ƒÊm de tamanho de particula. O volume de injecao foi de 5 ƒÊL e a temperatura de forno mantida a 40 ‹C. A fase movel isocratica consistiu de (A) 20% de agua e (B) 80% de solucao acetonitrila:agua (95:5 v/v), ambos contendo 0,1% de acido formico e 3 mM de formiato de amonio. O fluxo foi mantido em 400 ƒÊL/min. Os resultados de validacao mostraram que o novo metodo e seletivo, sensivel (limite de deteccao<1,5 ng/mL) e livre de efeitos residual e de matriz. O novo metodo tambem foi preciso (CV<9,0%), exato (ER<11,2%) e linear (r . 0,99) dentro dos limites de 5 a 500 ng/mL de cada composto. Nos diferentes niveis de concentracao das curvas de calibracao, as variacoes de precisao e exatidao foram < 9,6%. A recuperacao dos analitos e padroes internos (>75%) foi obtida com elevada precisao (CV< 4,0%). O metodo desenvolvido foi aplicado com sucesso em amostras reais de voluntarios que receberam separadamente uma dose de metformina (850 mg), uma dose de vildagliptina (50 mg) ou uma dose de um medicamento contendo a combinacao metformina e vildagliptina (850 mg + 50 mg). O novo metodo pode ser utilizado como uma ferramenta analitica para o monitoramento clinico da metformina e vildagliptina no plasma. A partir desse monitoramento, e possivel verificar a adesao ao tratamento e propor ajuste de dose de modo a garantir a efetividade e a seguranca clinica do tratamento. Palavras chave: metformina, vildagliptina, CLAE-EM/EM, plasma, HILIC, diabetes. / Abstract: The objective of this work was to develop and validate a HILIC-MS/MS method for the simultaneous determination of metformin and vildagliptin in human plasma. Sample cleanup was achieved using protein precipitation with acetonitrile containing 0.1% formic acid. The electrospray source was operated in the positive ion mode. Chromatographic separation was achieved using an Atlantis HILIC Silica 150 x 2.1-mm, 3-ƒÊm particle size column maintained at 40 oC. The isocratic mobile phase consisted of 20% water and 80% acetonitrile/water solution 95:5 v/v, containing both 0.1% formic acid and 3 mM ammonium formate. The flow rate was maintained at 400 ƒÊL/min. The volume of injection was 5.0 ƒÊL. Data from validation studies demonstrated that the new method is highly selective, sensitive (limits of detection < 1.5 ng/mL) and free of matrix and residual effects. The new method was also precise (RSD<9.0%), accurate (RE<11.2%) and linear (r . 0.99) over the ranges of 5 to 500 ng/mL for each compound. The individual values for accuracy and precision at each concentration level were lower than 9.6%. For all compounds, satisfactory recovery (>75%) was achieved with high reproducibility (RSD<4.0%). The developed method was successfully applied to determine metformin and vildagliptin in plasma volunteers who orally received a single dose of metformin (850 mg), vildagliptin (50 mg) or drug association (metformin 850 mg + vildagliptin 50 mg). The new method can thus be used as a tool for the clinical monitoring of metformin and vildagliptin. Keywords: metformin, vildagliptin, LC-MS/MS, human plasma, HILIC.

Resumo: O mel de abelhas sem ferrão é um alimento com características físicas e químicas particulares e de sabor exótico, alcançando um maior valor de mercado em comparação aos méis de Apis mellifera Linnaeus, 1758. Entretanto, apesar do grande número de espécies de meliponíneos existentes, poucas investigações têm sido conduzidas para a avaliação do potencial terapêutico de seus méis. Assim, com o propósito de ampliar o conhecimento sobre méis obtidos a partir de diferentes meliponíneos nativos do Brasil, este trabalho teve por objetivo investigar a qualidade física e química e a origem botânica, bem como estudar o efeito antibacteriano, antifúngico, antioxidante e anti-inflamatório desses produtos, provenientes do estado do Paraná. As características físicas e químicas observadas para os méis de meliponíneos não atenderam, na totalidade, as exigências estabelecidas pela legislação vigente para o mel de A. mellifera. As famílias mais representativas nos espectros polínicos das amostras avaliadas foram Anacardiaceae, Arecaceae, Euphorbiaceae, Fabaceae, Melastomataceae/Crombetaceae, Myrtaceae, Rubiaceae, Salicaceae e Solanaceae. Considerando a origem botânica dos méis, por meio da melissopalinologia, apenas duas amostras foram classificadas como mel monofloral. Foi encontrada uma correlação positiva entre os teores de fenólicos totais e a atividade antioxidante dos extratos fenólicos obtidos a partir dos méis (EFMs). Todas as amostras de mel in natura apresentaram atividade antimicrobiana contra cepas de Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Candida albicans. Os EFMs indicaram reduzido efeito antimicrobiano, em relação aos méis de meliponíneos. Foram identificados 11 compostos fenólicos no extrato metanólico do mel produzido pela abelha sem ferrão Melipona marginata Lepeletier, 1836. Esse extrato, quando aplicado topicamente, demonstrou um efeito anti-inflamatório, confirmado pela redução do edema, da migração leucocitária e da produção de espécies reativas de oxigênio na pele de camundongos.

Resumo: A especie medicinal Zanthoxylum rhoifolium Lam. e uma Rutaceae, nativa do Brasil, conhecida popularmente como mamica-de-porca. O suco das folhas e usado, quando aplicado topicamente, contra dores de ouvido. Seu caule e utilizado na medicina popular no tratamento de dispepsias, colicas e flatulencia. O objetivo deste trabalho foi realizar estudos morfoanatomico, fitoquimico e de atividades biologicas de folha e caule dessa especie medicinal. Com referencia a morfoanatomia, observou-se que a folha e composta, alternada e algumas vezes aculeada na face abaxial. A epiderme e uniestratificada, os estomatos sao actinociticos restritos a face abaxial, os tricomas sao tectores em sua maioria do tipo unicelular, o mesofilo e dorsiventral, a nervura central apresenta formato concavo-convexo e um feixe vascular colateral e observado nas folhas. No caule, o felogenio tem instalacao superficial e ha fibras. Cristais de oxalato de calcio do tipo drusa e compostos fenolicos foram observados. Quanto a prospeccao fitoquimica, nas fracoes acetato de etila, cloroformio e hexano foram encontrados flavonoides, alcaloides e esteroides e/ou triterpenoides, enquanto que antocianidinas, saponinas e polifenois foram detectados no extrato aquoso, tanto de folha como de caule, e taninos apenas em folha. Duas substancias foram identificadas, os flavonoides hesperidina e vitexina. Com relacao a atividade antioxidante, tanto no metodo da formacao do complexo fosfomolibdenio como no TBARS a fracao que apresentou o melhor resultado foi a fracao hexano de folha. No estudo da atividade antimicrobiana, verificou-se que o extrato etanolico bruto e as fracoes de folha apresentaram atividade inibitoria frente a Pseudomonas aeruginosa e a fracao hidroalcoolica de caule apresentou inibicao do crescimento da levedura Candida albicans. No teste de toxicidade a Artemia salina, foi observado que os extratos e as fracoes de folha e caule nao sao toxicos ao microcrustaceo. Foi constatado que apenas as fracoes hidroalcoolicas de folha e caule apresentaram resultados positivos para hemolise, o que possivelmente indica a presenca de saponinas hemoliticas na especie em estudo. Os resultados obtidos contribuem para o conhecimento dessa especie medicinal.

Orientadora : Profª. Drª. Angela Cristina L. B. Trindade / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 26/02/2015 / Inclui referências : fls. 93-98 / Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatos / Resumo: O Maleato de Enalapril (ME), um inibidor da enzima conversora da angiotensina, e a Hidroclorotiazida (HCTZ), um diurético tiazídico, são comumente usados em associação para redução da pressão arterial, no tratamento e controle da hipertensão arterial sistêmica. A associação de fármacos é importante para a adesão ao tratamento, porém constitui-se em um desafio para o controle de qualidade. Por esse motivo, esse trabalho de dissertação teve por objetivo desenvolver e validar métodos para a quantificação de ME e HCTZ por meio de duas técnicas distintas: CLAE-UV e espectrofotometria no ultravioleta (UV) aliada a calibração multivariada usando PLS. A primeira é sensível e seletiva, ideal para quantificação simultânea dos fármacos e suas impurezas. A segunda é uma técnica rápida e de baixo custo, possível de ser implantada em pequenas indústrias (controle de produção) e farmácias de manipulação. Para o desenvolvimento do método por CLAE-UV utilizou-se o planejamento fatorial para fase de otimização. A cromatografia foi realizada em coluna C8 (250 x 4,6 mm; 5 ?m) à temperatura de 48°C. A fase móvel consistiu em acetonitrila:solução de ácido fosfórico pH 2,5 (50:50) e fluxo de 1,8 mL.min-1 em modo de eluição isocrático. Na validação o método se mostrou seletivo, preciso (DPR<5%), linear (r>0,99) e exato. O método foi aplicado com sucesso na determinação de teor de ME e HCTZ em amostras comerciais. As análises por espectrofotometria no UV aliada a calibração multivariada foram realizadas na região de 200 a 400 nm com uma resolução de 1 nm. Os dados foram tratados no software PLS-Toolbox 6.5 que opera em ambiente Matlab. O melhor modelo foi obtido utilizando todo o espectro (200 a 400 nm), com pré-processamento de primeira derivada e espectros centrados na média, com duas variáveis latentes. O conjunto de calibração constituiu de 29 amostras e o de validação de 10 amostras, sendo que não foi observada nenhuma amostra anômala. Os valores de RMSEC e RMSEP para ME foram de 0,086 e 0,081 ?g.mL-1 e para HCTZ de 0,090 e 0,074 ?g.mL-1. Na validação o método mostrou-se linear, preciso, com inverso da sensibilidade analítica na ordem de 10-3 ?g.mL-1. O modelo apresentou boa capacidade preditiva da concentração dos fármacos nas amostras comerciais de comprimidos, sendo que as amostras analisadas não apresentaram diferença estatisticamente significativa às analisadas por CLAE-UV (p>0,05). Por fim os métodos desenvolvidos podem ser considerados rápidos e eficientes para o controle de qualidade de ME e HCTZ em forma farmacêutica sólida. Palavras-Chave: CLAE, Espectroscopia UV, Calibração multivariada, Maleato de Enalapril, Hidroclorotiazida. / Abstract: The Enalapril Maleate (ME), an inhibitor of angiotensin converting enzyme, and the Hydrochlorothiazide (HCTZ), a thiazide diuretic, are commonly used in combination to reduce blood pressure, treatment and control of hypertension. The drug combination is important for treatment adherence, but constitutes a challenge for the quality control. Therefore, this dissertation aimed to develop and validate methods for the quantification of ME and HCTZ through two different techniques: HPLC-UV and ultraviolet spectrophotometry (UV) allied to multivariate calibration using PLS. The first is sensible and selective, ideal for simultaneous quantification of drugs and their impurities. The second is a rapid and low cost technique, that can be implemented in small industries (production control) and compounding pharmacies. The method by HPLC-UV was developed using experimental design for optimization phase. Chromatography was performed on C8 column (250 x 4.6 mm; 5 ?m) at a temperature of 48°C. The mobile phase consisted of acetonitrile: phosphoric acid solution pH 2.5 (50:50) at flow rate 1.8 mL min-1 in isocratic elution mode. In the validation, method was selective, precise (RSD <5%), linear (r> 0.99) and accurate. The method was successfully applied to the determination of ME and HCTZ content in commercial samples. The analyzes by UV spectrophotometry combined with multivariate calibration was performed in the region of 200 to 400 nm with a resolution of 1 nm. Data were processed in the PLS-Toolbox 6.5 software operating in Matlab. The best model was obtained using the entire spectrum (200 to 400 nm) with first derivative pre-processing plus mean centered spectra, with two latent variables. The calibration set consisted of 29 samples and 10 samples for validation, and observed no abnormal sample. The RMSEP and RMSEC values were 0.086 and 0.081 ?g.mL-1 for ME and 0.090 and 0.074 ?g.mL-1 for HCTZ. The method was linear, precise, with inverse of analytical sensitivity on the order of 10-3 ?g.mL-1. The model showed good predictive ability of the concentration of the drugs in commercial samples of tablets, and the samples analyzed showed no statistically significant difference to the analyzed by HPLC-UV (p> 0.05). Finally the methods developed can be considered fast and efficient for quality control of ME and HCTZ in solid dosage form. Key words: HPLC, UV Spectroscopy, Multivariate calibration, Enalapril maleate, Hydrochlorothiazide.

Orientador : Prof. Dr. Roberto Pontarolo / Co-orientador: Prof. Dr. João Cleverson Gasparetto / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 25/02/2014 / Inclui referências / Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatos / Resumo: No presente trabalho foi desenvolvido e validado um método para quantificação simultânea de levodopa, carbidopa, entacapona, tolcapona, 3-O-metildopa e dopamina em plasma, através de cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial (CLAE-EM/EM). A fonte de ionização por electrospray (ESI) operada no modo positivo de ionização foi o mecanismo mais eficiente para ionizar os compostos de interesse. Na cromatografia, foi utilizada uma coluna XBridge C8 (150 x 4,6 mm com tamanho de partícula de 5 ?m) mantida a 30 ºC. A fase móvel foi composta de um gradiente entre água e acetonitrila:metanol (90:10, v/v) ambos contendo 0,1% de ácido fórmico. A extração dos analitos foi realizada por meio da precipitação de proteínas com acetonitrila contendo 0,1% de ácido fórmico. Dados da validação demonstraram que o método é seletivo e não sofre efeito residual e de matriz. O método foi considerado sensível por apresentar baixos limites de detecção (5 ng/mL para levodopa; 7 ng/mL para a carbidopa; 1 ng/mL para entacapona; 1,5 ng/mL para tolcapona; 2,5 ng/mL para 3-O-metildopa; 1,25 ng/mL para dopamina) e baixos limites de quantificação (20 ng/mL para levodopa; 30 ng/mL para a carbidopa; 5 ng/mL para dopamina e 10 ng/mL para entacapona, tolcapona e 3-O-metildopa). As curvas de calibração apresentaram um coeficiente de correlação linear ? 0,9948 ao longo do intervalo de 20-1000 ng/mL para levodopa, 30-600 ng/mL para carbidopa, 10-750 ng/mL para entacapona, 10-500 ng/mL para tolcapona, 10-1000 ng/mL para 3-O-metildopa e 5-500 ng/mL para dopamina. Nos diferentes níveis de concentração das amostras controle, o método apresentou precisão (CV%: ?11,31%) e exatidão (ER%: ?11,88%). O estudo de estabilidade mostrou que, nas condições normais de trabalho do laboratório, a levodopa, carbidopa, 3-O-metildopa, dopamina e metildopa são facilmente degradadas tanto em plasma quanto em solução. A recuperação dos analitos utilizando precipitação de proteínas foi maior que 59,15% com variações de reprodutibilidade menores que 8%. O método validado foi aplicado no plasma de pacientes com doença de Parkinson que estavam em tratamento com o medicamento Stalevo® (100 mg de levodopa, 25 mg de carbidopa e 200 mg de entacapona) e quantificou com sucesso os fármacos levodopa, carbidopa e entacapona e os metabólitos da levodopa (3-O-metildopa e dopamina). Portanto, o método pode ser utilizado como uma ferramenta bioanalítica para acompanhar o tratamento de pacientes com a doença de Parkinson e promover a segurança e eficácia clínica da dose medicamentosa administrada. / Abstract: An HPLC-MS/MS method for simultaneous quantification of levodopa, carbidopa, entacapone, tolcapone, 3-O-methyldopa and dopamine in human plasma was developed and validated in this study. The electrospray ionization source was operated in positive ion mode. The chromatographic separation was achieved using a XBridge C8 column (150 x 4.6 mm; 5 ?m particle size). The mobile phase consisted of a gradient of water and acetonitrile:methanol (90:10, v/v), both containing 0.1% formic acid. The extraction of the analytes was performed by protein precipitation with acetonitrile (0.1% formic acid).The validation procedures showed that the new method is selective and free of residual and matrix effects. The high sensitivity of the developed method was demonstrated by the low limits of detection (signal-to-noise ? 3) estimated at 5.0 ng/mL for levodopa; 7.0 ng/mL for carbidopa; 1.0 ng/mL for entacapone; 1.5 ng/mL for tolcapone; 2.5 ng/mL for 3-O-methyldopa and 1.25 ng/mL for dopamine. The limits of quantification with appropriate precision was estimated at 20.0 ng/mL for levodopa; 30.0 ng/mL for carbidopa; 5.0 ng/mL for dopamine and 10.0 ng/mL for entacapone, tolcapone and 3-O-methyldopa. The calibration curves showed linear correlation coefficient superior to 0.9948 over the range of 20-1000 ng/mL for levodopa, 30-600 ng/mL for carbidopa, 10-750 ng/mL for entacapone, 10-500 ng/mL for tolcapone, 10-1000 ng/mL for 3-O-methyldopa and 5-500 ng/mL for dopamine. Variations from the precision and accuracy were within suitable range (<15%). The stability assay demonstrated that under normal working conditions levodopa, carbidopa, 3-O-methyldopa, dopamine and methyldopa (internal standard) are easily degraded in solution and in plasma. The recovery of the analytes and internal standard (> 59.0%) was achieved after protein precipitation with desirable reproducibility (RSD < 8%). The validated method was applied to evaluate plasmatic levels of levodopa, carbidopa, entacapone, 3-O-methyldopa and dopamine in patients with Parkinson's disease using Stalevo® (100.0 mg of levodopa, 25.0 mg of carbidopa and 200.0 mg of entacapone) and all analytes were successfully determined. Therefore, the method can be used as a bianalytical tool for monitoring treatment of patients with Parkinson's disease and promote the clinical efficacy and safety of the administered drug dose.

Orientadora : Profª. Drª. Fabiane G. de Moraes Rego / Co-orientadora : Profª. Drª. Dayane Alberton;Prof. Dr. Geraldo Picheth / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 26/02/2014 / Inclui referências / Área de concentração: Análises clínicas / Resumo: Diabetes mellitus tipo 2 (DM2) é um distúrbio metabólico cada vez mais comum e grave. É caracterizado por defeitos tanto na secreção como na ação da insulina. Fatores ambientais e genéticos contribuem para a doença, mas na vasta maioria dos casos a etiologia ainda não é compreendida. Têm sido apontadas algumas variantes em genes específicos que predisporiam a doença, entre eles FTO, TCF7L2, ABCC8, SLC2A2 e ADRA2A. Polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) nestes genes foram associados com características de síndrome metabólica em várias populações. O presente estudo do tipo caso-controle realizado em uma população brasileira, avaliou a associação dos polimorfismos rs9939609 e rs8050136 no gene FTO; rs7903146 e rs12255372 no gene TCF7L2, rs3758947 no gene ABCC8, rs5393 no gene SLC2A2 e rs10885122 no gene ADRA2A com DM2. Estes SNPs foram genotipados em 120 pacientes com DM2 e 121 indivíduos saudáveis (grupo controle) utilizando a plataforma ® TaqMan para a genotipagem. Não foi observada a diferença de frequência genotípica e alélica para os polimorfismos nos cinco genes testados. As frequências dos alelos raros (95%IC) em indivíduos com DM2 e grupo controle respectivamente para os polimorfismos do gene FTO rs9939609 alelo A 37% (31-43%), 36% (30-42%), rs8050136 alelo A 37% (31-43%), 37% (31-43%), TCF7L2 rs7903146 alelo T 34% (28-40)%, 31% (25-37%), rs12255372 alelo T 33% (27-39%), 28% (23-34%), ABCC8 rs3758947 alelo T 20% (15-26), 22% (16-27%), SLC2A2 rs5393 alelo C 21% (16-26%), 20% (15-25%) e ADRA2A rs10885122 alelo T 20% (15-26%), 19% (14-24%) sendo semelhantes às descritas para outras populações caucasoides, e maiores quando comparados a populações orientais. Polimorfismos nos genes FTO, TCF7L2, ABCC8, SLC2A2 e ADRA2A não parecem estar associados com DM2 na população brasileira. / Abstract: Type 2 diabetes is an increasingly common, serious metabolic disorder. It is characterised by defects in both insulin secretion and action. Both genetic and environmental factors contribute to the disease but in the vast majority of cases the aetiology is still not understood. Some variants have been identified in specific genes that predispose to disease, including FTO, TCF7L2, ABCC8, SLC2A2 e ADRA2A. The single nucleotide polymorphisms (SNPs) in these genes have been associated with features of the metabolic syndrome across various populations. The present case-control study undertaken in the Brazilian population, evaluates the association of polymorphisms rs9939609 and rs8050136 in FTO gene; rs7903146 and rs12255372 in TCF7L2 gene, rs3758947 in ABCC8 gene, rs5393 in SLC2A2 gene and rs10885122 in ADRA2A with T2D. These SNPs were genotyped in 120 T2D cases and 121 non-diabetic healthy controls using the TaqMan® Assay. No difference in the distribution of genotype and allele frequencies was observed for all polymorphisms in the five genes tested. The frequencies of the rare allele (95% CI) in subjects with T2DM and control group respectively for gene polymorphisms FTO rs9939609 allele A 37% (31-43%), 36% (30-42%), rs8050136 allele A 37% (31-43%), 37% (31-43%), TCF7L2 rs7903146 allele T 34% (28-40)%, 31% (25-37%), rs12255372 allele T 33% (27-39%), 28% (23-34%), ABCC8 rs3758947 allele T 20% (15-26), 22% (16-27%), SLC2A2 rs5393 allele C 21% (16-26%), 20% (15-25%), e ADRA2A rs10885122 allele T 20% (15-26%), 19% (14-24%) being similar to those described for other Caucasoids populations, and larger when compared to eastern populations. Polymorphisms in FTO, TCF7L2, ABCC8, SLC2A2 and ADRA2A do not seem to be associated with T2D in the brazilian population.

Resumo: Introdução: No Brasil há mais de três milhões de pessoas acometidas com a psoríase, assim mesmo, ainda é pouco conhecida pela população e pelos serviços de saúde. A seleção do tratamento deve basear-se principalmente nas evidências de sua eficácia e segurança. Além disso, observa-se a importância cada vez maior da análise econômica dos cuidados em saúde, sendo necessário comparar os custos do tratamento aos resultados em saúde obtidos, a fim de subsidiar as decisões em saúde e elaboração de políticas públicas. Objetivo: Objetivo desse trabalho foi realizar uma avaliação dos custos da doença e do perfil dos pacientes com psoríase moderada a grave sob tratamento no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná, sob a perspectiva do Sistema Único de Saúde. Metodologia: A partir de um estudo de caráter exploratório retrospectivo, com abordagem quantitativa, foi utilizado como fonte de dados os prontuários de pacientes com psoríase moderada a grave, atendidos no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná, maiores de 18 anos, em tratamento sistêmico para psoríase, com duração mínima de seguimento de, no mínimo 12 meses. Foram coletados dados relacionados a perfil do paciente, como sexo, idade; perfil da doença, como valores de PASI, tempo total de diagnóstico e perfil do tratamento. Após coleta, foram valorados os componentes e avaliado custos de acordo com amostragem total e subgrupos, e posterior análise de custo indireto seguindo a abordagem de Capital Humano. Além disso, foram realizadas análises estatísticas descritivas e testes de associação. Resultados: Foram coletados dados de 89 pacientes, sendo 69% do sexo masculino, com média de idade de 50,6 anos (DP=14,9). O tempo médio de doença foi de 16,8 anos (DP=14,6). Do total de pacientes, 65% foram diagnosticados com psoríase vulgar, alem disso 19% desses pacientes foram diagnosticados com artrite psoriática. As comorbidades mais frequentes foram Hipertensão Arterial Sistêmica (27%), Dislipidemia (19%) e Diabetes Mellitus (18%), sendo que 47% dos pacientes não tinha nenhum tipo de comorbidade. O metotrexato foi o medicamento mais usado, sendo que 47 pacientes utilizaram esse medicamento em algum momento do período avaliado. Quarenta e quatro pacientes utilizaram também Ácido Fólico. Os imunobiológicos aparecem durante o tratamento em 19 pacientes. Os custos obedecem a uma distribuição não normal com desvio à esquerda, com mediana de R$ 2.353,11/paciente/ano. Observou-se que o custo total do tratamento para pacientes que utilizaram imunobiológicos foi significativamente maior que para os pacientes que não utilizaram imunobiológicos (p<0,001). Houve associação negativa entre idade e custo total, e positiva entre custo total e tempo de diagnóstico. Não houve associação entre custo e PASI inicial. Análise de correlação mostrou custo maior para o sexo masculino (p=0,016). Os pacientes tratados com imunobiológicos, além de um custo mediano 22 vezes maior com aquisição dos medicamentos, apresentaram custos anuais indiretos 55% maiores e custos diretos não medicamentosos 22,7% maiores do que o grupo de pacientes não tratados com imunobiológicos.