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Previous issue date: 2012-05-03 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A melhoria da qualidade da alimentação pode desempenhar efeitos fisiológicos
benéficos e reduzir o risco a certas doenças. O leite contribui para a ingestão
recomendada de nutrientes e promove a saúde através de seus componentes
biologicamente ativos que a ele agregam inúmeras funcionalidades além da
nutrição. A busca por novos antibióticos de amplo espectro de ação tem aumentado
nas últimas décadas devido ao número crescente de bactérias resistentes aos
antibióticos convencionais. Neste sentido, as proteínas do leite bovino, após
fragmentação, podem ser promissoras fontes de peptídeos antimicrobianos (PAMs),
que ficam inativos quando internalizados em uma sequência protéica maior e podem
ser liberados a partir de enzimas digestivas durante o trânsito gastrointestinal. Neste
trabalho, sequências protéicas provenientes do leite foram obtidas em banco de
dados e sumariamente clivadas in silico por enzimas gastrointestinais (pepsina,
tripsina e quimotripsina). Esta clivagem virtual disponibilizou inúmeros peptídeos que
foram analisados e selecionados com relação a inúmeras características inerentes à
AMPs, tais como tamanho, carga, composição, hidrofobicidade, momento
hidrofóbico e estruturação. Cinco peptídeos (lactof01, lactof02, A_lacto01, serumA01
e serumA02) foram selecionados e tiveram sua estrutura tridimensional construída
teoricamente por meio de modelagem molecular por homologia sendo estas
validadas através de servidores web. Estes peptídeos foram sintetizados
manualmente e testados in vitro contra microrganismos Gram-positivos
(Staphylococcus aureus) e Gram-negativos (Escherichia coli e Klebsiella
pneumoniae). Os peptídeos exibiram baixa atividade antimicrobiana. Entretanto foi
verificado que lactof02 foi o mais ativo contra Gram-negativas e A_lact01 foi o mais
ativo contra Gram-positivas. Os ensaios hemolíticos indicaram que os peptídeos
apresentaram atividade hemolítica variável. Através da análise dos testes in vitro foi
possível verificar que a hidrofobicidade global e intrínseca dos peptídeos pode ter
sido determinante na modulação da atividade antimicrobiana e hemolítica. / The nutrition quality improvement may play beneficial physiological effects and also
reduce the risk of certain diseases. Milk contributes to the recommended nutrients
intake and could promote health through its biologically active components, adding
many features to nutrition. Otherwise, the search for a new broad-spectrum antibiotic
action has increased in last decades due to to the increased number of bacteria
resistant to conventional antibiotics. In this view, bovine milk proteins are promising
antimicrobial peptides (AMPs) sources, which are inactive when are located inside of
a large protein sequence and could be released by digestive enzymes during
gastrointestinal transit. Here, those peptide sequences were obtained from free
databases and summarily cleaved by gastrointestinal enzymes (pepsin, trypsin and
chymotrypsin). This virtual cleavage provided a wide number of peptides that were
analyzed and selected according to the inherent AMPs properties, such as size,
charge, composition, hydrophobicity, hydrophobic moment and structuring. Five
peptides (lactof01, lactof02, A_lacto01, serumA01 e serumA02) were selected, being
their three-dimensional struture construted by homology modeling and validated
through web servers. These peptides were synthesized and in vitro tested against
Gram-positives (Staphylococcus aureus) and Gram-negatives (Escherichia coli e
Klebsiella pneumoniae) microorganims. The peptides exhibited low antimicrobial
activity. Nevertheless it was found that lactof02 was the most active against Gramnegatives
and A_lact01 was the most active against Gram-positives. The hemolytic
assays indicated that the peptides showed variable hemolytic activity. Through in
vitro analisys of tests it was possible to verify that global and intrinsic peptides
hydrophobicity seems to be crucial for modulation of antimicrobial and hemolytic
activities.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:hermes.cpd.ufjf.br:ufjf/1723 |
| Date | 03 May 2012 |
| Creators | Salles, Sara Salomão |
| Contributors | Franco, Octávio Luiz, Dias, Simoni Campos, Santos, Marcelo de Oliveira |
| Publisher | Universidade Federal de Juiz de Fora, Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologia, UFJF, Brasil, ICB – Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFJF, instname:Universidade Federal de Juiz de Fora, instacron:UFJF |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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