L’athérosclérose est un phénomène inflammatoire caractérisé par un dépôt sur les artères de macrophages gorgés de cholestérol également appelés cellules spumeuses. Actuellement, trois principales molécules membranaires sont décrites comme assurant la sortie du cholestérol libre, dont l’ABCA1 (ATP Binding Cassette A1) qui joue un rôle physiologique important. Le but de ce travail est d’étudier l’impact de l’incorporation d’acides gras ω3 et celui de LDL modifiées sur la composition des phospholipides membranaires et d’établir des liens entre la modification de composition des phospholipides et l’altération du fonctionnement de l’ABCA1. Une étude lipidomique a été menée, en utilisant des méthodes de chromatographie couplées à la spectrométrie de masse. Les analyses ont été réalisées au moyen d’un système de chromatographie liquide en phase normale (NP-LC) permettant la séparation des différents phospholipides. La détection a été réalisée à l’aide de spectromètres de masse (MS) basse et ultra-haute résolution, ainsi que d’un détecteur à aérosol chargé. La chromatographie en phase gazeuse permet de connaître les proportions relatives d’acides gras. Ces techniques ont été utilisées pour réaliser une étude sur les paramètres de prétraitement (en amont du traitement des signaux analytiques), de décrire le lipidome de différents types de macrophages et d’établir les modifications de composition des phospholipides lors d’ajout chronique d’acides gras ω3 et/ou de LDL modifiées. Les résultats obtenus ont permis de définir une méthode de prétraitement de données LC-MS, d’évaluer la composition de trois types de macrophages et de modéliser les variations de l’efflux du cholestérol avec les modifications phospholipidiques observées pour les macrophages non spumeux. A partir de ces éléments, des thématiques communes, chimie biologie, ont pu aussi être identifiées comme l’analyse de «l’oxylipidome». / Atherosclerosis is an inflammatory disease characterized by a deposit on the arteries of macrophages full of cholesterol also called foam cells. Currently, three main membrane molecules are described as ensuring the release of free cholesterol, of which ABCA1 (ATP Binding Cassette A1) plays an important physiological role. The purpose of this work is to study the impact of the incorporation of ω3 fatty acids and modified LDL on membrane phospholipids composition and to establish the relationship between modification of the phospholipid composition and functionality of ABCA1. A lipidomic study was conducted using chromatographic methods coupled with mass spectrometry. Analyzes were carried out using normal phase liquid chromatography (NP-LC) allowing the separation of the different phospholipid classes. Detection was performed using low and ultra-high resolution mass spectrometers (MS) and a charged aerosol detector. Gas chromatography is used to determine fatty acids proportions. These techniques were used to study pretreatment parameters, to describe different macrophages lipidome and to establish phospholipid modifications during ω3 fatty acids chronic addition and / or modified LDL. The results obtained made it possible to define a method for LC-MS data pretreatment, to evaluate the composition of three types of macrophages, to model the variations of cholesterol efflux with the phospholipid modifications observed for non-foamy macrophages. From these elements, common themes, chemistry biology, could also be identified as the analysis of "oxylipidome".
| Identifer | oai:union.ndltd.org:theses.fr/2018SACLS198 |
| Date | 21 September 2018 |
| Creators | Sayet, Guillaume |
| Contributors | Université Paris-Saclay (ComUE), Chaminade, Pierre |
| Source Sets | Dépôt national des thèses électroniques françaises |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation, Text |
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