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Previous issue date: 2011 / Instituto Nacional de Câncer. Centro de Transplantes de Medula Óssea. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A malária, doença infecciosa causada por parasitas do gênero Plasmodium, é um conhecido flagelo das populações humanas desde a antiguidade. Na falta de uma vacina, a política de controle baseia-se principalmente no diagnostico rápido e no tratamento dos casos. Devido ao impacto da quimiorresistência parasitária no controle, faz-se necessário o constante monitoramento da eficácia de drogas. Portanto, para contextualizar o Brasil no panorama mundial, nosso objetivo se constituiu em realizar um estudo descritivo sobre a ocorrência de mutações (SNPs) nos genes considerados marcadores moleculares associados à resistência como pfcrt, pfmdr1, pfdhfr, pfdhps e pvdhfr, assim como em genes potencialmente associados à quimiorresistência (pfatpase6 e pvmdr1) em isolados de P. falciparum e P. vivax coletados nas cidades Amazônicas de Porto Velho, Paragominas e Manaus. Para tal, utilizamos PCRs seguidas do sequenciamento de DNA. Ao investigarmos a ocorrência de mutações nos genes pfcrt, pfdhfr e pfdhps em amostras de P. falciparum provenientes de Porto Velho e Paragominas foi possível detectar 1 isolado apresentando um haplótipo ou perfil de sensibilidade CVMNK no gene pfcrt e ACNSVI no gene pfdhfr e, além disso, pudemos observar uma redução no numero de mutações no gene pfdhps, ao confrontarmos os nossos resultados com os de um estudo retrospectivo.
Em relação ao P. vivax, a análise do gene pvdmr1 num conjunto de amostras provenientes de Paragominas revelou o predomínio de mutações no códon 976 do gene pvmdr1 (preliminarmente associado com a resistência à cloroquina) e a presença de haplótipos duplo-mutante FRTNI e triplo-mutante FRTNL para o gene pvdhfr. dando continuidade à caracterização de P. falciparum no Brasil, foi estabelecido um registro de base da ocorrência de mutações nos genes pfmdr1 e pfatpase6, em amostras procedentes de Porto Velho, Paragominas e Manaus. Tal análise permitiu a identificação de um haplótipo prevalente NEF/CDVY no pfmdr1, assim como identificação de mutantes em um único códon ou duplo-mutantes (630 e/ou 402) no caso do gene pfatpase6. também não foi encontrada a mutação 769N, associada com a diminuição da susceptibilidade ao arteméter. Concluímos que: (a) existem no Brasil popluações parasitárias de P. falcipoarum portando haplótipos sensíveis para o gene pfcrt e o pfdhfr; (b) a mutação no códon 976 no gene pfmdr1 pode não ser válida para o monitoramento da resistência à cloroquina em isolados brasileiros de P. vivax; (c) as populações de P. vivax avaliadas apresentaram mutações no gene pvdhfr, apesar de nunca ter sido instituído o tratamento com sulfadoxina-pirimetamina para malária vivax e; (d) as amostras de P. falciparum avaliadas não portavam todos os alelos do gene pfmdr1 associados a um potencial desenvolvimento de resistência à combinação arteméter-lumefantrina / Acknowledged as a febrile syndrome of human populat
ions since ancient times, malaria is an infectious
disease
caused by parasites of the
Plasmodium
genus. In the absence of a reliable vaccine, the c
ontrol policy is based
mainly on diagnosis and case management. Since para
site chemoresistance is a major factor hampering th
e
disease control, there is a need for drug efficacy
surveillance. Therefore, to place Brazil into the w
orld scenario,
our goal was to conduct a descriptive study on the
occurrence of mutations (SNPs) in genes acknowledge
d as
molecular markers to chemoresistance as
pfcrt
,
pfmdr1
,
pfdhfr
,
pfdhps
and
pvdhfr
, as well as in genes
potentially associated with chemoresistance (
pfatpase6
and
pvmdr1
) in isolates of
P. falciparum
and
P. vivax
collected in Porto Velho, Manaus and Paragominas ci
ties in Brazilian Amazon. With this aim, we used PC
R
technique followed by DNA sequencing. The analysis
of mutations in
pfcrt
,
pfdhfr
and
pfdhps
genes in
P.
falciparum
samples from Porto Velho and Paragominas allowed us
to detect a single isolate presenting a
sensitivity profile CVMNK in the
pfcrt
gene and ACNCSVI in the
pfdhfr
gene. Additionally, we could observe a
decrease in the mutations number for the
pfdhps
gene, when comparing our results with those from a
retrospective study. Concerning
P. vivax
, the analysis from Paragominas samples revealed th
e full
predominance of mutations at codon 976 in the
pvmdr1
gene (preliminarily associated with chloroquine
resistance), and the presence of double-and triple-
mutant haplotypes (FRTNI and FRTNL) for the
pvdhfr
gene.
Lastly, to establish a genotypic baseline for
pfmdr1
and
pfatpase6
genes,
P. falciparum
isolates from Porto
Velho, Manaus and Paragominas were also evaluated.
This analysis allowed us to identify a major haplot
ype
NEF/CDVY in
pfmdr1
gene, as well as to detect a single-mutant (in 630
or 402 codons) and double-mutant (in
630 and 402 codons) when
pfatpase6
gene was surveyed. The 769N mutation, associated w
ith decreased
susceptibility to artemether, was not detected. We
conclude that: (a) there exist
P. falciparum
populations
presenting sensitive alleles for the gene
pfcrt
and
pfdhfr
in Brazil; (b) the 976 mutation in the
pvmdr1
gene may
not be valuable for monitoring chloroquine resistan
ce in Brazilian
P. vivax
isolates; (c)
P. vivax
populations
herein investigated presented mutations in the
pvdhfr
gene, although sulphadoxine-pyrimethamine therapy
has never been preconized for malaria vivax and; (d
) the
P. falciparum
samples
analyzed did not carry all alleles
in the
pfmdr1
gene that were associated with a potential develop
ment of resistance to artemether-
lumefantrine
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/4274 |
| Date | January 2011 |
| Creators | Gama, Bianca Ervatti |
| Contributors | Oliveira, Ricardo Lourenço, Brito, Cristiana Ferreira Alves de, Ferreira, Marcelo Urbano, Lima, Leila de Mendonça, Cruz, Maria de Fátima Ferreira da |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | Bianca Ervatti Gama, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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