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Previous issue date: 2013-02-28 / FACEPE / Listeria monocytogenes é um bacilo gram-positivo, intracelular facultativo, transmitido por
alimentos, que pode causar doença, a listeriose, em indivíduos susceptíveis. Embora rara, a
listeriose tem grande importância para a saúde pública pela sua alta letalidade. Este trabalho
teve como objetivo, identificar marcadores moleculares para utilização no desenvolvimento
de nova técnica de diagnóstico molecular da listeriose. Os estudos envolveram sorotipagem,
tipagem molecular pela amplificação das sequências 23S, 16S-23S e RAPD, pesquisa de
plasmídios e de genes de virulência (inlA, inlB, inlC, inlJ, hly, iap, plcA, actA) em 135 cepas
de L. monocytogenes de casos humanos e alimentos isoladas no Brasil no período de 1975 a
2001; infecção experimental em camundongos com cepas portando ausência ou alterações em
genes de virulência; e a caracterização de isolados de um caso de endocardite atendido numa
unidade de emergência cardiológica em Recife, PE, em 2010. Nenhuma relação foi
encontrada entre a origem das cepas, sorotipos, perfis genéticos, conteúdo plasmidial e
distribuição dos genes de virulência. Os ensaios de infecção experimental em camundongos
também não permitiram estabelecer uma relação entre a presença dos marcadores de
virulência considerados no estudo e as respostas dos animais inoculados. Seis isolados de
hemocultura de um caso de endocardite com identificação presuntiva de Listeria spp. foram
classificados como L. monocytogenes sorotipo 4b pela amplificação por PCR dos genes 23S,
lmo2243 e ORF2210 específicos do gênero Listeria, espécie L. monocytogenes e sorotipo b
respectivamente. Todos os genes de virulência pesquisados foram detectados por PCR nas
amostras e a análise do perfil de amplificação da sequência 16S-23S revelou que os seis
isolados são uma mesma cepa. Embora esses estudos não tenham revelado nenhum marcador
molecular de patogenicidade, a alta frequência de genes de virulência observada entre cepas
dos sorotipos mais patogênicos (1/2a, 1/2b, 4b) evidencia o potencial patogênico nas cepas
brasileiras de L. monocytogenes e a necessidade de incrementar a vigilância e diagnóstico
dessa bactéria. Considerando a prevalência dos sorotipos 1/2a, 4b nas amostras clinicas e dos
sorotipos 1/2a, 1/2b, 4b em alimentos, desenvolvemos e padronizamos um procedimento
baseado em LAMP (loop-mediated isothermal amplification) para identificação desses
sorotipos. A técnica é rápida e de fácil operacionalização, utiliza um bloco de aquecimento ou
banho-maria e o produto da reação pode ser visualizado a olho nu mediante adição de
reagentes fluorescentes. O procedimento padronizado mostrou-se sensível, capaz de detectar
100pg de DNA ou 104 UFC, e espécie - específica, capaz de diferenciar L. monocytogenes de
espécies intimamente relacionadas geneticamente. Outros sorotipos intimamente relacionados
(3a, 3b, 4e e 4d) foram amplificados sem detrimento da técnica porque são raramente
encontrados em amostras humanas e animais. A técnica LAMP se apresenta como uma
alternativa fácil e rápida para diagnóstico e tipagem de L. monocytogenes especialmente para
os programas de vigilância e investigação epidemiológica.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/13344 |
| Date | 28 February 2013 |
| Creators | COSTA, Ana Paula Rocha da |
| Contributors | ALMEIDA, Alzira Maria Paiva de, LEAL, Nilma Cintra |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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