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Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As células-tronco são dotadas de capacidade de auto-renovação e diferenciação, que têm os
tecidos adultos como uma de suas fontes. Essas células podem ser expandidas em cultura e
dar origem a múltiplas linhagens. Dentre as células-tronco adultas, as mesenquimais ocupam
posição de destaque, uma vez que são células multipotentes com capacidade de originar
osteoblastos, adipócitos, condrócitos, neurônios e hepatócitos. Células-tronco mesenquimais
derivadas de cordão umbilical são funcionalmente similares às derivadas de medula óssea
(fonte clássica). Esse tecido apresenta-se como atraente fonte alternativa dessas células
também por: existir em abundância, ser normalmente descartado pós-parto, além do
procedimento para sua coleta não ser invasivo. No momento, a terapia celular representa
grande esperança na medicina regenerativa devido à perspectiva de se reparar a perda de
tecidos e/ou até mesmo órgãos nobres do corpo. As pesquisas com células-tronco ainda estão
num estágio onde muitas questões científicas precisam ser resolvidas até suas aplicações se
tornarem definitivas. Existem inúmeros métodos de isolamento dependendo tanto da origem
do tecido, quanto dos procedimentos adotados pelos laboratórios. Neste trabalho analisamos a
obtenção de células-tronco da geléia de Wharton de cordão umbilical humano através do
método da migração espontânea . Todos os experimentos foram realizados de acordo com
protocolo aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da UFPE (n°.420/2007). O isolamento
de células-tronco foi feito a partir da população primária de células mesenquimais.
Utilizamos, para isso uma nova metodologia da seleção celular - imunomagnética columnfree
conhecida como EasySep Magnet - EMA , no modo de seleção positiva pelo CD44 ou
CD90. A eficácia do isolamento foi comprovada por citometria de fluxo (FACSCalibur). A
mesma metodologia foi utilizada para detecção da expressão dos marcadores de superfície nas
membranas citoplasmáticas das células (fenotipagem). A diferenciação osteogênica foi
induzida durante três semanas com meio de cultura suplementado com indutores: ácido
ascórbico, dexametasona e β-glicerofosfato. Observamos que as células primárias da
migração espontânea (terceira passagem) mostraram presença até 70-80% de células
positivas aos marcadores das células-tronco mesenquimais. Todavia, nas culturas das células
selecionadas mais de 90% das células foram positivas para os marcadores das células-tronco
mesenquimais (CD90+; CD44+; CD29+) e negativas para as de origem hematopoéticas
(CD45-; CD34- e CD31-). O tempo de duplicação das células-tronco foi de 2-3 dias. As
células tiveram morfologia fibroblastóide e possuíram potencial de diferenciação
pronunciado. Especificamente, o estímulo osteogênico originou características osteoblásticas
que foram comprovadas por coloração citohistoquímica (von Kossa) onde se observou o
aparecimento de cristais de hidroxiapatita na matriz extracelular. Desta forma, estabelecemos
que a migração espontânea é um método relativamente simples, que requer menos tempo de
processamento e resulta em considerável quantidade das células com alto índice de
marcadores específicos das células-tronco já na população primária obtida. A seleção positiva
com partículas magnéticas é capaz de aumentar ainda mais a pureza das células-tronco
isoladas de cordão umbilical humano
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/1622 |
| Date | 31 January 2010 |
| Creators | Lizandra de Miranda Oliveira, Aldenise |
| Contributors | Vladimirovich Krasilnikov, Oleg |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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