A ciclofosfamida (CPA) é um agente alquilante da classe das oxazafosforinas amplamente usada no tratamento de múltiplas formas de câncer e de doenças autoimunes em adultos e crianças. A CPA está disponível na clínica como racemato, no entanto, dados pré-clínicos demonstraram diferenças na eficácia e toxicidade dos seus enantiômeros, sendo o enantiômero (S)-(-)-CPA o de maior índice terapêutico. O presente estudo investigou a enantiosseletividade e a influência do CYP2B6, CYP2C9, CYP2C19 e CYP3A na disposição cinética da ciclofosfamida (CPA) em pacientes portadoras de câncer de mama. Foram incluídas na investigação 15 pacientes previamente submetidas ao procedimento de retirada do tumor e tratadas com CPA racêmica (900-1000 mg) e epirrubicina. A atividade in vivo do CYP3A foi avaliada empregando o midazolam como fármaco marcador. As amostras seriadas de sangue foram coletadas até 24 horas após a administração do primeiro ciclo da CPA. Os enantiômeros da CPA foram extraídos do plasma, usando mistura de acetato de etila:clorofórmio (75:25, v/v) e separados na coluna Chiralcel® OD-R com fase móvel constituída por acetonitrila:água (25:75, v/v), contendo 0,2% de ácido fórmico. Os enantiômeros da CPA foram analisados por LC-MS-MS, sendo que os íons protonados e seus respectivos íons-produtos foram monitorados nas transições 261>141 para a CPA e 189>104 para o padrão interno (antipirina). A recuperação foi maior que 95% para ambos os enantiômeros da CPA e o limite de quantificação foi de 2,5 ng/mL de plasma para cada enantiômero. Os coeficientes de variação e os erros relativos obtidos na avaliação da precisão e exatidão intra e inter-ensaios foram menores que 10%. Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados empregando o programa WinNonlin e utilizando modelo monocompartimental e cinética de primeira ordem. Os parâmetros farmacocinéticos com razões enantioméricas diferentes da unidade foram avaliados com base no teste de Wilcoxon (P0,05). A disposição cinética da CPA é enantiosseletiva em pacientes com câncer de mama, com acúmulo plasmático do enantiômero (S)-(-)-CPA (AUC 195,00 vs 174,80 g.h/mL) em função do clearance preferencial do enantiômero (R)- (+)-CPA (5,13 vs 5,99 L/h). Os clearances de ambos os enantiômeros da ciclofosfamida não diferem em função dos genótipos CYP2B6, CYP2C9 e CYP2C19 e da atividade in vivo do CYP3A avaliada pelo clearance do midazolam. / Cyclophosphamide (CPA) is an alkylating oxazaphosphorine agent widely used in the treatment of multiple forms of cancer and autoimmunes disesases in adults and children. CPA is used as a racemic mixture, although preclinical data have demonstrated differences in the efficacy and toxicity of its enantiomers, with the (S)-(- )-CPA exhibiting a higher therapeutic index. The present study investigated the enantioselectivity and influence of CYP2B6, CYP2C9, CYP2C19 and CYP3A on the kinetic disposition of cyclophosphamide (CPA) in patients with breast cancer. Fifteen patients previously submitted to removal of the tumor and treated with racemic CPA (900-1000 mg) and epirubicin were included in the study. The in vivo activity of CYP3A was evaluated using midazolam as a marker drug. Serial blood samples were collected up to 24 h after administration of the first cycle of CPA. The CPA enantiomers were extracted from plasma using a mixture of ethyl acetate:chloroform (75:25, v/v) and separated on a Chiralcel® OD-R column, with the mobile phase consisting of acetonitrile:water (25:75, v/v) and 0.2% formic acid. The CPA enantiomers were analyzed by LC-MS-MS, and the protonated ions and their respective ion products were monitored at transitions of 261>141 for CPA and of 189>104 for the internal standard (antipyrine). Recovery was higher than 95% for both CPA enantiomers and the quantification limit was 2.5 ng/mL plasma for each enantiomer. The coefficients of variation and relative errors obtained for the evaluation of the intra- and interassay precision and accuracy were less than 10%. The pharmacokinetic parameters were calculated with the WinNonlin program using a monocompartmental model and first-order kinetics. The pharmacokinetic parameters presenting enantiomer ratios different from one were evaluated using the Wilcoxon test (P0.05). The kinetic disposition of CPA was enantioselective in patients with breast cancer, with plasma accumulation of the (S)-(-)-CPA enantiomer (AUC 195.00 vs 174.80 g.h/mL) due to the preferential clearance of the (R)-(+)-CPA enantiomer (5.13 vs 5.99 L/h). Clearances of both CPA enantiomers did not differ between the CYP2B6, CYP2C9 and CYP2C19 genotypes or as a function of in vivo activity of CYP3A evaluated by the midazolam clearance.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-17112008-222036 |
| Date | 05 September 2008 |
| Creators | Fernandes, Bruno José Dumêt |
| Contributors | Lanchote, Vera Lucia |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Tese de Doutorado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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